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83 食用菌学报 2023.30（5）：2023.05.粗毛纤孔菌多糖提取工艺优化及体外抗炎作用曹润康1，2，李 诣1，2，包海鹰1，2*，李庆杰1,3*（1吉林农业大学中药材学院，吉林 长春130118；2吉林农业大学菌类中药资源开发及利用重点研究室，吉林 长春130118；3长春中医药大学附属医院中医药研究中心，吉林 长春130103）摘 要：通过单因素实验和响应面实验优化粗毛纤孔菌（Inonotus hispidus）多糖提取工艺，纯化获得均一多糖（INP）；采用ELISA法测定NO和细胞因子IL-6、TNF-含量，采用RT-PCR方法测定炎症相关基因表达量，采用蛋白免疫印迹方法检测p38MAPK/NF-B、AKT信号通路相关蛋白表达量，研究INP（低、中、高剂量分别为125、250、500 gmL-1）对脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7炎症的影响。结果表明：多糖提取工艺为料液比118（gmL）、提取温度 80.5、提取时间 1.9 h，在此条件下多糖得率为(0.6120.057)%。与模型组相比，INP中剂量组的NO、TNF-含量显著降低，高剂量组非常显著降低；高剂量组的IL-6含量显著降低。INP中、高剂量组的IL-1表达量均非常显著降低，高剂量组的TNF-表达量非常显著降低，高剂量组的IL-6表达量显著降低。INP中、高剂量组的p-p38表达量分别非常、极显著降低，高剂量组的p-Jnk1/2表达量极显著降低，低、高剂量组的p-Erk1/2表达量均极显著降低，高剂量组的p-p65表达量非常显著降低，中、高剂量组的IB表达量均非常显著降低，低、中、高剂量组的p-AKT表达量均极显著降低。研究结果表明INP可减轻LPS诱导的细胞炎症损伤，将为粗毛纤孔菌多糖进一步开发利用提供参考。关键词：粗毛纤孔菌；多糖；提取工艺；响应面；抗炎Extraction Optimization and In Vitro Anti-inflammatory Effect of Polysaccharide from Inonotus hispidusCAO Runkang1,2,LI Yi1,2,BAO Haiying1,2*，LI Qingjie1,3*(1 College of Traditional Chinese Medicinal Materials,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,Jilin,China;2 Key Research Laboratory for the Development and Utilization of Fungi Traditional Chinese Medicine Resources,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,Jilin,China;3 Research Center of Traditional Chinese Medicine,the Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130103,Jilin,China)Abstract:A homogeneous polysaccharide named INP was extracted from Inonotus hispidus through optimizing the extraction conditions by single-factor and response surface experiments.Then INP was studied for its effects on lipopolysaccharide(LPS)-induced inflammation in mouse RAW 264.7 macrophages.Three doses of INP,low dose INP at 125 gmL-1,medium dose INP at 250 gmL-1,and high dose INP at 500 gmL-1 were set up.Contents of NO,IL-6,TNF-were determined by ELISA.RT-PCR was used to determine gene expression levels of inflammatory factors,and Western blotting was used to determine protein expression in p38MAPK/NF-B 收稿日期：2023-03-27原稿；2023-04-13修改稿 基金项目：国家自然科学基金（202020035）；吉林省科技发展计划项目（20200404082YY）作者简介：曹润康（1998），男，在读硕士，研究方向为菌物生药学。*本文通信作者 E-mail:；8393009 84 第 30 卷食 用 菌 学 报and AKT signaling pathways.The results showed that the optimized polysaccharide extraction conditions were material-liquid ratio 1:18(g:mL),extraction temperature 80.5,and extraction time 1.9 h.Under these conditions,the polysaccharide yield was(0.6120.057)%.Both NO and TNF-were decreased in the medium dose(P0.05)and high dose(P0.01)INP groups compared with those in the model group.IL-6 content and IL-6 expression were decreased in the high dose INP group.Both medium and high INP doses significantly(P0.01)down regulated the expression of TNF-and IL-1.Low dose INP decreased the expression of p-Erk1/2(P0.001)and p-AKT (P0.001).Medium dose INP decreased the expression of p-p38(P0.01),IB(P0.01),and p-AKT (P0.001).High dose INP decreased the expression of p-p38(P0.01),p-Jnk1/2(P0.001),p-Erk1/2(P0.001),p-p65(P0.01),IB(P0.01),and p-AKT(P0.01).INP alleviated LPS-induced cell inflammatory damage,and thus provided a reference for development and utilization of polysaccharides from I.hispidus in the future.Key words:Inonotus hispidus;polysaccharide;extraction process;response surface;anti-inflammation粗毛纤孔菌（Inonotus hispidus）为隶属于担子菌门（Basidiomycota），蘑菇纲（Agaricomycetes），锈革孔菌目（Hymenochaetales），锈革孔菌科（Hymenochaetaceae）的珍贵药用真菌1。多糖是粗毛纤孔菌的重要活性成分，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等药理作用2。目前，粗毛纤孔菌多糖提取方法多种多样，热水浸提法具有成本低、操作简单、重复性高的优点3。笔者拟通过单因素实验和响应面实验确定粗毛纤孔菌多糖最佳提取条件，纯化获得均一多糖（INP）。国内外有关粗毛纤孔菌抗癌作用的研究比较多4。LI等5采用血清代谢组学方法，发现粗毛纤孔菌石油醚提取物显著抑制小鼠 H22肿瘤生长。有关粗毛纤孔菌抗炎机制研究较少。脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的组成部分，含有大量脂质和多糖（糖脂），可以刺激细胞膜上的TLR4，引起炎症6。炎症是机体遭受病菌侵害、病毒感染等伤害后发生的防御性反应，其会启动免疫应答，保护机体7。巨噬细胞由单核细胞转化而来，在受到外界刺激时，分泌大量活性物质，如细胞因子白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-（TNF-）和一氧化氮（NO）等8，启动并导致炎症反应加剧。丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路和NF-B信号通路也与炎症发生密切相关9，当p38MAPK被激活时，NF-B抑制因子激酶降解 IB，启动炎症因子转录和翻译，促使下游多种炎症因子急剧表达和释放，扩大炎症反应10。AKT信号通路影响蛋白质合成、细胞增殖和存活等11。笔者使用脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞建立炎症模型，从细胞因子分泌水平，p38MAPK/NF-B、AKT信号通路相关基因和蛋白表达水平研究INP抗炎作用，以期为粗毛纤孔菌多糖应用提供参考。1 材料与方法1.1 材料粗毛纤孔菌（I.hispidus）新鲜子实体采集自吉林省长春市净月潭森林公园，由吉林农业大学包海鹰教授鉴定；小鼠巨噬细胞RAW264.7购自上海盖德生物有限公司。1.2 主要试剂和仪器葡聚糖标准品、苯酚、二甲基亚砜（DMSO）、-二巯基乙醇、DMEM高糖培养基、胎牛血清(上海伊诺凯科技有限公司)；双抗储存液（以色列Biological Industries 生物科技公司）；3-(4,5二甲基噻唑蓝-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）、蛋白裂解液（广州捷倍斯科技有限公司）；脂多糖(LPS，广州济恒科技有限公司)；反转录试剂盒、SYBR Green荧光定量试剂盒（武汉时胜生物科技有限公司）；一氧化氮、TNF-、IL-1、IL-6检测试剂盒（美国Proteintech公司）；牛血清白蛋白（BSA，上海睿铂赛生物科技有限公司）；BCA蛋白定量试剂盒、一抗(AKT、p-AKT、p-p65、p65、p38、p-p38、85 曹润康，等：粗毛纤孔菌多糖提取工艺优化及体外抗炎作用第 5 期p-Erk1/2、Erk1/2、p-Jnk1/2、Jnk1/2、IB、-actin)、二抗（辣根过氧化物酶标记山羊抗兔/抗鼠）（上海碧云天生物技术有限公司）。DW-86L338立式超低温保存箱（深圳市万千科技有限公司）；5804R离心机、Epoch2微孔板分光光度计、Mastercycler nexus PCR仪（德国Eppendorf公司）；HH-12468数显恒温水浴锅（嘉兴市中新医疗仪器有限公司）；HF90 二氧化碳培养箱（泰医生物技术有限公司）；MP-8001SDS-PAGE垂直电泳槽（北京龙方科技有限公司）；CFX Real Time SyStem全能型成像系统（美国 Bio-Rad 公司）；ZK-100B手提式高速万能粉碎机(北京中科浩宇科技发展有限公司）。1.3 粗毛纤孔菌粗多糖制备和多糖含量测定将粗毛纤孔菌子实体60 干燥，用粉碎机粉碎，过40目筛（孔径为0.425 mm），取10 g粉末，按照一定的料液比、提取温度和提取时间用恒温水浴锅进行提取，减压过滤收集上清液，提取3次，合并提取液。在蒸发皿中蒸干，加入10 mL蒸馏水溶解，按照料液比13.75（gmL）加入95%乙醇，4 过夜，2 000 g离心20 min，用蒸馏水溶解沉淀，冷冻干燥，获得粗多糖，参照苯酚-硫酸法12测定多糖含量，计算得率。多糖得率=100%XmCW公式中 X表示葡聚糖质量浓度，单位为gmL-1；m表示粗毛纤孔菌粗多糖质量，单位为 g；C表示粗毛纤孔菌粗多糖待测溶液质量浓度，单位为gmL-1；W表示粗毛纤孔菌子实体粉末质量，单位为 g1.4 单因素实验以料液比 116（gmL）、提取温度80、提取时间 2 h为基础条件，考察不同料液比（112、114、116、118、120 gmL）、提取温度（60、70、80、90、100）、提取时间（1、1.5、2、2.5、3 h）对粗毛纤孔菌多糖得率的影响，参照1.3提取多糖，测定多糖得率。1.5 响应面实验 对单因素实验得到的结果进行方差分析，确定最佳料液比、提取温度和提取时间，采用Design Expert 13软件，设计响应面因素水平表（表1）13，参照1.3提取多糖，测定多糖得率，确定最佳提取条件。表1 响应面实验因素和水平表Table 1 Factors and levels for response surface design水平 Level 因素 FactorA 料液比Material-liquid ratio(g mL)B 提取温度Extraction temperature/C 提取时间Extraction time/h-116701.5018802.0120902.51.6 INP制备和成分分析参照响应面实验确定的最佳条件提取粗毛纤孔菌多糖，分别采用Sevag法14、D101大孔树脂吸附法15、透析法16 去除蛋白、杂质、盐，再通过DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶过滤层析17进行分级，得到均一多糖（INP），采用苯酚-硫酸法测定INP多糖含量18。1.7 MTT法检测细胞活力参照文献19的方法培养巨噬细胞RAW264.7，参照文献20的方法测定添加不同质量浓度INP（0、15.6、31.25、62.5、125、250、500、1 000、2 000 gmL-1）时细胞活力，设6次重复。细胞活力=（D实验组/D对照组）100%86 第 30 卷食 用 菌 学 报1.8 采用ELISA法检测NO和IL-6、TNF-含量 参照文献19的方法培养巨噬细胞RAW264.7，1 500 g离心10 min，收集沉淀，制备每毫升含有4.0105 个细胞的悬液，在6孔板中每孔加入2 mL细胞悬液，在37、5%CO2条件下培养过夜，使细胞完全贴壁，去除培养基，空白组加入8 mL细胞培养液；模型组加入8 mL细胞培养液和LPS（500 ngmL-1）；INP组（低、中、高剂量分别为125、250、500 gmL-1）加入8 mL细胞培养液和LPS（500 ngmL-1），培养24 h，1 500 g离心10 min，收集上清液，参照ELISA 试剂盒说明书检测上清液NO和IL-6、TNF-含量。1.9 巨噬细胞RAW264.7炎症相关基因表达量测定参照1.8培养细胞，1 500 g离心10 min，参照文献21的方法提取细胞总RNA，检测其质量，参照反转录试剂盒说明书制备cDNA，以-actin为内参基因，引物序列见表2，参照试剂盒说明书进行定量PCR，采用2Ct法计算IL-6、IL-1、TNF-表达量22。表2 用于定量PCR的引物Table 2 Primers for RT-PCR基因 Gene序列 Sequence(53)IL-6CACTTCACAAGTCGGAGGCTCTGCAAGTGCATCATCGTTGTIL-1AACCTTTGACCTGGGCTGTCAAGGTCCACGGGAAAGACACTNF-ATGGCCTCCCTCTCATCAGTATAGCAAATCGGCTGACGGT-actinGGATGGGGTCACTCACACTGTCTAGTGAGGATGAAGCGGC1.10 检测p38MAPK/NF-B和PI3K/AKT信号通路中相关蛋白表达量参照 1.8 收集细胞，参照文献 21 的方法进行蛋白免疫印迹（Western blot）实验，采用Image J 软件分析图像灰度值，以 AKT、p65、p38、Erk1/2、Jnk1/2和-actin的灰度值为参照，检测目的蛋白p-AKT、p-p65、p-p38、p-Erk1/2、p-Jnk1/2和IB表达量。1.11 数据处理数据以平均值标准差表示，采用Graphpad Prism 8软件进行方差分析，采用t检验进行差异显著性分析。P0.05表示差异显著，P0.01表示差异非常显著，P0.001表示差异极显著。2 结果与分析2.1 不同单因素对粗毛纤孔菌多糖得率的影响如图 1所示，随着液料比增加，粗毛纤孔菌多糖得率增加，118、120多糖得率较高，分别为(0.5940.012)%、(0.5850.011)%；随着提取温度升高，多糖得率先增加后降低，提取温度为80 时最高，为(0.6000.024)%；随着提取时间增加，多糖得率先增加后降低，提取2 h时最高，为(0.5910.012)%。注：AC分别为料液比、提取温度和提取时间；不同小写字母表示差异显著（P0.05）。Notes:A,B and C indicate material-liquid ratio,extraction temperature and extraction time,respectively;different lowercase letters indicate a significant difference(P0.05).图1 单因素实验结果Fig.1 Results of single factor experiments 87 曹润康，等：粗毛纤孔菌多糖提取工艺优化及体外抗炎作用第 5 期2.2 响应面实验结果2.2.1二次多项回归方程运用 Design-Expert 13 软件，对表 3进行拟合分析，得到二次多项回归方程。多糖得率=0.008 00+0.003 10A+0.014 50B+0.006 50C+0.001 00AB+0.003 80AC-0.003 30BC-0.049 57A2-0.110 30B2-0.013 50C2表3 响应面实验结果Table 3 Results of response surface design实验号Experiment No.因素 Factor多糖得率 Polysaccharide yield/%ABC10000.6010.01920-110.4740.0113-1-100.4250.0134-10-10.5340.0245-1100.4510.00761-100.4290.01670110.4980.018810-10.5330.01290000.5960.012101100.4590.023111010.5490.01812-1010.5350.0221301-10.4860.008140000.6050.019150000.5960.031160000.6060.024170-1-10.4500.0352.2.2 回归模型分析结果如表4所示，模型的平方和为0.068 5，PCA。2.2.3 各因素交互作用分析结果如图2所示，两两因素交互3D响应图都是开口向下的曲面，且提取温度（B）和提取时间（C）交互作用坡面最陡，表明这两个因素相互作用对多糖得率的影响最大；提取时间（C）和料液比（A）交互作用坡面最缓，表明这两个因素相互作用对多糖得率影响最小；各因素交互作用影响大小为BCABAC。88 第 30 卷食 用 菌 学 报表4 回归模型方差分析结果Table 4 Variance analysis of regression model方差来源Source of variance平方和Sum of squares自由度Degree of freedom均方差Mean squareF 值F valueP 值P value模型 Model0.068 590.007 6385.710.000 1*A0.000 110.000 13.960.086 8B0.001 710.001 785.290.000 1*C0.000 410.000 417.80.003 9*AB0.000 00410.000 0040.202 80.666 1AC0.000 110.000 12.850.135 1BC0101.830.218 7A20.010 310.010 3523.660.000 1*B20.051 210.051 22 596.280.000 1*C20.000 810.000 839.050.000 4*残差 Residual0.000 170失拟项 Lack of fit0300.693 80.602 2纯误差 Pure error0.000 140总离差 Cor total 0.068 616注：R2=0.998；R2adj=0.995 4；C.V.%=0.855 3；Adeq precision=51.798 3%；*表示极显著（P0.01）。Notes:R2=0.998;R2adj=0.995 4;C.V.%=0.855 3;Adeq precision=51.798 3%;*indicates an extremely significant difference at P0.01.89 曹润康，等：粗毛纤孔菌多糖提取工艺优化及体外抗炎作用第 5 期图2 各因素交互作用对多糖得率影响的响应面图（左）和等高线图（右）Fig.2 Response surface plots(left)and contour plots(right)for interactions between factors affecting polysaccharide yield2.2.4 最佳提取条件预测和验证结果对粗毛纤孔菌多糖得率的二次多项模型进行优化，确定最佳提取条件为料液比118.23（gmL）、提取温度 80.50、提取时间1.93 h，预测粗毛纤孔菌多糖得率为0.623%，考虑经济成本和可操作性，修改提取条件为料液比118（gmL）、提取温度 80.5、提取时间 1.9 h，进行3次验证实验，粗毛纤孔菌多糖得率为(0.6120.057)%，与预测值接近，进一步证明模型可行。2.3 INP多糖含量INP的多糖含量为97.8%。2.4 INP对细胞活力的影响如表5所示，与对照比较，只有INP质量浓度为2 000 gmL-1 时细胞活力显著降低，选择添加125、250、500 gmL-1 INP进行后续实验。表5 INP对RAW264.7细胞活力的影响Table 5 Effect of INP on viability of RAW264.7 cells 项目 ItemINP 质量浓度 INP mass concentration/(gmL-1)0 (CK)15.631.2562.51252505001 0002 000细胞活力Cell viability/%100.0112.9113.2511.24109.6212.94105.285.39100.376.42103.8310.88100.6212.9494.418.3678.907.53*注：数据为平均值标准差（n=6）；*表示与CK比较差异显著（P0.05）。Notes:values are means SD(n=6);*indicates an extremely significant difference compared with CK at P0.05.2.5 INP 对 NO 和 TNF-、IL-6 含量的影响如图 3所示，与对照组相比，模型组 NO含量显著升高，TNF-和IL-6含量极显著升高。与模型组相比，INP中剂量组的NO、TNF-含量显著降低，高剂量组非常显著降低；高剂量组的IL-6含量显著降低。90 第 30 卷食 用 菌 学 报注：AC分别为NO、TNF-、IL-6 含量；CON、LPS、INPL、INPM、INPH分别表示空白组，模型组，INP低、中、高剂量组；数据为平均值+标准差（n=3）；*、*、*分别表示差异显著（P0.05）、非常显著（P0.01）、极显著（P0.001）。Notes:A,B and C are effects of INP on contents of NO,TNF-and IL-6,respectively;CON,LPS,INPL,INPM,and INPH indicate blank group,model group,low dose INP group,medium dose INP group,and high dose INP group,respectively;values are means+SD(n=3);*,*,and *indicate P0.05,P0.01,and P0.001,respectively.图 3 INP 对 LPS 诱导的 RAW 264.7 细胞 NO 和 TNF-、IL-6 含量的影响Fig.3 Effects of INP on contents of NO,TNF-and IL-6 in LPS-induced RAW 264.7 cells2.6 INP 对 IL-1、TNF-和 IL-6 表达量的影响如图 4所示，与对照组相比，模型组IL-1、TNF-和IL-6表达量非常显著升高。与模型组相比，INP中、高剂量组IL-1表达量非常显著降低，高剂量组TNF-表达量非常显著降低，高剂量组IL-6表达量显著降低。注:A、B、C分别为IL-1、TNF-和IL-6表达量；CON、LPS、INPL、INPM、INPH注同图3；数据为平均值+标准差（n=3）；*、*分别表示差异显著（P0.05）、非常显著（P0.01）。Notes:A,B and C are relative expression levels of IL-1,TNF-and IL-6,respectively;CON,LPS,INPL,INPM,and INPH as in Fig.3;values are means+SD(n=3);*and*indicate P0.05 and P0.01,respectively.图 4 INP对IL-1、TNF-和IL-6表达量的影响Fig.4 Effects of INP on relative expression of IL-1,TNF-and IL-6 in RAW 264.7 cells2.7 INP对p38MAPK/NF-B和PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达量的影响在LPS诱导下，细胞内炎症信号通路被激活，相关蛋白被调控表达。如图5所示，与对照组相比，模型组p-p38表达量显著增加，p-Erk1/2、p-Jnk1/2、p-p65、IB和p-AKT表达量极显著增加。与模型组相比，INP中、高剂量组p-p38表达量分别非常、极显著降低，高剂量组p-Jnk1/2蛋白表达量极显著降低，低、高剂量组p-Erk1/2表达量极显著降低，高剂量组p-p65表达量非常显著降低，中、高剂量组IB表达量非常显著降低，低、中、高剂量组p-AKT表达量极显著降低，表明INP可通过抑制p38MAPK/NF-B和AKT信号通路激活，减轻LPS诱导的细胞炎症损伤。91 曹润康，等：粗毛纤孔菌多糖提取工艺优化及体外抗炎作用第 5 期注：A为电泳图；BG分别为p-p38、p-Erk1/2、p-Jnk1/2、p-p65、IB和p-AKT；数据为平均值+标准差（n=3）；CON、LPS、INPL、INPM、INPH注同图3；*、*和*注同图3。Notes:A.Western blotting;BG indicate relative expression of p-p38,p-Erk1/2,p-Jnk1/2,p-p65,IB and p-AKT,respectively;CON,LPS,INPL,INPM,and INPH as in Fig.3;values are means+SD(n=3);*,*and*as in Fig.3.图 5 INP对P38MAPK/NF-B和AKT信号通路相关蛋白表达的影响Fig.5 Effect of INP on protein expression in P38MAPK/NF-B and AKT signaling pathways3 讨论多糖是粗毛纤孔菌的重要活性成分之一，开发利用前景广阔。王占斌等23采用水提醇沉法提取粗毛纤孔菌子实体多糖，在料液比129（gmL）、提取温度 80、提取时间5.2 h条件下，多糖得率为 9.65%。笔者通过热水浸提法提取粗毛纤孔菌多糖，采用单因素实验和响应面实验确定最佳提取工艺为料液比118（gmL）、提取温度80.5、提取时间1.9 h，采用此工艺条件，多糖得率为(0.6120.057)%，多糖得率差异是否与菌株、采集地以及测定方法不同有关有待进一步研究。巨噬细胞参与炎症反应，分泌NO和IL-1、IL-6、TNF-等细胞因子，细胞因子分泌水平与炎症关系密切，是评判药物抗炎作用的重要指标。如雷公藤次碱抑制 LPS引起的 NO、IL-1、TNF-及 IL-6 等促炎因子产生，具有良好抗炎活性24；前列欣胶囊正丁醇部位对巨噬细胞RAW264.7的IL-1、IL-6、TNF-和PGE2 分泌具有显著抑制作用，且呈剂量依赖关系25。本研究结果表明，INP组NO、IL-6和TNF-含量显著降低；IL-1、IL-6和TNF-表达量显著降低，表明INP可通过调节多种炎性细胞因子分泌及相关基因表达缓解炎症。p38MAPK/NF-B和PI3K/AKT通路是参与炎症反应的重要通路之一，抑制该通路可减轻脂多糖诱导的炎症反应26。食子儿茶素没食子酸酯通过下调p38MAPK/NF-B信号通路相关蛋白p-p38、p-IB、p-NF-B 表达，对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症发挥抑制作用27；金骨莲提取物通过下调 PI3K p110表达，降低PI3K p85 和 AKT磷酸化水平，抑制PI3K/AKT信号通路激活，缓解炎症28。INP通过抑制LPS 诱导的巨噬细胞RAW264.7中p38MAPK/NF-B、AKT信号通路激活，缓解炎症。笔者在确定粗毛纤孔菌多糖最佳提取条件前提下，发现INP可通过降低炎症细胞NO和TNF-、IL-6含量，降低炎症因子基因表达量，抑制p38MAPK/NF-B和PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达，有效缓解炎症，为后续粗毛纤孔菌开发利用提供参考。92 第 30 卷食 用 菌 学 报参考文献1 包海鹰,邹鹤鸣,王青春,等.不同发育时期粗毛纤孔菌子实体水提物安神作用研究J/OL.菌物学报:1-172023-04-14.http:/ HUO J X,ZHONG S,DU X,et al.Whole-genome sequence of Phellinus gilvus(mulberry Sanghuang)reveals its unique medicinal valuesJ.Journal of Advanced Research,2020,24:325-335.3 徐雯雯,陆春霞,肖潇,等.桑黄多糖的提取纯化技术及药理作用研究进展J.蚕学通讯,2022,42(3):20-30.4 李志军,包海鹰.中药桑黄粗毛纤孔菌的化学成分与药理作用研究进展J.菌物研究,2022,20(3):203-213.5 LI Z J,BAO H Y.Deciphering key regulators of Inonotus hispidus petroleum ether extract involved in anti-tumor through whole transcriptome and proteome analysis in H22 tumor-bearing mice modelJ.Journal of Ethnopharmacology,2022,296:115468.6 SENKOVA A V,SAVIN I A,ODARENKO K V,et al.Protective effect of soloxolone derivatives in carrageenan-and LPS-driven acute inflammation:Pharmacological profiling and 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