草珊瑚多糖消炎止血和抗氧化活性研究初探.pdf
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1、74JIANGXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE中药研究草珊瑚多糖消炎止血和抗氧化活性研究初探马秋婷1 朱钰晨1 万小光2 洪滔1 张鸿1 刘志勇1(1.江西中医药大学 南昌330004;2.江西草珊瑚科技有限公司 南昌330029)摘要目的:研究草珊瑚多糖的消炎止血及抗氧化作用。方法:通过回流提取法提取草珊瑚多糖,利用对 DPPH 和 ABTS的清除能力,验证草珊瑚多糖的抗氧化能力;体内动物实验评价草珊瑚多糖消炎止血效果。结果:草珊瑚多糖的提取率为6.31%。抗氧化活性实验结果显示:当草珊瑚多糖浓度为 0.8mg/mL 时,对 DPPH 的清
2、除率为 73.97%,对 ABTS 的清除率高达 88.76%。小鼠止血实验表明,当草珊瑚多糖剂量为 70mg/kg 时,具有较强的止血效果,但当剂量为 140mg/kg 时,草珊瑚多糖的止血效果高于云南白药组;体内消炎实验表明,注射角叉菜胶 4h 后,当草珊瑚多糖剂量为 200mg/kg 时,能减轻大鼠的足肿胀度。结论:草珊瑚多糖具有较强的体内抗氧化能力和消炎止血能力。关键词草珊瑚多糖;抗氧化活性;出血时间;抗炎症作用中图分类号:R285.5 文献标志码:A草珊瑚,又名肿节风、接骨木、竹节茶等,最早以“接骨草”见于本草拾遗1,是金粟兰科植 物 草 珊 瑚 Sarcandra glabra(T
3、hunb.)Nakai 的干燥全草,主要分布于长江流域以南的大部分地区,如江西、福建、贵州等地,也是闽南道地药材之一2。草珊瑚性味苦、辛、平,归心、肝经,具有清热凉血、解毒消斑、祛风止痛等功效3。现代药理学研究发现其主要有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用,因其毒副作用小、具有较好的消炎止痛等疗效4,在临床应用中具有较高的应用价值,常用来治疗感冒高热、疮疡脓肿、血热紫斑、紫癜、烧伤、风湿痹痛、跌打损伤等疾病5。目前,国内以草珊瑚为主要原料生产多种中成药产品,例如草珊瑚含片、肿节风浸膏、血康口服液、肿节风片等,临床应用广泛。除药用以外,草珊瑚在我国还有悠久的食用历史,民间有用水冲泡茶饮的习俗。草珊
4、瑚中含有多种化学成分,主要有香豆素类、黄酮类、酚酸类、倍半萜类、大分子蛋白和多糖类等6。研究发现,多糖作为中药的活性物质之一,具有广泛的药理活性,因其毒副作用小、功能广泛、安全性高,被广泛关注。据相关报道,草珊瑚多糖是草珊瑚中水溶性成分,为抗免疫性血小板减少性紫癜的有效成分7。草珊瑚中一些酸性多糖结构也具有较好的抗炎、抗氧化活性8,但相关研究较少。因此,本次研究通过氧化自由基清除和大鼠足肿胀实验来验证其抗氧化抗炎能力,采用小鼠断尾止血实验验证其止血能力。1 仪器和材料1.1 主要材料与试剂95%乙醇(西陇化工股份有限公司);DPPH(源叶生物,批号:A800764);ABTS(上海麦克林生化科
5、技有限公司,MB3206);抗坏血酸(Solarbio,货号:A8100);角叉菜胶(Solarbio,货号 C8830);以上试剂纯度均为分析纯。草珊瑚饮片(江西汇中中药股份有限公司);云南白药(云南白药集团有限公司);阿司匹林(石药集团欧意药业有限公司)。1.2 主要仪器与设备水浴锅(上海跃进医疗器械有限公司,型号 HH.WB22-550-11);超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂,型号 CQ-250A-DST);离心机(Cence 湘仪,型号 TDZ5-WS);旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂,型号 RE5205);冷冻干燥机(美国 LABCONCO 公司);电子分析天平(北京塞多利斯天
6、平有限公司);纯水仪(型号 Milli-Q-Zntegral10,江西鼎技科学仪器有限公司,型号BS200S-WEI);旋涡混合仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司,型号 VORTEX-6);多功能酶标仪(Thermo 公司)。1.3 实验动物小鼠为 SPF 级昆明种雄性健康小白鼠 50 只,体重 1822g。大鼠为 SPF 级雌性 SD 大鼠 48 只,基金项目:江西中医药大学双一流项目(JXSYLXK-ZHYA0138);江西中医药大学省级创新创业训练计划项目(S202310412055)。通信作者:刘志勇,博士,教授,研究员,硕士生导师。E-mail:。75江西中医药 2023 年 10
7、月第 10 期总第 54 卷第 490 期中药研究体重 200220g,由江西中医药大学实验动物科技中心提供,饲养在江西中医药大学实验动物科技中心 SPF 级屏障系统内,环境温度为 2023、湿度 45%55%。实验动物合格证编号:SYXK(赣)2022-0002,使用许可证编号:SCXK(赣)2018-0003,受理编号:20221129004。本项目全程注意实验动物福利伦理,遵循 3R 原则,项目得到江西中医药大学实验动物伦理委员会的批准。2 方法2.1 草珊瑚多糖的提取参照邵佳等9的提取方法并稍作修改。取草珊瑚全草饮片 30g,置于圆底烧瓶中,采用水提醇沉法,按提取温度 95,提取时间
8、4h,料液比 120回流提取 3 次,合并滤液,抽滤,减压浓缩至体积的 1/4,加入 3 倍量的 95%乙醇,慢加快搅,4醇沉过夜,弃去上清液,取下层沉淀,3000r/min 离心10min,得多糖沉淀,冷冻干燥,即得草珊瑚粗多糖。2.2 草珊瑚粗多糖得率的计算%=100%?2.3 草珊瑚多糖的抗氧化能力测定2.3.1草珊瑚多糖 DPPH 自由基清除活性用无水乙醇配置 0.05mg/mL 的 DPPH 溶液。多糖样品用超纯水溶解,制成质量浓度为 1mg/mL 的多糖溶液,然后配成质量浓度为 0.08、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL 的待测多糖样品溶液。取 100L 多糖样品与
9、 100LDPPH 混合液,于 517nm 测定吸光度,作为样品组;测定 100L 多糖样品与 100L 蒸馏水混合液的吸光度,作为空白组;测定 100L 蒸馏水和 100LDPPH 混合液的吸光度,作为对照组。室温下避光放置 20min,于 517nm 处测定吸光度。以抗坏血酸(Vc)作为阳性对照,平行测定 3 次。按照下列公式计算 DPPH 自由基清除能力。%=%AAA?公式中 A样品组:100L 样品液+100LDPPH混合液;A空白组:100L 样品液+100L 蒸馏水;A对照组:100L 蒸馏水+100LDPPH 混合液。2.3.2 草珊瑚多糖 ABTS 自由基清除活性 根据 Liu
10、等10的方法进行测定并稍作修改。配制 7mmol/LABTS 和 4.96mmol/L 过硫酸钾等体积混合,在室温下避光静置 1216h,得到 ABTS 自由基储备液。然后用无水乙醇将混合液稀释至 40 倍。多糖样品用超纯水溶解,制成质量浓度为 1mg/mL 的多糖溶液,然后配成质量浓度为 0.08、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL 的待测多糖样品溶液。于 96 孔板中,分别加入不同浓度的多糖样品溶液 50L 与 150LABTS 混合液,作为样品组;以 150L 蒸馏水替代ABTS 混合液,作为空白组;50L 蒸馏水与 150LABTS 混合液,作为对照组。避光静置 20mi
11、n。在酶标仪下测定 734nm 处的吸光度,平行测定 3 次,按照下列公式计算每个浓度的 ABTS 清除率(%)。%=%AAA?公式中 A样品组:50L 样品液+150LABTS 混合液;A空白组:50L 样品液+150L 蒸馏水;A对照组:50L 蒸馏水+150LABTS 混合液。2.4 草珊瑚体内止血实验2.4.1 分组及给药 将小鼠随机分为 5 组,分别为空白对照组,阳性组(云南白药组 50mg/kg),草珊瑚低、中、高剂量组(35、70、140mg/kg),每组 10 只。空白对照组灌胃同等体积的生理盐水,给药组分别灌胃不同浓度的草珊瑚多糖溶液,每日1次,连续6d。2.4.2 小鼠出血
12、时间的测定 在第 6 次给药 0.5h后,剪断小鼠尾尖(约 0.3cm),待血液自行溢出开始计时,每隔 15s 用滤纸吸去血滴,直至滤纸吸时无血停止计时,即为出血时间。2.5 大鼠足肿胀实验2.5.1 分组及给药 将大鼠分为 6 组,每组 8只,分别分为正常对照组、模型组、阳性组(阿司匹林组)、给药组(草珊瑚多糖低、中、高剂量组)。正常对照组和模型组均灌胃同体积的生理盐水;阳性组给药剂量为 50mg/kg;给药组的低、中、高剂量分别为 50、100、200mg/kg。每日 1 次,连续 6d。2.5.2 大鼠足肿胀的测定 实验开始前,分别在每只大鼠左后足部做标记,测定大鼠未造模前的初始容积。按
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