农业农村部公告第628号-5-2022 （代替农业部1943号公告-3-2013）转基因植物及其产品环境安全检测 抗虫棉花 第1部分：对靶标害虫的抗虫性.pdf

2022?12?19发布2023?03?01实施转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第1部分：对靶标害虫的抗虫性04中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号：XXXX-XXXX65.020.01BEvaluation of environmental impact of genetically modified plantsand its derived productsInsect-resistant cottonPart 1:Evaluation of insect pest resistance中华人民共和国农业农村部发 布农业农村部公告第 628 号52022CCS代替农业部 1943 号公告3?2013农业农村部公告第 号 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.本文件代替农业部 号公告 转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第部分:对靶标害虫的抗虫性,与农业部 号公告 相比,除结构调整和编辑性修改外,主要技术变化如下:修改了“范围”.修改为“适用于转基因抗虫棉对靶标害虫棉铃虫室内生物测定和田间抗虫性测定”(见第章,年版的第章).修改了“术语和定义”.删除“抗性稳定性”和“抗性纯合度”个术语,增加“蕾铃被害率”和“蕾铃被害减退率”的术语(见第章,年版的第章).修改了“供试棉铃虫”.修改为“室内人工饲养的日龄棉铃虫幼虫”(见 ,年版的 ).修改了“试验品种”.修改后分为“室内生物测定”要求的试验品种和“田间抗虫性测定”要求的试验品种(见 ,年版的 ).修改了“试验方法”.修改为试验方法包括“播种”和“抗虫性检测”两部分,其中,“抗虫性检测”又细分为“室内生物测定”和“田间抗虫性测定”两部分(见第章,年版的第章).删除了“对靶标害虫抗性的稳定性与纯合度生物测定”涉及的相关内容(见 年版的 ).删除了“对靶标害虫抗虫效率的田间检测”涉及的相关内容(见 年版的 ).增加了“田间抗虫性测定”的试验设计、接虫时期、接虫方法、结果记录、结果分析与描述(见 ).增加了附录A中表A (见附录A中表A ).请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由中华人民共和国农业农村部提出.本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口.本文件起草单位:农业农村部科技发展中心、中国农业科学院棉花研究所、安阳工学院.本文件主要起草人:雒珺瑜、张旭冬、张元臣、崔金杰、王颢潜、朱香镇、李东阳、张开心、姬继超、王丽、马艳、任相亮、宋贤鹏、王丹、胡红岩、马亚杰.本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:农业部 号公告 ;农业部 号公告 .农业农村部公告第 号 转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第部分:对靶标害虫的抗虫性范围本文件规定了转基因抗虫棉花对靶标害虫棉铃虫抗虫性的检测方法.本文件适用于转基因抗虫棉花对靶标害虫棉铃虫室内生物测定和田间抗虫性测定.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B 经济作物种子第部分:纤维类术语和定义下列术语和定义适用于本文件.生物测定b i o a s s a y利用人工接虫的方法评价棉花的组织器官对靶标害虫的抗虫性效果.蕾铃被害率d a m a g e dr a t eo fb u d a n db o l l被靶标害虫危害后受害棉花蕾铃(花)占蕾铃(花)总数的百分率.蕾铃被害减退率 r e d u c t i o nr a t eo fd a m a g e db u da n db o l l对照材料蕾铃被害率减去受试材料蕾铃被害率的差值与对照材料蕾铃被害率的比率.幼虫死亡率 l a r v a lm o r t a l i t y靶标害虫幼虫取食棉花后死亡幼虫数占供试幼虫总数的百分率.要求 供试棉铃虫室内人工饲养的日龄棉铃虫幼虫.试验品种 室内生物测定受试转基因抗虫棉品种(系)、阴性对照棉花品种(系)(非转基因棉花对照品种)、阳性对照棉花品种(转基因抗虫棉对照品种).田间抗虫性测定受试转基因抗虫棉品种(系)、非转基因棉花品种(系)、感虫对照棉花品种(非转基因棉花品种).上述棉花种子质量应达到G B 中对种子质量要求.资料记录 试验地名称与位置记录试验地的名称、试验的具体地点、经纬度或全球地理定位系统(G P S)地标.绘制小区示意图.农业农村部公告第 号 土壤资料记录土壤类型、土壤肥力、排灌情况和土壤覆盖物等内容.描述试验地近年种植情况.试验地周围生态类型 自然生态类型记录与农业生态类型地区的距离及周边植被情况.农业生态类型记录试验地周围的主要栽培作物及其他植被情况,以及当地棉田常见病、虫、草害的名称及危害情况.气象资料记录试验期间试验地降水(降水类型,日降水量,以mm表示)和温度(日平均温度、最高和最低温度、积温,以表示)的资料.记录影响整个试验期间试验结果的恶劣气候因素,例如严重或长期的干旱、暴雨、冰雹等.试验方法 播种按当地春棉或夏棉(短季棉)常规播种时期、播种方式和播种量进行播种.抗虫性检测 室内生物测定 试验设计分别种植受试转基因抗虫棉品种(系)、阴性对照棉花品种(系)(非转基因棉花对照品种)、阳性对照棉花品种(转基因抗虫棉对照品种),随机区组设计,次重复,小区面积不小于 m,常规耕作管理,靶标害虫发生期不喷施杀虫剂.取样方法在靶标害虫第二、第三、第四代发生盛期,分别从转基因抗虫棉品种(系)田、阴性对照棉花品种田和阳性对照棉花品种田采集棉花叶片,每处理每小区随机选择 株正常生长的棉花,每株采集片棉叶.靶标害虫第二代、第三代发生盛期采集棉株顶部第一片完全展开的叶片,第四代靶标害虫发生盛期采集棉株上部侧部果枝顶端展开嫩叶,保持样品新鲜,及时带回实验室进行检测.操作在适合的养虫器皿中,放入片棉花叶片,并保湿;每张叶片接入日龄靶标害虫幼虫头.接虫后,封闭养虫器皿;放于 的养虫室或培养箱中饲养.结果记录接虫后第d调查幼虫死亡状况.记录幼虫死亡数量和存活虫数,检查时用毛笔尖轻触虫体,无反应则记入死亡虫数.分别计算第二、第三、第四代靶标害虫发生盛期各处理棉花叶片上日龄棉铃虫幼虫的死亡率(x)和校正死亡率(y).a)幼虫死亡率按公式()计算.xnN ()式中:x 幼虫死亡率的数值,单位为百分号();n 死虫数的数值,单位为头;N 接虫数的数值,单位为头.b)幼虫校正死亡率按公式()计算.yxxx ()式中:y 幼虫校正死亡率的数值,单位为百分号();x 处理死亡率的数值,单位为百分号();农业农村部公告第 号 x 阴性对照棉花品种(系)死亡率的数值,单位为百分号().注:计算结果保留小数点后位数字.采用统计学方法计算每种棉花个小区幼虫校正死亡率的平均值(y)和标准差(S).幼虫校正死亡率表述为(yS).结果分析与表述用方差分析的方法分别比较第二、第三、第四代靶标害虫发生盛期转基因抗虫棉品种(系)与阳性对照棉花品种的抗虫性差异;根据第二、第三、第四代靶标害虫发生盛期各处理棉叶上棉铃虫幼虫校正死亡率的平均值,按附录A中的表A 判定抗虫性水平.结果表述为:a)第二代(第三代、第四代)靶标害虫发生盛期受试转基因抗虫棉品种(系)上日龄棉铃虫幼虫的校正死亡率为,比阳性对照棉花品种高(低),差异达(未达)显著(极显著)水平;b)受试转基因抗虫棉品种(系)室内生物测定的抗虫性水平为.田间抗虫性测定 试验设计分别种植受试转基因抗虫棉品种(系)、非转基因棉花品种(系)、感虫对照棉花品种(非转基因棉花品种),随机区组设计,次重复,小区面积不小于 m,常规耕作管理,试验期间不喷施杀虫剂.不同接虫试验小区之间间隔m的过道,避免害虫在不同小区之间扩散.接虫时期棉花盛蕾期,选择不下雨天气进行人工接虫.接虫方法对棉花植株进行挂牌标记后接虫,每小区挂牌棉花植株不少于 株.采用人工接虫的方法,每株接 头到棉花的顶端嫩心上.接虫d后,感虫对照植株的受害率低于 时,应进行第二次接虫.结果记录接虫后 d d调查不同处理棉株上的蕾铃被害数、健康蕾铃数.每小区调查 株,计算受试转基因抗虫棉品种(系)、非转基因棉花品种(系)和感虫对照棉花品种的蕾铃被害率(z).以感虫对照棉花品种为对照,计算受试转基因抗虫棉品种(系)、非转基因棉花品种(系)的蕾铃被害减退率(f).蕾铃被害率按公式()计算.zbB ()式中:z 蕾铃被害率的数值,单位为百分号();b 被害蕾铃数的数值,单位为个;B 总蕾铃数的数值,单位为个.蕾铃被害减退率按公式()计算.fzzz ()式中:f 蕾铃被害减退率的数值,单位为百分号();z 感虫对照棉花品种蕾铃被害率的数值,单位为百分号();z 处理蕾铃被害率的数值,单位为百分号().注:计算结果保留小数点后位数字.采用统计学方法计算每种棉花个小区蕾铃被害减退率平均值(f)和标准差(S).蕾铃被害减退率表述为(fS).结果分析与表述 对照处理结果分析农业农村部公告第 号 感虫对照棉花品种(非转基因棉花品种)的平均蕾铃被害率达 以上,试验正常;否则,需要查找原因,重新试验.结果表述用方差分析的方法比较受试转基因抗虫棉品种(系)与非转基因棉花品种(系)对靶标害虫的抗虫性差异.根据受试转基因抗虫棉品种(系)蕾铃被害减退率的平均值,按附录A中的表A 判定抗虫性水平.结果表述为:a)受试转基因抗虫棉品种(系)蕾铃被害减退率为,比非转基因棉花品种(系)高(低),差异达(未达)显著(极显著)水平;b)受试转基因抗虫棉品种(系)田间抗虫性测定的抗虫性水平为.农业农村部公告第 号 附录A(规范性)转基因抗虫棉室内生物测定和田间抗虫性测定抗虫性评价标准转基因抗虫棉室内生物测定和田间抗虫性测定抗虫性评价标准见表A 和表A .表A 转基因抗虫棉室内生物测定抗虫性评价标准抗虫性水平幼虫校正死亡率(y),高抗y 抗 y 中抗 y 低抗 y 感 y表A 转基因抗虫棉田间抗虫性测定抗虫性评价标准抗虫性水平蕾铃被害减退率(f),高抗f 抗 f 中抗 f 低抗 f 感 f