藏兽医药用植物与抗生素联用对致病性大肠杆菌抑菌活性的研究.pdf
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1、202310期 总第403期在川西北高原牧区,广大牧民和兽医人员结合藏兽医药用植物资源优势总结和验证了一些藏兽医验方和偏方,在防治畜禽细菌传染病等方面具有积极作用1-2。基于此,笔者将61种常用藏兽医药用植物水提物与临床常用的抗菌药物联用,研究其对藏猪源致病性大肠杆菌的体外抑菌活性,以期为创制绿色中藏兽药提供数据参考。1材料与方法1.1藏兽医药用植物和菌株的来源61种藏兽医药用植物(包括26个科55个属)采自甘孜藏族自治州不同地区,由西南民族大学兽医药理学与毒理学实验室陈朝喜副教授鉴定,药物标本编号后保存于该实验室。药物敏感性试验使用的质控菌株ATCC25922也由该实验室保存。1.2抗菌药物
2、、培养基和化学试剂四环素(TET)、链霉素(STR)、氟苯尼考(FLR)、恩诺沙星(ENR)、氨苄西林(AMP)5种抗菌药物购自上海源叶生物科技有限公司;胰蛋白胨大豆(TSB)肉汤、麦康凯琼脂购自北京奥博星生物技术有限公司,MH肉汤、MH琼脂购自青岛海博生物技术有藏兽医药用植物与抗生素联用对致病性大肠杆菌抑菌活性的研究杨丹娇1,张敏1,吴建平1,蓝岚1*,潘瑶1,刘怡雯1,陈朝喜2,叶忠明1(1.甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所,四川 康定 626000;2.西南民族大学畜牧兽医学院,四川 成都 610041)摘要:为了解藏兽医药用植物联合抗菌药对致病性大肠杆菌的抑菌情况,本试验将61种藏兽医药
3、用植物水提物和5种抗生素联用,并对藏猪源致病性大肠杆菌(SCP-ExP-coli 2017-4307株)开展体外抗菌活性研究。藏兽医药用植物药敏试验表明,川西獐牙菜等12种药用植物水提物的MIC值为31.25mg/mL;山苦荬等22种药用植物水提物的MIC值为31.25mg/mL;白苞筋骨草等6种药用植物水提物的MIC值为62.5mg/mL;大籽蒿等12种药用植物水提物的MIC值为125mg/mL;手参等4种药用植物水提物的MIC值为250mg/mL;白花油麻藤等5种药用植物水提物的MIC值500mg/mL。联合药敏试验表明,白苞筋骨草、垂头菊和藏紫草等18种药用植物水提物与四环素、链霉素、氨
4、苄西林联用呈现相加作用,其中以垂头菊和藏紫草的相加作用最为广泛。关键词:藏兽医药用植物;水提物;抗生素致病性大肠杆菌;体外抗菌活性中图分类号:S853.74文献标识码:B文章编号:1001-8964(2023)10-0020-04收稿日期:2023-04-18基金项目:四川省科技厅苗子工程重点项目(2022JDRC0121)作者简介:杨丹娇(1992-),男,四川泸定人,硕士,兽医师,研究方向:高原动物疫病防控。E-mail:*通信作者:蓝岚(1983-),女,四川成都人,硕士,高级兽医师,研究方向:高原动物疫病防控。E-mail:试验研究20202310期 总第403期限公司;二甲基亚砜(D
5、MSO)等主要化学试剂均为分析纯级别。1.361种藏兽医药用植物水提物的制备采集61种藏兽医药用植物置于通风处自然风干,粉碎后过60目药典筛,分别取一定重量的粉末按1 10的比例加入灭菌水浸泡30min后煎煮1h,双层纱布过滤后将滤液浓缩、冷冻干燥,20 保存。临用前,准确称取冻干粉,用灭菌水或DMSO溶解后制成1g/mL的母液,4保存备用。1.4致病性大肠杆菌SCP-ExP-coli 2017-4307株的分离与鉴定大肠杆菌SCP-ExP-coli 2017-4307株分离自稻城县某藏猪原种场的腹泻粪便样本。首先利用麦康凯培养基和伊红美兰培养基交叉传代后初步鉴定,然后采用 PCR 扩增16S
6、 rDNA进行分子生物学鉴定,通过肠杆菌科细菌生化编码鉴定管(15e)进行生化鉴定,确定为大肠杆菌后将纯化菌株用30%甘油于低温下保存。1.5药物敏感性试验参照文献 3 方法略作改动:在96孔板的第112列加入100L MH肉汤,然后在第1列加入已配制好的水提物母液100 L作倍比稀释,最后1列作为空白对照,每药两次重复。挑取生长良好的中等大小菌落于MH肉汤中恒温静置培养1216 h,调整到0.5麦氏浊度,菌液稀释后加入 100 L 菌液至 96 孔板 111 列。37恒温培养1216h,观察并记录结果。采用同样方法测定ATCC25922和SCP-ExP-coli 2017-4307株对四环素
7、、链霉素、氟苯尼考、恩诺沙星和氨苄西林的最小抑菌浓度(Minimum InhibitoryConcentration,MIC)。1.6联合药敏试验采用棋盘法进行联合药敏试验4-5,以部分抑菌浓度(Fractional InhibitoryConcentration,FIC)评价61种藏兽医药用植物水提物与抗菌药物联用对 SCP-ExP-coli 2017-4307株的抑制作用。当FIC0.5时表示协同作用;0.5FIC1时表示相加作用;1FIC2时表示无关作用;FIC2时表示拮抗作用。2结果2.161种藏兽医药用植物水提物对SCP-ExP-coli 2017-4307株的抗菌效果评价61种藏兽
8、医药用植物水提物对SCP-ExP-coli 2017-4307株的MIC值分布见图1和表1。图161种藏兽医药用植物水提物对SCP-ExP-coli 2017-4307株的MIC值分布一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人人12226124515.62531.2562.5125250500MIC(mg/mL)05101520数量(种)三三三三三三三三三三三三三三三三
9、三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三三世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世世仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪仪川西獐牙菜、大托叶云实、牛尾蒿、乌奴龙胆、角茴香、角蒿、沙棘、乳白香青、秦艽、唐古特乌头、喜马拉雅紫茉莉、藏茴香12种药用植物对SCP-ExP-coli 2017-4307株的MIC值为15.625mg/mL;山苦荬、止泻木、水柏枝
10、、川西小黄菊、甘青青兰、甘青瑞香、红花绿绒蒿、异叶青兰、芫荽、垂头菊、兔耳草、草木犀、砂生槐子、点地梅、珠芽蓼、烈香杜鹃、臭蒿、高山绣线菊、高原毛莨、唐古特铁线莲、藏紫草、匙叶翼首草22种药用植物对SCP-ExP-coli 2017-4307株的MIC值为31.25 mg/mL;白苞筋骨草、肉果草、黄帚橐吾、瑞香狼毒、褐毛橐吾、螃蟹甲 6 种藏兽医药用植物的 MIC 值为62.5 mg/mL;大籽蒿、山矾、灰枝紫菀、花锚、白花刺参、草玉梅、夏至草、镰形棘豆、湿生扁蕾、锡金报春、褐毛风毛菊、藏党参12种药用植物对SCP-ExP-coli 2017-4307株的MIC值为125mg/mL;手参、高
11、原蚤缀、纤毛婆婆钠、紫花黄华 4 种药用植物对SCP-ExP-coli 2017-4307株的MIC值为250mg/mL;白花油麻藤、假耧斗菜、绵参、斑唇马先蒿、腊肠果 5 种药用植物对 SCP-ExP-coli2017-4307株的MIC值500mg/mL。2.261种藏兽医药用植物水提物和抗菌药物联用的效果评价61种藏兽医药用植物水提物与5种抗菌药物联用对SCP-ExP-coli 2017-4307株的FIC值见表2。由表2可知,61种药用植物与5种不同种类抗菌药物联用未表现出协同作用;试验研究21202310期 总第403期61种藏兽医药用植物和5种抗菌药物对SCP-ExP-coli 2
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