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NY∕T 536-2017 鸡伤寒和鸡白痢诊断技术(农业).pdf
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1、ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准NY /T 536-2017 代替NY/T536- 2002 鸡伤寒和鸡白病诊断技术Diagnostic techniques for fowl typhoid and pullorum disease 2017 -06-12发布2017-10-01实施1二中华人民共和国农业部发布.-目。吕本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。NY/T 536-2017 本标准代替NY/T536- 2002 (鸡伤寒和鸡白病诊断技术。与NY/T536-2002相比,除编辑性修改外,主要技术变化如下:一一一增加了鸡伤寒和鸡白病的临床诊
2、断和病理变化(见第2章); 一一增加了鸡沙门菌和雏沙门菌鉴别PCR(见3.1. 3.的。本标准由农业部兽医局提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。本标准起草单位:中国兽医药品监察所。本标准主要起草人:康凯、李伟杰、陈小云、赵耘、岂晓鑫、张敏。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一NY/T536-2002。I NY/T 536-2017 引鸡伤寒和鸡白躏(fowltyphoid and pullorum disease)分别是由鸡沙门菌(Salmonellagallinarum) 和雏沙门菌(Salmonellapullorum)引起的鸡和火鸡等的传染病,是危
3、害我国养鸡业的重要疾病。我国将鸡白病列为二类动物疫病,世界动物组织fw且JdOrganization for Animal Health (英), Office In ternational des EpizootiesC法),OIF . J 1 : -.;re山andVaccines for Terreslrial Animals,2016中规定了鸡伤翠a四帽喃喃喃胃S抗原)的制造、标定和使用的国际标准。二pU8L 本标准主要参考T.乱 中的2:3. 11章雏沙门菌的鉴别2002)进行了修订五版,陈溥言H Animals ,2016 建立了鸡沙门菌和)(NY/ T 536一传染病学)(第NY
4、/T 536-2017 鸡伤寒和鸡自病诊断技术1 范围本标准规定了鸡伤寒和鸡白病诊断的技术要求。本标准所规定的临床诊断和实验室诊断适用于各种日龄鸡的鸡沙门菌和雏沙门菌感染的诊断。其中,PCR方法可用于鸡沙门菌和雏沙门菌的鉴别,全血平板凝集试验适用于成年鸡的鸡沙门菌和雏沙门菌抗体的检测。本标准也可用于鸡伤寒和鸡白俐的流行病学调查和健康鸡群监测。2 临床诊断2. 1 临床症状2. 1. 1 鸡伤寒临床症状成年鸡易感,一般呈散发性。潜伏期一般为4d5 d。在年龄较大的鸡和成年鸡,急性经过者突然停食,排黄绿色稀粪,体温上升lOC30C。病鸡可迅速死亡,通常经5d10 d死亡。雏鸡发病时,临诊症状与鸡白
5、病相似。2. 1. 2 鸡自前临床症状各品种鸡对本病均易感,以2周龄3周龄雏鸡的发病率和死亡率为最高,呈流行性。本病在雏鸡和成年鸡中所表现的症状和经过有显著的差异。a) 雏鸡潜伏期4d5 d,出壳后感染的雏鸡,多在孵出后几天才出现明显临诊症状,在第2周第3周内达到高峰。发病雏鸡呈最急性者,无临诊症状迅速死亡。稍缓者表现精神委顿,绒毛松乱,两翼下垂,缩颈闭眼,昏睡,不愿走动,拥挤在一起。病初食欲减少,后停食,多数出现软嗦临诊症状。腹泻,排稀薄如耀糊状粪便。有的病雏出现眼盲或肢关节肿胀,呈版行临诊症状。b) 成年鸡感染后常无临诊症状,母鸡产蛋量与受精率降低。有的因卵黄囊炎引起腹膜炎,腹膜增生而呈垂
6、腹现象。2.2 病理变化2.2. 1 鸡伤寒病理变化死于鸡伤寒的雏鸡病理变化与鸡白病相似。成年鸡,最急性者眼观病理变化轻微或不明显,急性者常见肝、脾、肾充血肿大。亚急性和慢性病例,特征病理变化是肝肿大呈青铜色,肝和心肌有灰白色粟粒大坏死灶,卵子及腹腔病理变化与鸡白病相同。2.2.2 鸡自摘病理变化a) 雏鸡急性死亡,病理变化不明显。病期长者,在心肌、肺、肝、盲肠、大肠及肌胃肌肉中有坏死灶或结节,胆囊肿大。输尿管扩张。盲肠中有干酷样物,常有腹膜炎。稍大的病雏有出血性肺炎,肺有灰黄色结节和灰色肝变。育成阶段的鸡肝肿大,呈暗红色至深紫色,有的略带土黄色,表面可见散在或弥散性的小红色或黄白色大小不一的
7、坏死灶,质地极脆,易破裂,常见有内出血变化。b) 成年母鸡最常见的病理变化为卵子变形、变色,呈囊状。有腹膜炎及腹腔脏器粘连。常有心包炎。成年公鸡辜丸极度萎缩,有小肿胀,输精管管腔增大,充满稠密的均质渗出物。3 实验室诊断3. 1 病原分离和鉴定1 NY/T 536-2017 3. 1. 1 采集病料可采集被检鸡的肝、脾、肺、卵巢等脏器,元菌取每种组织5g10 g,研碎后进行病原分离培养。3. 1.2 分离培养3. 1. 2. 1 培养基增菌培养基:亚晒酸盐煌绿增菌培养基、四硫磺酸铀煌绿增菌培养基。鉴别培养基:SS琼脂和麦康凯琼脂。以上各培养基配制方法见附录A。3. 1.2.2 操作将研碎的病料
8、分别接种亚晒麦康凯琼脂平皿,3 7C培养的光滑菌落,判为可养基上划线分离,370C3. 1. 3 病原鉴定3. 1. 3. 1. 1 3.1.3.1.2 将可疑观察。因子血清和H-g. 3. 1.3.2.2 操作对初步判为沙门d、H-g.m和H-g. p因子具体操作如下:用接种环取1昆匀,轻轻摇动玻璃板,于1min内呈明生理盐水对照,应元凝集反应。3. 1. 3. 2. 3 结果判定菌培养基和SS琼脂平皿或明或半透明、圆形中取菌液在鉴别培,说明不是菌株斜面检菌苔与血清出现凝集反应者为阴性。试验同时设如果培养物与09,012因子血清均呈阳性反应,而与H- a, H - d, H -g. m和H-
9、g. p因子血清均呈阴性反应,则鉴定为鸡沙门菌或雏沙门菌。3.1.3.3 鸡沙门菌和雏沙门菌初步鉴别生化试验3. 1. 3. 3. 1 生化反应试剂鸟氨酸脱竣酶试验小管、卫茅醇试验小管和葡萄糖(产气)小管。3. 1. 3. 3. 2 操作NY/T 536-2017 对鉴定为鸡沙门菌或雏沙门菌的菌株接种鸟氨酸脱殷酶、卫茅醇和葡萄糖(产气生化小管,370C培养24h后观察。3.1.3.3.3 结果判定鸟氨酸脱竣酶和葡萄糖(产气)为阴性,卫茅醇为阳性的为鸡沙门菌;乌氨酸脱竣酶和葡萄糖(产气)为阳性,卫茅醇为阴性的为雏沙门菌。3. 1. 3. 4 鸡沙门菌和雏沙门菌鉴别PCR3. 1. 3. 4. 1
10、 PCR试剂10XPCR Buffer、dNTP、Taq酶、菌和雏沙门菌)和阴性对照。3. 1.3.4.2 引物见表1。检测目的基因3. 1. 3. 4. 3 3. 1. 3. 4. 4 见表20s,720C延伸30s,30个循环,720C延伸7min。3. 1. 3. 4. 5 PCR产物的检测、琼脂糖、阳性对照(已鉴定的鸡沙门PCR产物用1.5%2. 0%琼脂糖凝胶进行电泳,观察扩增产物条带大小。3. 1.3.4.6 结果判定阳性对照扩增出约174bp和252bp的片段,阴性对照未扩增出片段,试验成立。若被检样品扩增出约174bp和252怜的片段,判定为鸡沙门菌;若被检样品只扩增出约252
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