大承气汤对肠源性脓毒症小鼠的保护作用及机制.pdf
《大承气汤对肠源性脓毒症小鼠的保护作用及机制.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《大承气汤对肠源性脓毒症小鼠的保护作用及机制.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、中国药房 2023年第34卷第17期China Pharmacy 2023 Vol.34 No.17 2101 大承气汤对肠源性脓毒症小鼠的保护作用及机制 钟旋 1,李袁袁 2,3,林荣锋 2,3#,姚韵婕 2,刘伟琼 2,罗毅平 1,凌家俊 2(1.广东省妇幼保健院成人重症监护室,广州511442;2.广州中医药大学中药学院,广州510006;3.东莞广州中医药大学研究院,广东 东莞523808)中图分类号 R965;R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2023)17-2101-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.17.10摘要 目
2、的 研究大承气汤(DCQD)对肠源性脓毒症小鼠的保护作用,并从Toll样受体4/髓分化因子88(TLR4/MyD88)信号通路探讨其可能机制。方法 将SPF级雄性C57BL/6J小鼠分为假手术(Sham)组、假手术+大承气汤高剂量(Sham+DCQD-H)组、模型(CLP)组、大承气汤低剂量(DCQD-L)组、大承气汤高剂量(DCQD-H)组、阳性对照(Positive)组。CLP组、DCQD-L组、DCQD-H组和Positive组小鼠均以盲肠结扎穿刺法建立肠源性脓毒症模型;DCQD-L组和DCQD-H组小鼠在术前3 d和术后7 d每天分别按4、8 g/kg(按生药量计)灌胃给予大承气汤;P
3、ositive组在术前2 h腹腔注射乌司他丁1次,术后7 d每天腹腔注射乌司他丁1次,剂量均为50 000 U/kg。Sham组和Sham+DCQD-H组仅暴露盲肠,不做结扎及穿刺;Sham+DCQD-H组在术前3 d和术后7 d每天灌胃给予大承气汤(8 g/kg,按生药量计);Sham组和CLP组每天均灌胃和腹腔注射生理盐水各0.2 mL,连续10 d。术后7 d每天评估小鼠脓毒症严重程度,并评估小鼠7 d生存率;末次给药1 h后,检测小鼠血清和回肠组织中肿瘤坏死因子(TNF-)、白细胞介素6(IL-6)水平;观察小鼠肝、肺、肾、回肠组织的病理学形态变化;检测小鼠回肠组织中TLR4、MyD8
4、8 mRNA表达水平。结果 与CLP组比较,DCQD-L组、DCQD-H组小鼠脓毒症评分,血清和回肠组织中TNF-、IL-6水平(DCQD-L组回肠组织中IL-6除外),肝、肺、肾、回肠组织损伤评分,回肠组织中TLR4、MyD88 mRNA表达水平均显著降低(P0.05或P0.01);7 d生存率(DCQD-L组除外)显著升高(P0.05);小鼠肝细胞组织损伤明显改善,炎症浸润和凋亡减少;肺组织损伤有所缓解,肺泡萎缩、出血、水肿均有不同程度的改善;肾组织损伤改善,肾小管管腔扩张减弱;回肠组织损伤及水肿均有明显改善。结论 大承气汤对肠源性脓毒症模型小鼠具有保护作用,其作用机制可能与抑制全身炎症、
5、减轻多器官损伤以及下调TLR4/MyD88信号通路有关。关键词 大承气汤;脓毒症;炎症因子;器官损伤;Toll样受体4/髓分化因子88信号通路Protective effects and mechanism of Dachengqi decoction on intestinal septic miceZHONG Xuan1,LI Yuanyuan2,3,LIN Rongfeng2,3,YAO Yunjie2,LIU Weiqiong2,LUO Yiping1,LING Jiajun2 (1.Medical Intensive Care Unit,Guangdong Women and Chi
6、ldren Hospital,Guangzhou 511442,China;2.School of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;3.Dongguan Institute of Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Dongguan 523808,China)ABSTRACTOBJECTIVE To study the protective effects of Dacheng
7、qi decoction(DCQD)on intestinal septic mice,and to explore the possible mechanisms from the Toll-like receptor 4(TLR4)/myeloid differentiation factor 88(MyD88)signaling pathway.METHODS The SPF male C57BL/6J mice were randomly divided into Sham group,Sham+DCQD-H group,model(CLP)group,DCQD-L group,DCQ
8、D-H group and Positive group.The model of intestinal sepsis was established by cecal ligation and puncture in CLP group,DCQD-L group,DCQD-H group and Positive group.Three days before the operation and seven days after the operation,DCQD-L group and DCQD-H group were given DCQD intragastrically at 4,
9、8 g/kg(calculated by crude drug),respectively.Positive group was given ulinastatin intraperitoneally 2 h before operation and 7 d after the operation(at 50 000 U/kg).In Sham group and Sham+DCQD-H group,only cecum of mice was exposed without ligation and puncture.Sham+DCQD-H group was given DCQD intr
10、agastrically(8 g/kg,calculated by crude drug)3 days before the operation and 7 days after the operation.Both the Sham group and CLP group were given normal saline 0.2 mL intragstrically and intraperitoneally each day,for 10 consecutive days.After the operation,the severity of sepsis was assessed,and
11、 the 7 d survival rate of mice was assessed.One hour after the last medication,the levels of tumor necrosis factor-(TNF-)and interleukin-6(IL-6)in serum and ileum of mice were determined;the pathological and morphological changes of mice s liver,lung,kidney and ileum were observed;mRNA expressions o
12、f the TLR4 and MyD88 in ileum were tested.RESULTS Compared with CLP group,基金项目 广东省中医药局科研项目(No.20211045);东莞广州中医药大学研究院培育项目(No.2023PY0203)第一作者 主治医师,硕士。研究方向:妊娠合并内科疾病、妊娠急危重症。E-mail:#通信作者 助理研究员,博士。研究方向:中药新药研究及药物制剂新技术。E-mail: 2102 China Pharmacy 2023 Vol.34 No.17中国药房 2023年第34卷第17期sepsis score,the levels of
13、 TNF-and IL-6 in serum and ileum(except for IL-6 in ileum of DCQD-L group),damage score of the liver,lung,kidney and ileum,mRNA expressions of TLR4 and MyD88 in ileum were all decreased significantly in DCQD-L group and DCQD-H group(P0.05 or P0.01),while 7 d survival rate(except for DCQD-L group)was
14、 increased significantly(P0.05).The damage to liver tissue in mice was significantly improved,and inflammation infiltration and apoptosis were reduced;lung tissue damage had been alleviated,with varying degrees of improvement in alveolar atrophy,bleeding and edema;the renal tissue damage was improve
15、d and weakened dilation of renal tubular lumen was weakened;the damage and edema of ileal tissue were significantly improved.CONCLUSIONS DCQD may exert a protective role on intestinal septic model mice.The mechanism may be related to the inhibition of systemic inflammation,the reduction of multiple
16、organ damage,and down-regulation of TLR4/MyD88 signaling pathway.KEYWORDSDachengqi decoction;sepsis;inflammatory factor;organ damage;TLR4/MyD88 signaling pathway脓毒症是全身性炎症反应综合征,可发展为严重的脓毒血症和脓毒症休克1。其可引起机体过度的炎症反应,造成多器官损伤,进而引发多器官功能障碍,使患者病死率升高2。脓毒症的临床治疗非常棘手,主要采用非特异性治疗(如液体复苏、肺保护性通气、控制感染、改善血流动力学等)和对症治疗(如防治器
17、官功能衰竭和休克等)3。由于目前尚无特异性治疗方法,其病死率仍然高达36.6%4。中医可采用通腑降下法治疗脓毒症,大承气汤是该治法的代表方剂之一。大承气汤源于张仲景 伤寒论,由大黄、枳实、厚朴和芒硝组成,是 中国脓毒症早期预防和阻断急诊专家共识 治疗腑气不通型脓毒症的推荐用药4。已有文献报道,大承气汤可缩短脓毒症患者的机械通气及住ICU时间,改善急性生理和慢性健康状况(acute physiology and chronic health evaluation,APACHE)评分和脓毒症相关序贯器官衰竭(sequential organ failure assessment,SOFA)评分,提
18、高治愈率5,且对脓毒症胃肠损伤6、脓毒症肺损伤5、急性胰腺炎并发肝损伤7等疾病均具有较好的治疗效果,但其作用机制尚不清楚,且相关的基础研究较少。采用中药配方颗粒制备的大承气汤在保持传统汤剂成分特点的基础上,不仅成分稳定可控,还具有较明确的药动学数据8。基于此,本研究拟采用中药配方颗粒制备大承气汤,并开展其改善脓毒症的药效学研究。Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)是最早被人们发现且研究最为广泛的TLR家族成员,其在脓毒症的发病机制中扮演着重要的角色9。脓毒症发生时,TLR4可通过识别并结合病原微生物细胞壁上的脂多糖激活其下游髓分化因子88(myeloid di
19、fferentiation factor 88,MyD88)依赖性通路,进而促进白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-,TNF-)等炎症因子的释放10。因此,TLR4/MyD88信号通路在脓毒症的发病机制中发挥了重要作用。本研究以经典的盲肠穿刺法复制肠源性脓毒症模型小鼠,考察大承气汤对肠源性脓毒症小鼠的保护作用,并从TLR4/MyD88信号通路探讨其可能机制,以期为大承气汤治疗脓毒症的机制研究提供实验参考。1材料1.1主要仪器本研究所用主要仪器有 ST16 型离心机(美国Thermo Fisher Scientific公
20、司)、DG5033A型多功能酶标仪(南京东华电子科技有限公司)、JB-P5型石蜡组织包埋机(武汉俊杰电子有限公司)、RM2016型病理切片仪(上海徕卡仪器有限公司)、7500型荧光定量聚合酶链式反 应(PCR)仪(美 国 Applied Biosystems 公 司)、SMA4000型微量核酸定量仪(美国Merinton公司)。1.2主要药品与试剂大黄、枳实、厚朴、芒硝的配方颗粒购自四川新绿色药业科技发展有限公司,参考大承气汤处方(大黄12 g、枳实12 g、厚朴24 g、芒硝9 g),按文献8方法加入煮沸的蒸馏水适量,配制成质量浓度分别为1、0.5 g/mL的大承气汤药液(以生药量计),备用
21、。注射用乌司他丁(批号032104073,规格100 000 U)购自广东天普生化医药股份有限公司;戊巴比妥钠(批号1905020301)购自美国Sigma公司;TNF-酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(批号RX202412M)、IL-6 ELISA试剂盒(批号RX203049M)均购自泉州睿信生物科技有限公司;TRIzol Reagent试剂盒(批号DP424)购自天根生化科技(北京)有限公司;逆转录试剂盒(批号K1622)购自美国Thermo Fisher Scientific公司;荧光实时定量PCR检测试剂盒(批号AOPR-1200)购自广州复能基因有限公司。1.3实验动物本研究所用
22、动物为C57BL/6J雄性小鼠,共60只,体重为2325 g,由广州中医药大学动物实验中心提供,动物生产许可证号为SCXK(粤)2019-0202。动物饲养于广州中医药大学中药学院SPF级动物房(温度为2426,湿度为45%55%,自然昼夜节律光照),自由获中国药房 2023年第34卷第17期China Pharmacy 2023 Vol.34 No.17 2103 取食物和水。本实验经过广东省妇幼保健院医学伦理委员会批准,批准号为广东省妇幼保健院医伦第202001070号。2方法2.1实验分组、造模与给药将60只C57BL/6J小鼠按体重随机分为6组,分别为假手术(Sham)组、假手术+大承
23、气汤高剂量(Sham+DCQD-H)组、模型(CLP)组、大承气汤低剂量(DCQD-L)组、大承气汤高剂量(DCQD-H)组、阳性对照(Positive)组,每组10只。CLP组、DCQD-L组、DCQD-H组和Positive组小鼠均以盲肠结扎穿刺法建立肠源性脓毒症模型11。DCQD-L组和DCQD-H组在术前3 d和术后7 d每天灌胃给予大承气汤(剂量分别为4、8 g/kg12,按生药量计);Positive 组在术前 2 h 腹腔注射乌司他丁 1 次,术后7 d每日腹腔注射乌司他丁1次,剂量均为50 000 U/kg13。Sham组仅暴露盲肠,不做结扎及穿刺;Sham+DCQD-H组仅暴
24、露盲肠,不做结扎及穿刺,并在术前3 d和术后7 d每天灌胃给予大承气汤8 g/kg(按生药量计);Sham组和CLP组每天均灌胃和腹腔注射生理盐水各0.2 mL,连续10 d。2.2小鼠脓毒症评分与7 d生存率评估采用小鼠脓毒症评分评价各组小鼠脓毒症严重程度14。根据小鼠外观、行为表现、意识水平、对刺激的反应、睁眼反应、呼吸频率和呼吸质量等情况进行综合评分,分值越高,表明脓毒症越严重。术后7 d每天对各组小鼠进行脓毒症评分,并观察其存活情况,绘制7 d生存曲线用以评估其7 d生存率。2.3标本采集当小鼠的脓毒症评分超过21分或小鼠的呼吸频率和呼吸质量得分超过3分时,视为死亡,此时及时进行取材1
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 承气汤 肠源性脓毒症 小鼠 保护 作用 机制
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。