测定白酒中乳酸和乙酸含量的方法.pdf

测定白酒中乳酸和乙酸含量的方法赵璇，赵汉鹰，许迎子，李素琴(山西杏花村汾酒厂股份有限公司，山西汾阳032205)摘要:实验利用高效液相色谱，建立了一种测定白酒中乳酸和乙酸的检测方法，对白酒样品前处理条件进行了选择与优化。该方法符合方法学要求，可用于检测白酒中乳酸和乙酸含量，从而对白酒酿造、生产工艺以及勾兑等提供技术支持。关键词：高效液相色谱；白酒；有机酸；乳酸；乙酸中图分类号：TS262.3；TS207.3文献标识码：BDevelopment of Methods for Determining the Content of Lactic Acid andAcetic Acid in BaijiuZHAO Xuan,ZHAO Hanying,XU Yingzi,LI Suqin(Shanxi Xinghua village Fenjiu Factory Co.,Ltd.,Fenyang 032205,Shanxi,China)Abstract:In this experiment,a detection method for determining lactic acid and acetic acid in liquor was established by high performanceliquid chromatography,and the pretreatment conditions of Baijiu samples were selected and optimized.This method meets the methodologicalrequirements and can be used to detect the content of lactic acid and acetic acid in Baijiu,thereby providing technical support for Baijiubrewing,production process and blending.Key words:HPLC,Baijiu,organic acid,lactic acid,acetic acid有机酸能和醇经过酯化反应生成酯。有机酸含量的多少在一定程度上决定了酯的含量。有机酸，高级醇，酯等都是白酒中重要的风味物质，它们使白酒具有了独特的香气和味道。有机酸含量的多少影响白酒的口感从而对酒质产生影响。酸类物质能增加酒的后味。适量的酸可使酒香味协调，消除过量饮酒引起的易上头的情况。含酸量少的酒，寡淡无味，没有白酒特有的香味；含酸量太多，会出现杂味糙辣感。白酒中含量最多的有机酸是乙酸和乳酸。本实验选择 35下蒸馏去除白酒中的酒精，利用高效液相色谱对乳酸和乙酸进行梯度洗脱分离，用紫外检测器(TUV)对其进行检测，该方法符合方法学要求。可用于监测白酒中乳酸和乙酸含量，对白酒的酿造、生产工艺以及勾兑等都有着重要意义。1材料与方法1.1试剂：乳酸标准物质(CAS:50-21-5,纯度为99.9%,禹重科技公司)；乙酸标准物质(CAS:64-19-7,纯度为 99.8%，禹重科技公司)；磷酸（色谱纯），SIG-MA 公司；甲醇（色谱纯），迪马科技公司1.2试剂配制：0.12%磷酸（H3PO4）水溶液：移取1.2 mL H3PO4于 1000mL 容量瓶中定容。1.3仪器设备：Acquity Uplc H Class 型高效液相色谱配 TUV，自动进样器，柱温箱（Waters 公司）；优普超纯水机（成都优普仪器设备有限公司）；电子天平（精度 0.1 mg）；HH-6 型电热恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）；蒸发皿。1.4液相色谱条件如下：色谱柱：Symmetry誖 C18 柱；4.6250 mm（内径）,粒径为 5 m。流动相：A 相：0.12%H3PO4水溶液 980 mL加入 20 mL 甲醇。B 相:纯甲醇。采用梯度洗脱，梯度洗脱程序见表 1。检测波长：214 nm。流速：0.80 mL/min。收稿日期：2022-09-04作者简介：赵璇（1986-），女，研究生，分析化学专业，工程师，从事酒类质量分析与检测工作。文章编号:1002-8110（2023）05-0120-03第 50 卷 第 5 期2 0 2 3 年 9 月酿酒LIQUORMAKINGVol.50.5Sep.，2023120赵 璇，等：测定白酒中乳酸和乙酸含量的方法第五期2023柱温：30。进样量：10 L。2结果与分析2.1样品前处理的选择与优化我们进行了直接进样、样品稀释，结果发现这两种前处理均会导致保留时间偏移并影响峰形。故只能进行去乙醇试验，乙酸的闪点是 39，在低于39的温度下既要尽可能地缩短蒸出酒精时间又要有效去除酒精，所以选择的蒸馏温度为 35。移取白酒样品 10 mL 于蒸发皿中，在 35水浴锅上蒸馏至剩下 3 mL 左右，倒入 10 mL 容量瓶，用蒸馏水洗涤液蒸发皿并定容，用 0.22 m 滤膜过滤，供液相色谱进样。2.2乳酸、乙酸混标溶液的浓度见表 2，混标 3 液相色谱图见图 1。2.3标准曲线将 2.2 的乳酸、乙酸系列浓度混标溶液进样，乳酸标曲回归方程：Y=4.60e+002X+1.42e+003,校正曲线见图 2。乙酸标曲回归方程：Y=3.62e+002X+1.37e+003,校正曲线见图 3。2.4白酒中乳酸、乙酸的回收率、精密度2.4.1回收率白酒空白样品按上述 2.1 的步骤进行处理。其色谱图见图 4。白酒加标样品前处理：移取白酒样品 10mL 于蒸发皿中，加入乳酸、乙酸混标，在 35水浴锅上蒸馏至剩下 3mL 左右，倒入 10mL 容量瓶，清洗蒸发皿并定容，用 0.22m 滤膜过滤后液相色谱进样。白酒加标样品色谱图见图5。白酒乳酸回收率见表 3，乙酸回收率见表 4。表 1流动相梯度洗脱程序时间/min0912182025A/%1001004040100100B/%00606000表 2乳酸、乙酸混标溶液浓度项目乳酸乙酸单位：mg/L混标 18.2612.22混标 241.3061.1混标 3103.24152.75混标 4206.48305.5混标 5412.96611图 1混标 3 液相色谱图图 2乳酸校正曲线图图 3乙酸校正曲线图图 4白酒空白样品色谱图图 5白酒加标样品色谱图121（上接 119 页）研究酿造毛酸浆果啤，将感官评分和酒精度作为评价指标，进行毛酸浆添加量、毛酸浆浸提时间、发酵温度三个单因素试验，确定毛酸浆果啤的最佳酿造工艺：毛酸浆添加量为 6.4 g/L，毛酸浆浸提时间为 4.4 d，发酵温度为 12.5。酿造出的毛酸浆果啤色泽金黄，澄清有光泽，泡沫洁白细腻且持久，香气协调，杀口感适度，回味悠长，其感官评价高达 92分。参考文献1王艺,张庆钢,高蕊笑,甄仌,王莹,公绪金,张帆.毛酸浆的研究进展J.农产品加工,2020(08):72-76+81.DOI:10.16693/ki.1671-9646(X).2020.04.051.2FENG S,JIANG M,SHI Y,et al.Application of the ribosomalDNA ITS2 region of Physalis(Solanaceae):DNA barcoding andphylogenetic studyJ.Frontiers in Plant Science,2016,7:1047.3Hassan AI,Ghoneim M A M.A possible inhibitory Effect ofphysalis(Physalis pubescens L.)on diabetes in male ratsJ.WorldApplied Sciences Journal.2013,21(5):681-688.4ChenLX,XiaGY,HeH,etal.NewwithanolideswithTRAIL-sensitizingeffectfromPhysalispubescensL.J.RSCAdvances,2016,58(6):52925-52936.5Xia G,Li Y,Sun J,et al.Withanolides from the stems and leavesofPhysalispubescensandtheircytotoxicactivity.J.Steroids,2016,115:136-146.6夏桂阳,丁丽琴,陈丽霞,邱峰.毛酸浆抗肿瘤化学成分的分离与鉴定J.沈阳药科大学学报,2017,34(09):757-762.DOI:10.14066/21-1349/r.2017.09.005.7ZIMMER T B R,OTERO D M,PEDRA N S,et al.Biologicalpotential of hydroalcoholic extracts of Physalis pubescens L.J.Biocatalysis and Agricultural 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L-151.625103.25206.5测定结果/mg L-1141.908193.576297.062加标回收率/%108.71104.39102.31表 4白酒乙酸回收率项目回收率 1回收率 2回收率 3空白/mg L-1313.986313.986313.986加标量/mg L-176.375152.75305.5测定结果/mg L-1382.914455.356606.472加标回收率/%90.2592.5595.74表 5精密度项目乳酸乙酸测定浓度/mg L-164.499415.75864.042411.87664.622418.53665.031412.33564.669417.68665.109410.181RSD/%0.600.822.5实验注意事项在蒸酒过程中不要把酒蒸干，这样乳酸、乙酸含量均会大幅降低。在蒸酒过程中剩余酒不能太多，若残留乙醇过多会影响峰型及保留时间。3结果与讨论乙醇会导致保留时间偏移并影响峰形。只能进行去乙醇试验。本实验选择在 35下蒸馏去除白酒中的酒精，利用高效液相色谱对乳酸和乙酸进行梯度洗脱分离，用 TUV 检测器对其进行检测。该方法符合方法学要求。可用于监测白酒中乳酸和乙酸含量，对白酒的酿造、生产工艺以及勾兑等都有着重要意义。第五期2023酿酒122