蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液对皮肤抗炎抗衰功效的增效作用.pdf

第 53 卷 第 9 期2023 年 9 月Vol.53 No.9Sep.20231057 日 用 化 学 工 业（中英文）China Surfactant Detergent&Cosmetics Received:August 23,2022;Revised:August 29,2023.*Corresponding author.Tel.:[phone],E-mail:.DOI：10.3969/j.issn.2097-2806.2023.09.009Synergistic effect of silk peptides thermophilus fermentation on the skin anti-inflammatory and anti-aging activitiesTinghuanFang*,TingZheng,QingJiang,XiaoxiaLi,LirongTang（Hangzhou Qiandaohu Tianxin Co.,Ltd.,Hangzhou,Zhejiang 311700,China）Abstract:In order to study the synergistic effects of silk peptide fermented by thermophilus on skin anti-inflammatory,barrier moisturizing and anti-aging activities,silk peptides thermophilus fermentation was prepared referring to the method of microbial fermentation,and lipopolysaccharide（LPS）-induced keratinocytes（HaCaT cells）and hydrogen peroxide（H2O2）-induced fibroblasts（HDF cells）were used as research models.The inhibition rates of cell proliferation,the contents of interleukin 1（IL-1）,interleukin 6（IL-6）,aquaporin 3（AQP3）,filaggrin（FLG）,superoxide dismutase（SOD）,advanced glycosylation end products（AGEs）and human collagen I alpha 1（COL-1）were detected by colorimetric assay,enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）,et al.The results show that silk peptide fermentation can significantly reduce the expression of IL-1,IL-6 and AGEs,and can significantly promote the expression of FLG,AQP3,SOD and COL-1.Especially the silk peptide fermentation can more significantly inhibit the expression of IL-6 and AGEs,and can more significantly promote the migration of HDF cells and SOD synthesis than the single silk peptide.And also the silk peptide fermentation can more significantly reduce the expression of IL-1,IL-6 and AGEs,and can more significantly promote the expression of AQP3,HDF cell migration and SOD synthesis than the single fermentation of thermophilic bacteria.Compared with the single silk peptide and the fermentation of thermophilus,the silk peptide fermentation has obvious synergistic effects of anti-inflammatory,barrier moisturizing and anti-aging activities.Key words:silk peptide;thermophilic bacteria;silk peptide fermentation;anti-inflammatory;anti-aging;synergism2001601208040IL-6/(pg/mL)?5 g/L?20 g/L?#*&*&6040200AGEs/(ng/mL)?5 g/L?20 g/L?#*&*&1058第 53 卷开发与应用日 用 化 学 工 业（中英文）蚕丝蛋白为一种天然蛋白质，无毒无害无刺激性，其具有独特的分子结构、优良的机械性能、化学性能、极好的吸湿保湿性和抗微生物作用，由丝素和丝胶构成，其中丝素蛋白含量约占蚕丝的70%80%，丝胶则为20%30%，其中丝素蛋白是一种纤维状蛋白，是由一条长链和一条短链所构成的亚单位结构，长链主要由甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸等组成，而蚕丝脱胶后丝素蛋白经水解后可获得对人体具有多种生理功能的多肽和氨基酸混合物，并且随着生物医学领域研究进展，丝素己成为理想的生物材料，被广泛地应用于食品、制药和生物医药等领域，如蚕丝用作手术缝纫线已经有长达数十年的历史，且丝素蛋白在人造皮肤、人造骨骼、人造血管等仿生学领域已取得了突破性的进展1-3。且有研究人员通过评估小鼠耳部水肿模型的耳部组织厚度发现了蚕丝丝肽的抗炎活性，并且发现蚕丝丝肽可以通过降低血清IgE浓度从而改善特应性皮炎的发生4,5。而蚕丝蛋白用于化妆品具有悠久历史，本草纲目中曾有其可清除皮肤黑斑、治疗化脓性皮炎的记载，从天然蚕丝中提取的氨基酸，如丝氨酸、天冬氨酸、赖氨酸和谷氨酸等均为皮肤的营养要素，因而蚕丝蛋白具有促进细胞新陈代谢、增强皮肤细胞活力的作用，对防止皮肤衰老、缓解细小皱纹也具备一定功效，化妆品方面蚕丝蛋白主要有两种形式丝素粉和丝肽可作为优良的化妆品添加剂应用于各类化妆品中6-8。嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）是一种适于7580 高温中生长的微生物，嗜热栖热菌广泛分布于温泉、地热区土壤、海底火山口附近等，是一种含有特异性的超嗜热蛋白的耐热菌，由研究人员发现从嗜热栖热菌中可提取酶稳定性更高的超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD），且发现嗜热栖热菌发酵液具有抗皮肤衰老及促进皮肤修复的功效9,10。因此为探讨嗜热栖热菌发酵的蚕丝丝肽对抗炎抗衰功效的增效作用，本文参考微生物发酵方法制备蚕丝丝肽发酵液，并构建了相应细胞损伤模型在细胞和分子水平进行相关标志物的定量测试。1 实验部分1.1 主要材料、试剂与仪器嗜热栖热菌HB27，保藏号BAA-163，美国ATCC保藏中心；人永生化角质形成细胞（HaCaT），上海碧云天；人成纤维细胞（HDF），美国ATCC保藏中心；蚕丝丝肽，湖州新天丝生物技术有限公司；阳性对照四氢甲基嘧啶羧酸，广州同一化学有限公司。蛋白胨、麦芽汁、无水硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸铵、无水氯化铁、氯化钠，国药试剂；胎牛血清（FBS），美国Hyclone公司；青霉素、链霉素、脂多糖蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液对皮肤抗炎抗衰功效的 增效作用方婷欢*，郑 婷，蒋 晴，李晓霞，唐礼荣（杭州千岛湖天鑫有限公司，浙江 杭州 311700）摘要：为研究嗜热栖热菌发酵的蚕丝丝肽在皮肤抗炎抗衰功效上的增效作用，以脂多糖（LPS）诱导的角质形成细胞（HaCaT细胞）和双氧水（H2O2）诱导的成纤维细胞（HDF细胞）为研究模型，通过比色法、酶联免疫吸附（ELISA）等方法检测蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发酵液和蚕丝丝肽发酵液对细胞活力、炎症因子白介素1（IL-1）和白介素6（IL-6）的含量、屏障保湿相关蛋白水通道蛋白3（AQP3）和丝聚蛋白（FLG）的含量、衰老相关标志物超氧化物歧化酶（SOD）、晚期糖基化终产物（AGEs）和人1型胶原蛋白（Col-1）的含量变化的影响。结果表明，蚕丝丝肽发酵液能够显著降低IL-1，IL-6，AGEs含量，显著促进FLG，AQP3，SOD和Col-1表达，且相较于蚕丝丝肽能更显著抑制IL-6和AGEs表达，更显著促进HDF细胞迁移和SOD合成，而相较于嗜热栖热菌发酵液能更显著降低IL-1，IL-6和AGEs表达，更显著促进AQP3表达、HDF细胞迁移和SOD的合成，即认为蚕丝丝肽发酵液相较于单一的蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液具备抗炎、屏障保湿及抗衰功效的增效作用。关键词：蚕丝丝肽；嗜热栖热菌；蚕丝丝肽发酵液；抗炎；抗衰；增效中图分类号：TQ658 文献标识码：A 文章编号：2097-2806（2023）09-1057-081059第 9 期开发与应用方婷欢，等：蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液对皮肤抗炎抗衰功效的增效作用 （LPS）、双氧水（H2O2），美国Sigma公司；胰蛋白酶、DMEM培养基，分析纯，美国GIBCO公司；Fibroblast Growth Kit-Low Serum、Fibroblast Basal Medium，美国ATCC保藏中心；丝裂霉素，美国Sigma公司；CCK-8试剂盒，上海碧云天生物技术有限公司；人白介素1（Human interleukin 1，IL-1）ELISA试剂盒，英国Abcam公司；人白介素6（Human interleukin 6，IL-6）ELISA试剂盒，美国BD生物公司；人丝聚蛋白（Human filaggrin，FLG）ELISA试剂盒，美国LSBio公司；人水通道蛋白3（Human Aquaporin 3，AQP3）ELISA试剂盒，美国Mybiosource公司；超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；晚期糖基化终产物（Advanced glycosylation end products，AGE）测定试剂盒，英国Abbexa公司；人1型胶原蛋白（Human Collagen alpha 1，Col-1）ELISA试剂盒，美国Novus Biologicals公司。TS-2102型全温双层双开门恒温振荡器，常州国宇仪器制造有限公司；CL6R大容量冷冻离心机，湘仪离心机仪器有限公司；FORMA 700型超低温冰箱，美国Thermo公司；Direct-Q with pump型超纯水仪，美国Millipore公司；SW-CJ-2FD型超净化工作台，苏州净化设备有限公司；3K15型低温高速离心机，美国Sigma公司；Forma 3111型水套式CO2培养箱，美国Thermo公司；奥林巴斯倒置相差显微镜，日本奥林巴斯公司；Berthold LB941微孔板式多功能酶标仪，德国Berthold公司。1.2 实验方法1.2.1 发酵液制备取嗜热栖热菌HB27冻存液100 L接入装有100 mL培养基（pH=7.80.2）的500 mL锥形瓶中，37 下 180 r/min活化24 h，菌体活化后，将1 mL菌液接种到1 L培养基中，42 下180 r/min过夜扩大培养，随后将扩大培养的菌液转移至分别含0，5和20 g/L蚕丝丝肽的培养基中58 下180 r/min进行发酵24 h，随后将菌液冷却后于4 000 r/min离心20 min进行分离，取上清加入4%已于105 干燥脱水的活性炭，40 加热搅拌20 min进行杂质吸附，异味祛除，随后纱布粗滤除去碳渣冷却至室温，分别于4，4 000 r/min离心20 min取上清，再于4，4 500 r/min离心20 min取上清除去剩余碳渣，上清4 保存沉降过夜后用0.22 m抽滤除菌，得到发酵产物嗜热栖热菌单一发酵液、蚕丝丝肽（5 g/L）发酵液和蚕丝丝肽（20 g/L）发酵液11。1.2.2 细胞培养HaCaT细胞传代培养，培养条件为含有青霉素、链霉素以及10%FBS的DMEM培养基，当细胞融合至90%时，弃去旧培养基，用2 mL PBS洗涤细胞2次，弃去PBS后加入2 mL 0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液，置于显微镜下观察约30 s，当细胞变圆后迅速加入完全培养基终止消化，轻轻吹打收集细胞。800 r/min，4，离心5 min，弃上清完全培养基重悬细胞，分瓶培养传代。HDF细胞传代培养，培养条件为含有青霉素、链霉素、人成纤维生长因子、L-谷氨酰胺、抗坏血酸、氢化可的松、胰岛素以及2%FBS的Fibroblast Basal Medium培养基，当细胞融合至90%时，弃去旧培养基，用2 mL PBS洗涤细胞2次，弃去PBS后加入2 mL 0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液，置于显微镜下观察，当细胞变圆后迅速加入完全培养基终止消化，轻轻吹打收集细胞。800 r/min，4，离心5 min，弃上清完全培养基重悬细胞，分瓶培养传代。1.2.3 HaCaT细胞增殖抑制率按“1.2.2”所示分别将HaCaT细胞培养至对数生长期，将细胞分为对照组、阳性组、模型组、样品组，样品组包含蚕丝丝肽组、嗜热栖热菌发酵液组、蚕丝丝肽（5 g/L）发酵液组、蚕丝丝肽（20 g/L）发酵液组，其中四氢甲基嘧啶羧酸为阳性对照，除对照组外其余各组细胞均由含质量浓度为0.006 g/L的LPS的培养基进行孵育，6 h后分别加入3 g/L阳性对照样品及“1.2.1”发酵所得3 g/L的待测试样品，进行孵育24 h后采用CCK-8实验方法检测并计算各样品对HaCaT细胞的增殖抑制率。1.2.4 炎症及屏障保湿相关因子检测按“1.2.3”细胞分组，其中四氢甲基嘧啶羧酸为阳性对照，除对照组外其余各组细胞均由含质量浓度为0.006 g/L的LPS的培养基进行孵育6 h后分别加入 3 g/L阳性对照样品及“1.2.1”分别发酵所得3 g/L的待测试样品进行孵育24 h，随后根据各ELISA试剂盒检测各组细胞中IL-1，IL-6，FLG，AQP3的含量。1.2.5 HDF细胞增殖抑制率按“1.2.2”所示分别将HDF细胞培养至对数生长期，将细胞分为对照组、阳性组、模型组、样品组，样品组包含蚕丝丝肽组、嗜热栖热菌发酵液组、蚕丝丝肽（5 g/L）发酵液组、蚕丝丝肽（20 g/L）发酵液组，其中四氢甲基嘧啶羧酸为阳性对照，除对照组外其余各组细胞均由含终浓度为0.002 mol/L的H2O2的培养基进行孵育1 h后，阳性对照组和样品组分别加入3 g/L阳性对照样品及“1.2.1”分别发酵所得3 g/L的待1060第 53 卷开发与应用日 用 化 学 工 业（中英文）测试样品进行孵育24 h后，采用CCK-8实验方法检测并计算各样品对HDF细胞的增殖抑制率。1.2.6 HDF细胞划痕实验按“1.2.2”所示将HDF细胞培养至对数生长期，后转移至6孔板，待细胞增殖至6孔板80%90%时，弃培养基，加入丝裂霉素溶液5 g/mL，37，5%CO2常规培养箱静置1 h，除去液体后加入1 mL PBS溶液，以钢尺为标准，10 L枪头垂直于板面以及背侧横线划竖线，随后PBS冲洗3次，按照“1.2.5”所示细胞分组，置于37，5%CO2培养箱中常规培养，随后于划痕后0，24 h置于显微镜下摄片并记录摄片坐标，通过标记背侧面平行线位置，保证每次拍摄部位一致，以Image J软件分析每组细胞划痕面积，计算72 h划痕愈合百分比，重复3次实验。1.2.7 衰老相关标志物检测按“1.2.5”所示细胞分组，其中四氢甲基嘧啶羧酸为阳性对照，除对照组外其余各组细胞均由含终浓度为0.002 mol/L的H2O2的培养基进行孵育1 h后，阳性对照组和样品组分别加入3 g/L阳性对照样品及“1.2.1”分别发酵所得3 g/L的待测试样品进行孵育24 h，随后ELISA检测各组细胞中Col-1的含量，试剂盒检测各组细胞中SOD，AGEs的活力。1.2.8 结果统计分析应用OriginPro 8作图，结果表示为MeanSD。组间统计学差异采用t检验或单向方差分析，以P0.05为无显著性差异，P0.05及P0.01为有显著性和极显著性差异。2 结果与讨论2.1 样品对HaCaT细胞活力的影响角质形成细胞是表皮重要的构成细胞，其主要功能是形成皮肤屏障，保护皮肤免受环境损害维持皮肤正常功能。图1结果显示蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发酵液、蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液均能显著促进角质细胞增殖，促进角质细胞活力，即均具备一定抗炎功效，尤其蚕丝丝肽发酵液（P0.01）。2.2 样品对相关炎症因子的影响当皮肤受到外在刺激，机体防御机制开始加速运转分泌大量炎症因子，表现为红、肿、热、痛；IL-1和IL-6的分泌量是衡量炎症严重程度的指标之一，IL-1作为分泌型炎症因子，能够促进免疫应答引发局部炎症反应如血管舒张等，而IL-6属于结合型炎症因子，当IL-6的浓度较高时会对组织造成损害引发炎症反应12。蚕丝丝肽和蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液组相较于LPS诱导的模型组，IL-1和IL-6含量均受到极显著抑制（P0.01），即均具备抗炎功效，而相较于蚕丝丝肽组和嗜热栖热菌发酵液组，蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液组的IL-1和IL-6含量分别受到显著抑制（P0.05），即蚕丝丝肽发酵液相较单一的蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液具备明显的抗炎增效作用，见图2和3。#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.01，&代表与嗜热栖热菌发酵液相比P0.05图2 各样品对LPS诱导HaCaT细胞炎症因子IL-1含量的影响Fig.2 Ef fect of samples on the content of IL-1 in HaCaT cells induced by LPS24020016012040080IL-1/(pg/mL)?5 g/L?20 g/L?#*&*&#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.05，*代表与模型相比P0.01图1 各样品对HaCaT细胞活力的影响Fig.1 Effect of samples on HaCaT cell viability12080400Cell viability/%?5 g/L?20 g/L?#*1061第 9 期开发与应用方婷欢，等：蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液对皮肤抗炎抗衰功效的增效作用 2.3 样品对相关屏障保湿因子的影响在角质层中，FLG蛋白是参与皮肤屏障的重要因子，在参与组成皮肤表皮外层的角质包膜过程中，促进表皮分化，形成表皮角质层独特的屏障结构，在维持皮肤的屏障功能中具有重要作用；并且FLG是连接角蛋白纤维的重要分子，在角质层中上层FLG从角蛋白纤维束中解离出来，转化降解形成吸水性氨基酸混合物组成具有渗透活性的物质形成天然保湿因子（NMF），而FLG降解代谢产生的酸性产物在维持表皮的酸性环境中具有重要作用13,14。而AQP3主要表达于角质细胞膜上参与跨膜水转运的一组通道蛋白，是人类皮肤中表达量最丰富的水通道蛋白亚型，AQP3与皮肤保湿功能、创伤愈合具有非常重要的相关性，同时其与炎症性皮肤病等的病理机制相关15。样品组相较于模型组，HaCaT细胞合成屏障保湿相关蛋白FLG和AQP3含量均极显著上升（P0.01），即蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发酵液、蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液均具备屏障保湿功效，其中蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液组相较于嗜热栖热菌发酵液组的AQP3表达含量则显著上升（P0.05），即蚕丝丝肽发酵液相较单一的嗜热栖热菌发酵液具备明显的屏障保湿增效作用，见图4和5。#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.01，代表与蚕丝丝肽相比P0.05，代表与蚕丝丝肽相比P0.01，&代表与嗜热栖热菌发酵液相比P0.05图3 各样品对LPS诱导HaCaT细胞炎症因子IL-6含量的影响Fig.3 Ef fect of samples on the content of IL-6 in HaCaT cells induced by LPS2001601208040IL-6/(pg/mL)?5 g/L?20 g/L?#*&*&2.4 样品对HDF细胞活力的影响成纤维细胞作为皮肤中的主要细胞，对维持皮肤的弹性有重要作用，并且随着年龄的增长，人体皮肤成纤维细胞数量明显下降，这与皮肤产生皱纹、衰老密切相关16。如图6所示，各样品组均显著促进了HDF细胞增殖活力，即蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发酵#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.01图4 各样品对LPS诱导HaCaT细胞屏障保湿蛋白FLG含量的影响Fig.4 Ef fect of samples on the content of FLG in HaCaT cells induced by LPS6420FLG/(ng/mL)?5 g/L?20 g/L?#*#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.01，代表与蚕丝丝肽相比P0.05，&代表与嗜热栖热菌发酵液相比P0.05，&代表与嗜热栖热菌发酵液相比P0.01图5 各样品对LPS诱导HaCaT细胞屏障保湿蛋白AQP3含量的影响Fig.5 Ef fect of samples on the content of AQP3 in HaCaT cells induced by LPS1 0008006004002000AQP3/(pg/mL)?5 g/L?20 g/L?#*&*&1062第 53 卷开发与应用日 用 化 学 工 业（中英文）#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.05，*代表与模型相比P0.01，代表与蚕丝丝肽相比P0.05，代表与CS组相比P0.01，&代表与嗜热栖热菌发酵液相比P0.01图7 各样品对H2O2诱导HDF细胞迁移率影响Fig.7 Effect of samples on HDF cell mobility induced by H2O2B#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.05，*代表与模型相比P0.01图6 各样品对H2O2诱导HDF细胞活力的影响Fig.6 Effect of samples on the viability of HDF cells induced by H2O212080400Cell viability/%?5 g/L?20 g/L?#*液、蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液均能显著促进成纤维细胞增殖活力，即均具备一定抗衰老功效，尤其是蚕丝丝肽发酵液（P0.01）。2.5 样品对HDF细胞迁移率的影响成纤维细胞作为皮肤修复的主要细胞，提高其迁移能力对修复老年皮肤具有重要的意义。如图7A和B所示，阳性组及样品组相较于模型组均显著促进了HDF细胞迁移，即蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发酵液、蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液均能显著促进成纤维细胞迁移，即均具备一定抗衰老功效；蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液组相较于蚕丝丝肽组和嗜热栖热菌发酵液组则极显著地促进了HDF细胞迁移（P0.01），即蚕丝丝肽发酵液相较于单一的蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液具备明显的抗衰老功效的增效作用。2.6 样品对相关衰老标志物的影响众所周知体内SOD含量的水平及活性与衰老密切相关，其对清除体内自由基、抗氧化、抗炎有强大的功能，随着年龄的增加体内的SOD含量和活性也会随之下降。并且随着年龄的增加，组织中AGEs的逐渐积累是临床上老年性疾病的病理基础之一，被认为是衰老的生物学标志之一，因为机体中AGEs的积累会影响蛋白质、脂类、核酸的结构，导致这些物质生物学功能的改变，在皮肤中AGEs可与弹性蛋白和胶原蛋白交联影响它们的正常功能，并且还影响皮肤细120100806040200Relative migration ability/%?5 g/L?20 g/L?#*&*&对照模型阳性蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液蚕丝丝肽（5 g/L）发酵液蚕丝丝肽（20 g/L）发酵液0 h24 hA200m200m200m200m200m200m200m200m200m200m200m200m200m200m1063第 9 期开发与应用方婷欢，等：蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液对皮肤抗炎抗衰功效的增效作用 胞的粘附和生长过程，最终导致皮肤衰老、皱纹产生17。而作为影响皮肤功能的主要胶原蛋白之一的Col-1的含量与皮肤衰老密不可分，其含量的多少是评价皮肤衰老程度的有效指标之一，随着年龄的增长，Col-1交联键日益增多，胶原纤维越紧密，皮肤容易老化变得僵硬和松弛。图8，9和10样品组相较于H2O2诱导的模型组，均能够显著促进HDF细胞合成SOD和Col-1含量（P0.01），而AGEs生成含量除嗜热栖热菌发酵液组外其余样品组AGEs含量均受到显著抑制（P0.01），提示蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发酵液、蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液均具备一定抗衰功效，其中蚕丝丝肽（5和20 g/L）发酵液相较于蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液，显著促进了HDF细胞SOD的生成含量（P0.05），抑制了AGEs的生成含量（P0.05），即蚕丝丝肽发酵液相较于单一的蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液具备明显的抗衰增效作用。3 结论本文参考微生物发酵手段，即在适宜条件下利用微生物的分解作用，将目标原料经过特定的代谢途径转化为更易于被人体利用的产物，并通过微生物生长代谢活动促进活性成分分离，从而产生新的功效或产生协同增效的作用18，制备得到蚕丝丝肽-嗜热栖热菌发酵液（即上述蚕丝丝肽发酵液），并在细胞和分子水平探究蚕丝丝肽发酵液相较于单一的蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液在抗炎、屏障保湿及抗衰等功效上的作用及相应机制。1）蚕丝丝肽发酵液显著促进LPS诱导的HaCaT细胞活力和屏障保湿蛋白（FLG和AQP3）表达，且促进AQP3表达程度要优于单一的嗜热栖热菌发酵液，同时蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液显著降低该诱导模型的炎症因子IL-1和IL-6，且降低程度要优于单一的蚕丝丝50403020100SOD/(U/mL)?5 g/L?20 g/L?#*&*&#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.01，代表与蚕丝丝肽相比P0.05，代表与蚕丝丝肽相比P0.01，&代表与嗜热栖热菌发酵液相比P0.01图8 各样品对H2O2诱导HDF细胞合成SOD含量的影响Fig.8 Ef fect of samples on the content of SOD in HDF cells induced by H2O26040200AGEs/(ng/mL)?5 g/L?20 g/L?#*&*&#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.01，代表与蚕丝丝肽相比P0.05，&代表与嗜热栖热菌发酵液相比P0.05图9 各样品对H2O2诱导HDF细胞合成AGEs含量的影响Fig.9 Ef fect of samples on the content of AGEs in HDF cells induced by H2O23020100Col-1/(ng/mL)?5 g/L?20 g/L?#*#代表与对照相比P0.01，*代表与模型相比P0.01图10 各样品对H2O2诱导HDF细胞合成Col-1含量的影响Fig.10 Ef fect of samples on the content of Col-1 in HDF cells induced by H2O2 1064第 53 卷开发与应用日 用 化 学 工 业（中英文）肽和嗜热栖热菌发酵液，即认为蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液具备抗炎和屏障保湿增效作用。2）蚕丝丝肽发酵液显著促进H2O2诱导的HDF细胞活力及迁移，显著促进了该诱导模型中的衰老标志物SOD及Col-1含量，显著降低了衰老标志物AGEs含量，且其对SOD含量的促进及对AGEs含量的降低程度要优于单一的蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液，即认为蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液具备抗衰增效作用。以上实验结果提示嗜热栖热菌发酵得到的蚕丝丝肽发酵液在上述功效中具有明显的协同增效作用，为进一步探讨及应用提供新的实验依据，同时关于其增效机理则需要进一步的实验研究确定。参考文献：1 Peng Xiaohong.Composition and function of amino acids in silk J.Newsletter of Sericulture and Tea,2005,121（3）:12-14.2 Liang Liefeng,Wen Jie,Lu Juan,et al.Study on bioactivity of silk fibroin J.Silk Monthly,2009（12）:22-24.3 Wan Qiong,Hu Qi.Overview of development and comprehensive application of silk protein J.Modern Silk Science and Technology,2012,27（3）:111-113.4 Dae Won Kim,Hyun Sook Hwang,Duk-Soo Kim.Effect of silk fibroin peptide derived from silkworm Bombyx mori on the anti-inflammatory effect of Tat-SOD in a mice edema model J.BMB Reports,2011,44（12）:787-792.5 Yasuhira Ikegawa,So Sato,Garbeen Lim.Amelioration of the progression of an atopic dermatitis-like skin lesion by silk peptide and identification 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