p62敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用.pdf

基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2 0 2 0 D 0 1 C 1 8 0);新疆维吾尔自治区“天山英才”培养计划项目(2 0 2 2 T S Y C C X 0 0 3 0)作者简介:刘世玉(1 9 9 3-),女,在读硕士,研究方向:细胞自噬。通信作者:米 娜,女,博士,副教授,博士生导师,研究方向:细胞自噬,E-m a i l:m i n a 21 6 3.c o m。基础医学研究本文引用:刘世玉,冯学召,古丽妮尕尔司马义,等.p 6 2敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用J.新疆医科大学学报,2 0 2 3,4 6(9):1 1 1 9-1 1 2 3,1 1 3 1.d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.0 9.0 0 1p 6 2敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用刘世玉1,冯学召2,古丽妮尕尔司马义1,席 庆3,阿仙姑哈斯木4,米 娜5(新疆医科大学1生物化学教研室,2病理生理学教研室,3生物学教研室,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 7;4新疆医科大学第七附属医院,乌鲁木齐 8 3 0 0 9 2;5新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院,乌鲁木齐 8 3 0 0 5 4)摘要:目的 探讨p 6 2敲除对细胞自噬及泛素化蛋白募集的影响。方法 将野生型(W i l d T y p e,WT)和p 6 2基因敲除(p 6 2 k n o c k o u t,p 6 2-KO)的大鼠肾上皮细胞(N R K)分别分为野生型阴性对照组(WT C T组)和野生型饥饿4 h组(WT S t a 4 h组)、p 6 2基因敲除阴性对照组(p 6 2-KO C T组)和p 6 2基因敲除饥饿4 h组(p 6 2-KO S t a 4 h组)。WT C T组和p 6 2-KO C T组中加入普通培养基,对细胞进行空白对照处理;WT S t a 4 h组和p 6 2-KO S t a 4 h组中加入饥饿培养基,对细胞进行饥饿4 h处理。免疫印迹法鉴定和检测p 6 2基因的敲除及自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(L C 3)、泛素化修饰蛋白(U b)的表达;电子显微镜观察自噬体形成;激光共聚焦显微镜法观察L C 3蛋白阳性点状结构的数量。结果 鉴定p 6 2基因成功被敲除。饥饿处理4 h后,WT和p 6 2-KO细胞中均能观察到自噬结构(包括自噬体和自噬溶酶体)。与WT C T组比较,WT S t a 4 h组中L C 3蛋白酯化和U b蛋白表达水平升高(P0.0 5),L C 3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P0.0 1);与p 6 2-KO C T组比较,p 6 2-KO S t a 4 h组中L C 3蛋白酯化和U b蛋白表达水平升高(P0.0 5),L C 3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P0.0 1)。结论 p 6 2参与细胞自噬并募集泛素化修饰蛋白,最终影响选择性自噬体底物的凝聚和降解。关键词:p 6 2;选择性自噬;泛素化蛋白;L C 3中图分类号:R 3 4 1 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 9-5 5 5 1(2 0 2 3)0 9-1 1 1 9-0 6d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.0 9.0 0 1E f f e c t o f p 6 2 k n o c k o u t o n c e l l u l a r a u t o p h a g y a n d i t s r o l e i n r e c r u i t m e n t o f u b i q u i t i n a t i o n-m o d i f i e d p r o t e i n sL I U S h i y u1,F E N G X u e z h a o2,G u l i n i g a e r S i m a y i1,X I Q i n g3,A x i a n g u H a s i m u4,M I N a5(1D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y,2D e p a r t m e n t o f P a t h o p h y s i o l o g y,3D e p a r t m e n t o f B i o l o g y,X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m q i 8 3 0 0 1 7,C h i n a;4T h e S e v e n t h A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m q i 8 3 0 0 9 2,C h i n a;5R e s e a r c h I n s t i t u t e o f C l i n i c a l M e d i c i n e,t h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m q i 8 3 0 0 5 4,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h e e f f e c t s o f p 6 2 k n o c k o u t o n c e l l u l a r a u t o p h a g y a n d u b i q u i t i n a t e d p r o t e i n r e c r u i t-m e n t.M e t h o d s W i l d t y p e(WT)a n d p 6 2 k n o c k o u t(p 6 2-K O)r a t k i d n e y e p i t h e l i a l c e l l s(N R K)w e r e d i v i d e d i n t o w i l d t y p e n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p(WT C T g r o u p)a n d w i l d t y p e s t a r v a t i o n 4 h g r o u p(WT S t a 4 h g r o u p),p 6 2 k n o c k-o u t n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p(p 6 2-K O C T g r o u p)a n d p 6 2 k n o c k o u t s t a r v a t i o n 4 h g r o u p(p 6 2-K O S t a 4 h g r o u p).N o r-第4 6卷 第9期新 疆 医 科 大 学 学 报V o l.4 6 N o.9 2 0 2 3年9月J o u r n a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t yS e p.2 0 2 3 m a l m e d i u m w a s a d d e d t o t h e WT C T g r o u p a n d p 6 2-K O C T g r o u p,a n d t h e c e l l s w e r e t r e a t e d w i t h b l a n k c o n t r o l,s t a r v a t i o n m e d i u m w a s a d d e d t o t h e WT S t a 4 h g r o u p a n d p 6 2-K O S t a 4 h g r o u p,a n d t h e c e l l s w e r e t r e a t e d w i t h s t a r-v a t i o n 4 h.I mm u n o b l o t t i n g m e t h o d w a s u s e d t o i d e n t i f y a n d d e t e c t t h e k n o c k o u t o f p 6 2 g e n e a n d t h e e x p r e s s i o n o f a u-t o p h a g o s o m e m a r k e r p r o t e i n s m i c r o t u b u l e-a s s o c i a t e d p r o t e i n 1 l i g h t c h a i n 3(L C 3)a n d u b i q u i t i n a t i o n-m o d i f i e d p r o t e i n(U b),e l e c t r o n m i c r o s c o p y w a s u s e d t o o b s e r v e t h e f o r m a t i o n o f a u t o p h a g o s o m e s,a n d t h e n u m b e r o f L C 3 p r o t e i n-p o s i t i v e p u n c t a t e s t r u c t u r e s w a s o b s e r v e d b y l a s e r c o n f o c a l m i c r o s c o p y.R e s u l t s T h e p 6 2 g e n e w a s i d e n t i f i e d t o b e s u c c e s s f u l l y k n o c k e d o u t.A f t e r 4 h o f s t a r v a t i o n t r e a t m e n t,a u t o p h a g i c s t r u c t u r e s(i n c l u d i n g a u t o p h a g o s o m e s a n d a u t o-p h a g o l y s o s o m e s)w e r e o b s e r v e d i n b o t h WT a n d p 6 2-K O c e l l s.C o m p a r e d w i t h t h e WT C T g r o u p,t h e l e v e l s o f L C 3 p r o t e i n e s t e r i f i c a t i o n a n d U b p r o t e i n e x p r e s s i o n w e r e i n c r e a s e d i n t h e WT S t a 4 h g r o u p(P0.0 5),a n d t h e n u m b e r o f L C 3 p r o t e i n-p o s i t i v e p u n c t a t e s t r u c t u r e s w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 1),c o m p a r e d w i t h t h e p 6 2-K O C T g r o u p,t h e l e v e l s o f L C 3 p r o t e i n e s t e r i f i c a t i o n a n d U b p r o t e i n e x p r e s s i o n w e r e i n c r e a s e d i n t h e p 6 2-K O S t a 4 h g r o u p(P0.0 5),a n d t h e L C 3 p r o t e i n p o s i t i v e p u n c t a t e s t r u c t u r e s w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 1).C o n c l-u s i o n p 6 2 i s i n v o l v e d i n c e l l u l a r a u t o p h a g y a n d r e c r u i t s u b i q u i t i n a t i o n-m o d i f i e d p r o t e i n s,w h i c h u l t i m a t e l y a f f e c t t h e c o h e s i o n a n d d e g r a d a t i o n o f s e l e c t i v e a u t o p h a g o s o m e s u b s t r a t e s.K e y w o r d s:p 6 2;s e l e c t i v e a u t o p h a g y;u b i q u i t i n a t e d p r o t e i n;L C 3 自噬是一种在维持细胞稳态中起多种作用的溶酶体降解途径,分为选择性自噬和非选择性自噬1。饥饿、细胞器损伤等反应都会增加细胞自噬2。在选择性自噬中,p 6 2/S e q u e s t o s o m e-1作为一种支架蛋白,用来降解泛素化基质的载体3,并通过自身的互作作用和泛素结合结构域(U b i q u i t i n b i n d i n g d o-m a i n,U B A)结合,进一步促进泛素化聚集体的形成和 降 解。泛 素-蛋 白 酶 体(U b i q u i t i n-p r o t e a s o m e s y s t e m,U P S)和自噬是细胞中最主要的蛋白质降解系统,相关研究证实了两者间存在密切联系,泛素作为这两类系统共同的底物识别信号,在其中起到连接的作用4。微管相关蛋白1轻链3(L C 3)被自噬相关蛋白酶AT G 4裂解形成胞质L C 3,被进一步识别后,L C 3与磷脂酰乙醇胺(P h o s p h a t i d y l e t h a-n o l a m i n e,P E)结合形成L C 3,即L C 3酯化5。与外膜结合的L C 3被AT G 4裂解,被重新用于新一轮的酯化6。前期研究证实了这些蛋白分子在自噬中的核心作用,p 6 2和多聚泛素化蛋白是p 6 2体的支架,而作为自噬的成核位点的p 6 2体被隔离在自噬体中7。本实验通过观察和对比野生型(W i l d T y p e,WT)和p 6 2基 因 敲 除(p 6 2 k n o c k o u t,p 6 2-KO)的大鼠肾上皮细胞(N R K)经饥饿处理后的自噬体形成、L C 3蛋白阳性囊泡点状结构的数量变化、L C 3酯化和泛素化修饰蛋白(U b)的表达水平,证实p 6 2敲除不影响非选择性自噬,并初步探究p 6 2与泛素化修饰蛋白结合对自噬降解途径的具体作用机制。1 材料与方法1.1 仪器与试剂 C 2 p l u s激光共聚焦显微镜(日本N i k o n公司);H e r a c e l l 1 5 0 i C O2细胞培养箱(美国T h e r m o F i s h e r S c i e n t i f i c公司);K S 1 8生物安全柜(美国T h e r m o S c i e n t i f i c公司);垂直电泳仪、电泳槽及相关配套设备、湿转膜仪(美国B i o-R a d公司)、高速低温离心机(美国S i g a m a公司);DMEM培养基(美国G i b c o公司);D P B S培养基(美国G i b-c o公司);胎牛血清(以色列B I公司,0 4-0 0 2-1 A);谷氨 酰 胺(美 国T h e r m o F i s h e r S c i e n t i f i c公 司,2 5 0 3 0 0 8 1);磷酸盐缓冲液(P B S)(美国H y c l o n e公司);青霉素-链霉素(美国H y c l o n e公司,S V 3 0 0 1 0.0 1);大鼠肾上皮细胞(N o r m a l r a t k i d n e y,N R K)、p 6 2基因敲除的细胞由清华大学生命科学系俞立教授实验室赠送;L C 3(#PM 0 3 6,11 0 0 0)、p 6 2(#PM 0 4 5,11 0 0 0)均购自美国MB L公司;GA P DH(美国A f f i n-i t y a f f b i o t e c h公司,A F 7 0 2 1);G o a t A n t i-R a b b i t I g(美 国S o u t h e r n B i o t e c h公 司,4 0 1 0-0 5);U b i q u i t i n(中国C S T公司,#3 9 3 6 S,15 0 0 0)。1.2 实验方法1.2.1 细胞培养与分组 用含有1 0%胎牛血清和1%(青霉素-链霉素)的DMEM培养基培养细胞,置于3 7、5%细胞培养箱中,培养至全皿的9 0%时,对细胞进行传代、铺板及收样。将野生型(W i l d T y p e,WT)和p 6 2基 因 敲 除(p 6 2 k n o c k o u t,p 6 2-KO)的N R K细胞分别分为野生型阴性对照组(WT C T组)和野生型饥饿4 h组(WT S t a 4 h组)、p 6 2基因敲除阴性对照组(p 6 2-KO C T组)和p 6 2基因敲除饥饿4 h组(p 6 2-KO S t a 4 h组)。WT C T组和p 6 2-KO C T组中加入普通培养基,对细胞进行空白对照处理;WT S t a 4 h组和p 6 2-KO S t a 4 h组中加0211 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 入饥饿培养基,对细胞进行饥饿4 h处理。1.2.2 鉴定p 6 2敲除的细胞 免疫印迹法检测野生型(WT)细胞与p 6 2基因敲除(p 6 2-KO)细胞中p 6 2的表达水平。1.2.3 电子显微镜观察细胞自噬情况 在培养皿中培养野生 型(WT)细 胞 和p 6 2基 因 敲 除(p 6 2-KO)细胞,用11的2.5%戊二醛和DMEM在室温下固定5 m i n;弃去培养基,2.5%戊二醛、4中孵育4 5 m i n;用0.1 M碳酸钠缓冲液(p H 7.3)冲洗2次,2 0 mM甘氨酸处理5 m i n,洗涤5 m i n后,1 m g/m L D A B室温孵育2 m i n,加入过氧化氢至0.0 3%,继续孵育1 5 m i n,用电子显微镜(T EM)观察WT细胞和p 6 2-KO细胞中的自噬体数量。实验重复3次。1.2.4 免疫荧光法检测L C 3蛋白阳性点状结构的数量 将细胞置于盖玻片上生长,弃去培养基,P B S清洗1次,室温下用4%的多聚甲醛固定1 0 m i n,P B S清洗3次;含有0.1%皂素的山羊血清中封闭1 0 m i n,使细胞穿孔;在山羊血清中孵育3 0 m i n,用荧光一抗对细胞进行染色1 h,P B S清洗3次;细胞被染色后用荧光二抗室温避光孵育1 h,P B S清洗3次;用激光共聚焦显微镜观察WT细胞和p 6 2-KO细胞中L C 3蛋白阳性囊泡点状结构的数量(以每次实验大于5 0个细胞并在5个视野以上进行统计)。1.2.5 蛋白免疫印迹法检测L C 3的酯化水平及泛素化修饰蛋白的表达水平 取对数生长期的WT和p 6 2-KO细胞,以31 05个/m L接种至六孔板中,培养1 4 h后,P B S清洗3次,D P B S饥饿处理4 h。免疫印迹法(W e s t e r n B l o t t i n g,WB)检测细胞中泛素化修饰蛋白(U b)和自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(L C 3)蛋白在细胞中的表达水平。同上将待处理的细胞进行饥饿处理4 h后,弃去培养基,P B S冲洗1次,加入适量细胞裂解液,1 0 0 变性1 5 m i n,在8%1 2%的S D S-P A G E上电泳,湿转法至醋酸纤维素膜上,5%脱脂牛奶室温封闭2 h,免疫结合抗体室温孵育1 h,化学发光法(E C L)进行X胶片的显影。采用F i j i-I m a g e进行灰度值的统计。1.3 统计学分析 实验数据采用G r a p h p a d P r i s i m 8.0进行处理,图片用F i j i-I m a g e进行处理,计量资料以均数标准差(x-s)表示,采用独立样本t检验,以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结果2.1 p 6 2基因敲除细胞的鉴定 免疫印迹法鉴定野生型(WT)细胞与p 6 2基因敲除(p 6 2-KO)细胞中p 6 2基因的敲除情况,结果显示,与WT细胞比较,p 6 2-KO细胞中未见p 6 2蛋白表达,提示p 6 2-KO细胞中的p 6 2基因被成功敲除(图1)。图1 p 6 2基因敲除细胞的鉴定2.2 WT和p 6 2-K O细胞的自噬情况 结果显示,饥饿处理4 h后,WT和p 6 2-KO细胞中均能观察到自噬结构(包括自噬体和自噬溶酶体),且自噬体的数量在p 6 2-KO细胞中未见明显减少(图2)。A:WTB:p 6 2-KO注:A,饥饿处理4 h后的WT细胞中自噬体的数量分布;B,饥饿处理4 h后的p 6 2-KO细胞中自噬体的数量分布;其中放大部分为自噬体结构示意图。图2 WT和p 6 2-K O细胞的自噬情况(比例尺:2 m)2.3 饥饿诱导下的自噬细胞中L C 3蛋白阳性点状结构数量的比较 野生型(WT)和p 6 2基因敲除(p 6 2-KO)的N R K细胞饥饿处理4 h后,与WT C T组比较,WT S t a 4 h组中L C 3蛋白阳性点状结构数量显著增加,差异有统计学意义(P0.0 1);与p 6 2-KO C T组比较,p 6 2-KO S t a 4 h组中L C 3蛋白阳性点状结构数量显著增加,差异有统计学意义(P0.0 5)(表1、图3)。表1 饥饿诱导下的自噬细胞中L C 3蛋白阳性点状结构数量的比较(x-s)分组L C 3点状结构的数量WT C T组4.1 91.6 5WT S t a 4 h组1 6.4 71.1 9*p 6 2-KO C T组6.3 42.2 2p 6 2-KO S t a 4 h组1 3.5 41.4 6 注:与WT C T组比较,*P0.0 1;与p 6 2-KO C T组比较,P0.0 1。1211 第9期 刘世玉,等:p 6 2敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用注:A,图中绿色点代表L C 3蛋白阳性点状结构的数量(比例尺:1 0 m);B,饥饿处理后WT和p 6 2-K O细胞中L C 3蛋白阳性点状结构的数量。图3 饥饿诱导下的自噬细胞中L C 3蛋白阳性点状结构数量的比较2.4 p 6 2敲除对细胞中自噬关键蛋白L C 3酯化的影响 野生型(WT)和p 6 2基因敲除(p 6 2-KO)的N R K细胞饥饿处理4 h后,与WT C T组比较,WT S t a 4 h组中L C 3蛋白酯化水平升高,差异有统计学意义(P0.0 1);与p 6 2-KO C T组比较,p 6 2-KO S t a 4 h组中L C 3蛋白酯化水平升高,差异有统计学意义(P0.0 5)(表2、图4)。表2 p 6 2敲除对细胞中自噬关键蛋白L C 3酯化的影响(x-s)分组L C 3/GA P DH WT C T组1.0 00.0 1WT S t a 4 h组1.1 90.5 9*p 6 2-KO C T组0.7 30.4 1p 6 2-KO S t a 4 h组1.9 40.9 8 注:与WT C T组比较,*P0.0 1;与p 6 2-KO C T组比较,P0.0 1。注:A,免疫印迹法检测自噬关键蛋白L C 3蛋白的酯化水平;B,饥饿处理后WT和p 6 2-KO细胞中L C 3蛋白的酯化水平。图4 p 6 2敲除对细胞中自噬关键蛋白L C 3酯化的影响2.5 p 6 2与泛素化修饰蛋白结合对细胞自噬的影响 野生型(WT)和p 6 2基因敲 除(p 6 2-KO)的N R K细胞饥饿处理4 h后,与WT C T组比较,WT S t a 4 h组中U b蛋白和L C 3蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.0 1);与p 6 2-KO C T组比较,p 6 2-KO S t a 4 h组中U b蛋白和L C 3蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.0 5)(表3、图5)。表3 p 6 2与泛素化修饰蛋白结合对细胞自噬的影响(x-s)分组U b/A c t i nL C 3/A c t i nWT C T组1.0 0 01.0 0 0WT S t a 4 h组1.6 50.1 3*1.4 10.2 5*p 6 2-KO C T组1.2 20.0 8 1.3 80.3 7 p 6 2-KO S t a 4 h组2.0 00.1 7 2.1 30.1 4 注:与WT C T组比较,*P0.0 1;与p 6 2-KO C T组比较,P0.0 5,P0.0 1。2211 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 注:A,免疫印迹法检测泛素化修饰蛋白的表达水平;B,饥饿处理后WT和p 6 2-KO细胞中泛素化修饰蛋白的表达水平。图5 p 6 2与泛素化修饰蛋白结合对细胞自噬的影响3 讨论自噬主要负责清除错误折叠的蛋白质以及受损的细胞器,在维持细胞稳态中起重要作用。研究表明,p 6 2通过溶酶体介导自噬来维持细胞内环境稳态,参与细胞信号传导和蛋白质的聚集及降解8。p 6 2能够将泛素化蛋白,如t a u,递送到蛋白酶体中进行降解9。泛素-蛋白酶体系统(U P S)在短寿命、错误折叠和受 损的蛋白 质降解 中 起 到 了 重 要 作用1 0,但p 6 2对泛素化修饰蛋白在自噬体形成中的的相关机制仍需进一步探讨。本研究发现,在饥饿处理后的p 6 2-KO细胞中,自噬体数量未见明显减少,而L C 3蛋白阳性点状结构的数量显著增多,提示在饥饿后的p 6 2-KO细胞中,自噬强度增加,自噬流正常,说明p 6 2敲除并不影响自噬的发生。p 6 2作为一种自噬底物受体,在选择性自噬中与泛素化底物蛋白相结合1 1。研究表明,自噬与泛素化蛋白酶体系统间存在相关性,抑制蛋白酶体的表达能够诱导自噬,诱导后的自噬能够降解泛素化及错误折叠的蛋白,而抑制自噬会引起短期蛋白质的聚集,干扰一个系统的功能会影响另一个系统的表达1 2。本研究通过调控p 6 2的分子水平,发现在p 6 2-KO细胞中泛素化修饰蛋白是积累的,这表明p 6 2在选择性自噬中的作用不可或缺。p 6 2通过特定的结构域,如U B A和L C 3结合区域,与泛素化修饰蛋白相互作用,说明p 6 2能够将泛素化修饰蛋白引至自噬体,从而促进自噬的降解。这一研究揭示了p 6 2作为一个自噬适配体蛋白的重要功 能。p 6 2的 过 度 表 达 与 多 种 疾 病 的 发 展 相关1 3。研究发现p 6 2的泛素化修饰和翻译后修饰可以影响其与泛素化修饰蛋白的相互作用及募集能力1 4,这表明p 6 2的调控机制是多样且复杂的,可能涉及多个信号通路和修饰方式的调控。本研究结果显示,与WT C T组和p 6 2-KO C T组比较,WT S t a 4 h组和p 6 2-KO S t a 4 h组中U b蛋白表达水平显著升高,且在p 6 2敲除细胞中有更多的积累,特别是L C 3酯化水平的升高,强调了p 6 2与U b修饰的蛋白结合后使自噬作用增强。本研究证实了p 6 2在选择性自噬中的重要作用,作为底物接头蛋白,p 6 2能够募集泛素化修饰蛋白并促进其降解,这有助于深入了解细胞自噬的调控机制。通过比较WT和p 6 2-KO细胞中自噬体的形态和数量,发现p 6 2的敲除并不影响自噬体的形成,但影响了选择性自噬体底物的凝聚和降解。这表明自噬过程中不同组分的功能可以分开调节,从而揭示了选择性自噬的调控机制的复杂性。综上,本研究中p 6 2敲除后泛素化蛋白的积累,尤其是饥饿处理后泛素修饰蛋白的积累加剧,进一步说明p 6 2在自噬的泛素化系统中发挥重要功能。因此,本研究对于深入理解自噬与疾病之间的关系,并为相关疾病的治疗提供新的治疗靶点和策略具有重要意义。参考文献:1 KAA R N I RAN T A K,B L A S I AK J,L I TON P,e t a l.A u t o p h a g y i n a g e-r e l a t e d m a c u l a r d e g e n e r a t i o nJ.A u t o p h a g y,2 0 2 3,2:3 8 8-4 0 0.2 L I W,HE P,HUAN G Y,e t a l.S e l e c t i v e a u t o p h a g y o f i n t r a c e l-l u l a r o r g a n e l l e s:r e c e n t r e s e a r c h a d v a n c e sJ.T h e r a n o s t i c s,2 0 2 1,(1 1)1:2 2 2-2 5 6.3 TUR C O E,W I T T M,A B E R T C,e t a l.F I P 2 0 0 c l a w d o m a i n b i n d i n g t o p 6 2 p r o m o t e s a u t o p h a g o s o m e f o r m a t i o n a t u b i q u i t i n c o n d e n s a t e sJ.M o l C e l l,2 0 1 9,7 4(2):3 3 0-3 4 6.4 盛婵娟,王越,臧彩霞,等.泛素-蛋白酶体系统与阿尔茨海默病J.中国新药杂志,2 0 1 9,2 8(7):7 9 8-8 0 3.(下转1 1 3 1页)3211 第9期 刘世玉,等:p 6 2敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用A c t i v i t y o f N-A c e t y l c y s t e i n e a l o n e a n d i n c o m b i n a t i o n w i t h c o l i s t i n a g a i n s t p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a b i o f i l m s a n d t r a n-s c r i p t o m i c r e s p o n s e t o N-A c e t y l c y s t e i n e e x p o s u r eJ.M i c r o-b i o l S p e c t r,2 0 2 2,1 0(4):e 1 0 0 6 2 2.1 1 杜欣瑞,王俊瑞,周迪,等.金黄色葡萄球菌去定植在预防骨与关节手术 感 染 的 作 用 分 析 J.中 国 感 染 控 制 杂 志,2 0 2 3,2 2(7):8 5 6-8 6 3.1 2 HA S E NAU E R M D,HO H,E N GH C R,e t a l.F a c t o r s a s-s o c i a t e d w i t h t h e i n c i d e n c e a n d t i m i n g o f t o t a l k n e e a r t h r o-p l a s t y i n f e c t i o nJ.J A r t h r o p l a s t y,2 0 2 2,3 7(6 S):S 2 7 6-S 2 8 0.1 3 J A F A R I S M,C OY L E C,MO R T A Z AV I S M,e t a l.R e v i-s i o n h i p a r t h r o p l a s t y:i n f e c t i o n i s t h e m o s t c o mm o n c a u s e o f f a i l u r eJ.C l i n O r t h o p R e l a t R e s,2 0 1 0,4 6 8(8):2 0 4 6-2 0 5 1.1 4 程永刚,周胜虎,刘军,等.人工髋膝关节置换术后感染治疗进展J.中 华 关 节 外 科 杂 志(电 子 版),2 0 2 1,1 5(3):3 2 9-3 3 3.1 5 V I 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