miR-29c-3p_IGF1分子轴对肝星状细胞活化增殖和凋亡的作用机制.pdf

目的探讨miR-29c-3p通过IGF-1对肝星状细胞（hepatic stellate cells，H SCs)活化，增殖和凋亡的影响。方法原代培养小鼠HSCs，并通过免疫荧光检测HSCs标志物-SMA表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c-3p和IGF-1的靶向关系。TGF-激活HSCs，并且外源性调控miR-29c-3p和IGF-1的表达水平后，分别采用Westernbolt，CCK-8，克隆形成实验和流式细胞术检测活化HSCs中活化相关蛋白（-SMA，DDR2，FN1，I T G B1和GFAP)的表达，增殖，克隆形成数和调亡。结果-SMA阳性表达表明成功分离小鼠HSCs。m i R-2 9c-3p m i m i c 可降低野生型IGF-1的荧光素酶活性，但是对突变型IGF-1没有影响。过表达miR-29c-3p和低表达IGF-1能减少-SMA，D D R2，FN1和ITGB1表达，增加GFAP的表达，并且降低HSCs的增殖活力和克隆形成数，上调其调亡比例。结论miR-29c-3p通过靶向抑制IGF-1表达，进而抑制HSCs活化和增殖，并促进其调亡。关键词酒精性肝病；肝星状细胞；活化；增殖；凋亡；miR-29c-3p；IG F-1中图分类号】R735.2文献标志码 A文章编号】2 0 95-6 10 X(2023)09-0007-08Effect of miR-29c-3p/IGF1 Molecular Axis on Activation,Proliferation and Apoptosis of Hepatic Stellate CellsZHANG Liang,WANG Baoquan,LEI Xifeng,WANG Xu,KE Yang,ZHANG Wei)(1)Dept.of General Surgery,Weinan Central Hospital,Weinan Shaanxi 714000;2)Dept.ofHepatobiliary and Pancreatic Surgery,The 2nd Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming Yunnan 650101,China)Abstract Objective To investigate the effects of miR-29c-3p on the activation,proliferation andapoptosis of hepatic stllate cells(HSCs)via IGF-1.Methods Primary mouse HSCs were cultured and theexpression of HSCs marker a-SMA was detected by immunofluorescence.By dual-luciferase reporter gene assaywas conducted to Validate the Targeting Relationship between miR-29c-3p and IGF-1.After TGF-activation ofHSCs and exogenous regulation of miR-29c-3p and IGF-1 expression,the expression of activation-related proteins(a-SMA,DDR2,FN1,ITGB1 and GFAP),proliferation,colony-forming number and apoptosis in activatedHSCs were detected by Western bolt,CCK-8,colony-forming unit assays and flow cytometry,respectively.Results Positive expression of a-SMA indicated that the successful isolation of mouse HSCs.miR-29c-3psignificantly reduced the luciferase activity of wild-type IGF-1,but had no effect on mutant IGF-1.Over-收稿日期 2 0 2 3-0 4-2 6基金项目云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目（2 0 2 0 0 1AY070001-147)作者简介张梁（198 5），男，陕西渭南人，医学学士，主治医师，主要从事胃肠肿瘤及各类肝炎的临床治疗与基础研究工作。通信作者柯阳，E-mail：k e y a n g 12 18 12 6.c o m；张玮，E-mail：Zw w w 2 16 8 8 6 4 16 3.c o m8expression of miR-29c-3p and hypo-expression of IGF-1 significantly decreased a-SMA,DDR2,FN1 andITGB1 expression,increased GFAP expression,and decreased proliferation viability and colony-forming numberof HSCs and upregulated their apoptotic ratio.Conclusion miR-29c-3p inhibits the activation and proliferation ofHSCs and promotes their apoptosis by targeting IGF-1 expression.Key words Alcoholic liver disease;Hepatic stellate cells;Activation;Proliferation;Apoptosis;miR-昆明医科大学学报29c-3p;IGF-1第44卷过量饮酒会促进酒精性肝病（alcoholic liverdisease，A LD)，如脂肪变性、脂肪性肝炎、纤维化到肝硬化，最终导致肝细胞癌，这是所有慢性肝病的主要死亡原因 1-2 。在ALD的发展进程中，肝星状细胞(hepatic stellate cells，H SCs)扮演者重要的角色。HSCs是慢性肝损伤创面愈合相关纤维化过程的主要参与者之一 3-4。在健康器官中，它们是非实质细胞群的一部分，占据肝细胞和窦状内皮细胞之间的间隙 5。在组织损伤、炎症和伴随的可溶性介质（例如TGF-）激活后，HSCs转分化为肌成纤维细胞样细胞，表现出增殖、收缩和成纤维特性，成为纤维化肝脏中纤维性胶原的主要来源4，6 。HSCs还参与邻近细胞的复杂交互，以促进肝纤维化进展。因此，阐明HSCs的分子调控机制对ALD的治疗具有重要的意义。微小RNA（m ic r o RNA s，m iRNA s）是一种由1824个核苷酸的组成的非编码RNA，通常情况下，miRNA在细胞质RNA诱导沉默复合体中与靶mRNA的3-UTR相互作用以抑制mRNA翻译和诱导降解它 7-8 。具体来说，一些miRNA，如miR-122和miR-21已被证明在ALD的肝纤维化的发展中发挥作用，调节包括组织炎症、细胞凋亡和HSCs的激活等过程 9-10 。此外，由于miRNA释放到血液中的疾病依赖性以及它们在血清中的相对稳定性，miRNA是检测ALD严重程度和致癌性的潜在非侵袭性生物标志物 1。近期，Zhang等 12 通过生物信息学分析发现，miR-29c-3p在ALD模型小鼠肝脏的表达水平显著低于正常小鼠，且预测其为ALD治疗的潜在靶标。然而，目前还没有文献报道，miR-29c-3p对ALD中HSCs活化，增殖和凋亡的调控机制。综上所述，本研究拟探讨miR-29c-3p在静息和活化HSCs中的表达差异，并且检测其对HSCs活化，增殖和亡的影响，此外，笔者还拟通过生物信息学方法预测miR-29c-3p的下游靶标，并验证miR-29c-3p是否通过该靶标参与HSCs生物学行为的调控1材料与方法1.1小鼠HSCs的原代培养和鉴定从C57BL/6J小鼠(2 4.0 2 6.0 g，8 10 周龄)中分离HSCs。简而言之，C57BL/6J小鼠原位灌注四乙酸和胶原酶获得全肝细胞悬液，用Percoll密度梯度离心法获得HSCs。将细胞调整到310细胞/mL，接种在2 5cm的培养瓶中，其中含有包含10%胎牛血清的5mLDMEM完全培养基和1%青霉素/链霉素。采用TGF-活化HSCs后，采用免疫荧光检测HSCs活化标志物-SMA的表达。简而言之，HSCs与一抗抗-SMA（1：2 50)在4下孵育过夜，随后用二抗染色。在40 0 倍放大的荧光显微镜下测量细胞-SMA荧光阳性表达的变化并收集图像。1.2细胞分组及转染首先，为观察miR-29c-3p对HSCs的影响，将细胞分为NC组（未转染）、NCmimic组（转染miRNAmimic阴性对照）和miR-29c-3pmimic组（转染miR-29c-3pmimic)。为进一步观察miR-494-3p和IGF-1对HSCs的影响，将细胞分为NC组（未转染）、sh-NC组（转染 sh-NC阴性对照）、sh-IGF-1组（转染 sh-IGF-1）和 sh-IGF-1+miR-29c-3pinhibitor组（同时转染sh-IGF-1和miR-29c-3pinhibitor)。m iR-2 9 c-3p m im ic/in h ib it o r和sh-IGF-1，及它们对应的阴性对照购买于广州锐博生物技术有限公司。将HSCs接种于6 孔板（510 4细胞/mL），按照说明书使用Lipofectamine 2000试剂及分组信息，进行50 nMmiR-29c-3pmimic/inhibitor/NCmimic/sh-IGF-1/sh-NC的转染。转染48 h后，采用RT-qPCR和WB检测转染效率。1.3实时荧光定量聚合酶链反应（real-timequantitative polymerasechain reaction,RT-qPCR)使用TRIzol Regent按照说明书提取HSCs的总RNA样本，然后用TurboDNase试剂盒去除第9期DNA。用NanoDrop对提取的总RNA进行定量。用带用gDNAEraser的PrimeScriptTMRT试剂盒逆转录将2 g总RNA逆转录为cDNA。采用SYBR Green PCR Master Mix 在 Bio-Rad Real-TimePCR仪上进行qPCR检测miR-29c-3p的表达。采用U6作为内部参考。每个数据重复3次，用2-Ct法计算miR-29c-3p的相对表达水平。本研究使用的引物如下：miR-29c-3p sense：5-GCTGACCGATTTCTCCTGGT-3；1miR-29c-3pantisense:5-TCCCCCTACATCATAACCGA-3;U6sense:5-CTAGATAATGGTGCTGATAGATGGA-3;U6 antisense:5-GGCACACCAGAAATCGAAGC-3。1.4免疫印迹实验(western blot，W B)使用RIPA裂解缓冲液从HSCs中提取总蛋白，使用BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，将6 0 g总蛋白质样本进行分离后，转移到硝化纤维素膜上。用5%脱脂牛奶进行阻断，在4下用小鼠单克隆抗a-SMA(1:1000)，D D R2(1:2 0 0 0)，FN1(1:10 0 0),ITGB1(1：2 0 0 0)和 GFAP(1：10 0 0)孵育过夜。用TBST清洗膜，然后与适当的辣根过氧化物酶结合的二抗孵育。采用增强型化学发光试剂进行膜的显影，并使用ImageLabTM软件捕获信号并定量条带灰度值。1.5双荧光素酶报告基因实验采用Starbase数据库预测IGF-1和miR-29c-3p的3 UTR结合序列。用PCR分别扩增野生型和突变型IGF-1与miR-29c-3p的3 UTR结合序列，将片段装人pMIR-REPORTluciferasemicroRNAexpression reporter vector。参照 Lipofectamine 2000试剂盒说明书，将0.1g野生型和突变型的IGF-1荧光素酶报告载体分别共转染到带有miR-29c-3pmimic的HEK-293细胞中。转染48 h时后，收集细胞裂解液，根据制造商的说明书，使用双荧光素酶报告基因检测试剂盒测量各组的荧光素酶活性。1.6 CCK-8 实验采用CCK-8试剂盒检测HSCs的细胞活力。简而言之，将510 4细胞/mL的各组HSCs加人96孔板中孵育2 4h。各组HSCs转染2 4、48 和72h后，分别在各孔加入CCK8溶液。2 h后，使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。1.7克隆形成实验各组HSCs(5102细胞/mL)接种到含有37 张梁，等miR-29c-3p/ICF1分子轴对肝星状细胞活化，增殖和凋亡的作用机制染色2 0 min，肉眼计数细胞克隆数。1.8流式细胞术采用AnnexinV-FITC/PI试剂盒检测HSCs调亡情况。取1AnnexinV结合液50 0 L制备终浓度为110 细胞/mL的HSC悬液，加入6 孔板上。在细胞悬液中加人5L AnnexinV-FITC和5L丙二碘，室温暗培养15min。流式细胞术检测细胞凋亡情况。坏死细胞位于左上区（AnnexinV-，PI+），晚期调亡细胞位于右上区（AnnexinV+，PI+)，活细胞位于左下区（AnnexinV-，PI-)，早期凋亡细胞位于右上区（AnnexinV+，PI-)。1.9统计学处理所有数据重复3次独立实验，数据以均数标准差表示，并通过SPSS22.0软件进行统计分析。根据数据组成，2 组间比较使用studentst检验，多组间比较采用单因素方差分析（两两比较采用LSD法)，P0.05为有统计学意义。2结果2.1HSCs的分离及miR-29c-3p表达差异如图1A所示，-SMA阳性表达表明成功从小鼠中分离出HSCs。T G F-处理细胞后，HSCs活化相关蛋白-SMA，D D R2，FN1和ITGB1表达水平明显增加，而GFAP的表达水平则反之(P0.01，图1B)。值得注意地，miR-29c-3p在激活的HSCs中呈现低表达(P0.01，图1C)。以上结果表明，HSCs被成功分离并激活，且miR-29c-3p在不同状态的HSCs中异常表达。2.2miR-29c-3p对HSCs活化，增殖和凋亡的影响由于miR-29c-3p在HSCs 中的异常状态，进一步探讨了miR-29c-3p对HSCs活化，增殖和调亡的影响。首先，通过miRNAmimic外源性的调控了活化的HSCs中miR-29c-3p的表达。转染效率结果表明，miR-29c-3pmimic可以增加活化的HSCs中miR-29c-3p的表达水平（P0.001,图2 A)。W B结果表明，过表达miR-29c-3p能够减低活化相关蛋白-SMA，D D R2，FN1和ITGB1表达水平，并增加GFAP的表达(P0.01,图2 B)。相较于NCmimic组，miR-29c-3pmimic组中活化HSCs的增殖活力(P0.01，图2 C)和克9预热培养基的6 孔板中，置于37 培养箱中培养。每2 d更换一次培养基，放置14d。随后，各组HSCs用1：3乙酸/甲醇固定30 min，用Giemsa10昆明医科大学学报ADAPI第44卷-SMAMergeB-SMADDR2FN1ITGB1GFAPGAPDHFig.1Successful isolation of HSCs and differential expression of miR-29c-3p in HSCs of different status.A：采用IF检测HSCs标志物-SMA是否表达；B：T G F-处理HSCs前后，WB检测活化相关蛋白（-SMA，D D R2，FN1，IT G B1和GFAP)的表达；C：在静息及激活状态HSCs中，miR-29c-3p的表达差异。*P0.01，*P0.0 0 1。A1086420NCNCmimicmiR-29c-3pmimicDC-TGFF-TGF-TGF-UIOonTGF37kDa120 kDa285kDa135kDa49kDa37kDa12Repetition图1成功分离HSCs，并且miR-29c-3p在不同状态的HSCs中差异表达Bmimic3P*-SMALDDR2DFN1ITGB1GFAPGAPDHNCNon-TGF 3TGF*23-SMADDR23P2.037kDa1.5120 kDa1.0285kDa0.5135 kDa49kDa37kDaRepetitionNCmimic32FN1ITGB1GFAPNCNCmimigmiR-29c-3pmimic*0-SMADDR2 FN1 ITGB1 GFAPmiR-29c-3pmimic*Non-TGF TGF C1201008060miR-29c-3pmimic0h24h 48h72hTime(h)80604020NCNCmimicNCNCmimic*miR-29c-3pmimicNC1-1/E1E62010.01%H-Hdto19.4/28%102.6104105106FITC-HFig.2 miR-29c-3p inhibits the activation and proliferation of HSCs and promotes their apoptosis.A：采用RT-qPCR检测miR-29c-3pmimic的转染效率；B：通过WB检测miR-29c-3p对活化相关蛋白（-SMA，D D R2,FN1，I T G B1和GFAP)表达的影响；C：C C K-8 试剂盒检测不同组别中TGF-激活的HSCs增殖活力；D：克隆形成实验检测miR-29c-3p对活化HSCs的克隆形成数的影响；E：流式细胞术检测活化HSCs的凋亡比例。*P0.01，*P 0.0 0 1。NCmimic2-1/E16201Q2-1Q2-20.01%H-dQ2-45.70%107108.6miR-29c-3pmimic62013-1/E1Q2-1Q2-20.00%0.02%H-HdQ2-493.54%6.44%102:61041051061071086FITC-H图2 miR-29c-3p抑制HSCs的活化和增殖，并促进其凋亡Q2-10.03%102.6104 105 10%107108.6FITC-HQ2-20.02%Q2-414.17%20151050NCNCmimicmiR-29c-3pmimic第9期隆形成数(P0.01，图2 D)均有降低，并且调亡比例增加(P0.01，图2 E)。以上结果表明，miR-29c-3p能够抑制HSCs的活化和增殖，并促进其调亡。2.3miR-29c-3p下游靶标预测及验证调控下游mRNA的表达是miRNA在生物学进程中的主要功能之一。因此，笔者通过Starbase数据库预测了miR-29c-3p的下游可能靶标。如图3A所示，IGF-1可能是miR-29c-3p的下游靶标，并且通过双荧光素酶报告基因检测发现，miR-29c-3pmimic能够抑制细胞内野生型IGF-1 的荧光素酶活性(P0.01)。进一步，通过WB检测了miR-29c-3p对活化HSCs中IGF-1表达的影响。结果显示，过表达miR-29c-3p可抑制IGF-1的表达（P0.01，图3B），低表达miR-29c-3p能促进活化HSCs中IGF-1表达(P0.01，图3B)。以上结果表明，在HSCs中，IGF-1是miR-29c-3p的下游靶标。2.4miR-29c-3p通过IGF1对HSCs活化，增殖和凋亡的影响进一步探讨了miR-29c-3p是否是通过IGF1张梁，等miR-29c-3p/ICF1分子轴对肝星状细胞活化，增殖和凋亡的作用机制11对HSCs活化，增殖和调亡产生影响的。结果表明，活化的HSCs中转染miR-29c-3pinhibitor或sh-IGF-1能够降低 miR-29c-3p或IGF-1的表达水平（P0.05，图4A、图4B)。回复实验表明，相较于 sh-NC组，sh-IGF-1组中活化相关蛋白-SMA，D D R2，FN1和ITGB1表达水平降低，并且GFAP的表达增加（P0.05，图4C)；相较于 sh-IGF-1组，sh-IGF-1+miR-29c-3pinhibitor组中活化相关蛋白-SMA，D D R2，FN1和ITGB1表达水平增加，并且GFAP的表达减少（P0.05，图4C)。此外，敲低IGF-1的表达能够降低活化HSCs的增殖活力(P0.01，图4D)和克隆形成数（P 0.0 1，图4E），并且增加其亡水平（P0.001，图4F)，但是在此基础上同时敲低miR-29c-3p的表达则会逆转这一过程。以上结果表明，IGF-1能够促进HSCs的活化和增殖，并抑制其凋亡，这一功能被miR-29c-3p靶向抑制。3讨论非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liverdisease，NA FLD)及其晚期形式-非酒精性脂肪性p inhibitorc-3p inhibitor-3pmimic3PABmimic-3Pc-3pinhibitorC inhibitor-29c-1-3pmimic-29c-Cinhibitor-29c-29inhibitor,-29c-29c-3IGF-1-WT3auuggcuaaaguUUACCACGAu5IGF-1miR-29c-3p 5guuuuuuaguacAAUGGUGCUa 3GAPDHIGF-1-MUT 3 auuggcuaaguAAUGGUGCUu 5NCmimic1.5miR-29c-3pmimic1.00.50100kDa37 kDa12Repetition2.0*1.51.00.50IGF-1-WTIGF-1-MUT3NCmimicNC inhibitormiR-29c-3pmimicmiR-29c-3p inhibitor图3IGF=1是miR-29c-3p下游靶标mRNAFig.3IGF-1 is a downstream target mRNA of miR-29c-3p.A：St a r b a s e 数据库预测得到的miR-29c-3p与ICF-1的潜在3UTR结合序列（上），并且突变IGF-1的3UTR结合序列后，双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c-3p与IGF-1的靶向关系（下）；B：活化的HSCs中分别转染miR-29c-3pinhibitor和miR-29c-3pmimic，采用WB检测IGF-1的表达变化。*P0.01。12昆明医科大学学报第44卷BIGF-11.5GAPDH1.00.50NCNC inhibitormiR-29c-3p inhibitorD10080+NC+Sh-NC60+Sh-IGF1+Sh-IGF1+1+miR-29c-3f0244872Time(h)C100kDaj37kDaa-SMADDR2FNITGB1GFAPGAPDHNC sh-NCsh-IGF1NCEbbapjinhibitor-ru+Repetitionsh-NC8060Sh-IGF-140Sh-IGF-1miR-29c-3p inhibitorNCSh-IGF1sh-NC-ssh-IGF1+miR-29c-3p inhibitor37kDa3120 kDa285kDa135kDa49kDa3bbaa200aaa2bbbbbbbbaaa-SMA DDR2 FN1 ITGB1 GFAPF2015bbaaaaaaabbbON-SmiR-29c-3p inhibitor图4miR-29c-3p通过IGF-1抑制HSCs的活化和增殖，并促进其凋亡Fig.4 miR-29c-3p inhibits the activation and proliferation of HSCs and promotes their apoptosis through IGF-1.A：m i R-2 9c-3p i n h i b i o r 的转染效率；B：通过WB检测得到的sh-ICF-1的转染效率；C：不同组别HSCs中活化相关蛋白（-SMA，D D R2，FN1，I T G B1和GFAP)表达的表达变化；D：C C K-8 实验检测活化的HSCs增殖活力；E：克隆形成实验得到的不同组别中活化HSCs的克隆形成数；F：流式细胞术检测活化HSCs的调亡比例。与sh-NC组比较，aP0.05，a P 0.0 1，a a P 0.0 0 1；与sh-IGF-1组比较，bP0.05，b p 0.0 1，b b p 0.0 0 1；*P 0.0 5，*P 0.0 0 1。肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NA SH)已成为一种代谢性流行病 2 。此前的生物信息学分析表明，miR-29c-3p在ALD患者血液中的表达水平显著低于正常人群 12 ，但是其功能还没有在ALD中得到验证。在本研究中，笔者成功分离了小鼠中的HSCs，并且发现激活的HSCs中miR-29c-3p异常低表达。此外，笔者还发现，过表达miR-29c-3p能够抑制HSCs的激活和增殖，并促进其调亡。值得注意地，miR-29c-3p的这一功能是通过靶向调控IGF-1的表达实现的。这些结果证实了Yao等 12 的预测，并为miR-29c-3p作为ALD的治疗靶标提供了理论基础。HSCs活化是ALD进程中肝纤维化的关键事件，也是肝脏细胞外基质的主要来源之一，它们已被确定为主要负责肝脏纤维化发展的前体细胞类型 13。肝损伤后，HSC经历活化，导致典型的星形，脂肪储存表型的丧失和肌成纤维母细胞样表型的获得 13-14。因此，为了缓解ALD的发展进程，如何抑制HSCs的活化成为了主要目标之一。研究表明，-SMA，D D R2，FN1，IT G B1和GFAP已成为研究做多的HSCs活化标志物 15-16 。在笔者的研究中发现miR-29c-3pmimic可以抑制-SMA，D D R2，FN1和 ITGB1，并促进 HSCs中GFAP的表达。这表明，过表达miR-29c-3p可以抑制HSCs的活化，这对缓解ALD的肝纤维化至关重要。此外，介导HSCs增殖和凋亡对明晰ALD的机制也是十分重要的。例如，Liang等 17 表明，嘌呤信号通路调节HSCs激活和增殖，这在ALD中起着关键作用。研究表明，miRNA-150-5p抑制HSCs增殖，并在肝纤维化期间使HSCs调亡敏感，这有利于缓解ALD的肝纤维化进程 18 。本研究表明：miR-29c-3p的过表达对HSCs 的增殖是有抑制作用的，并且促进HSCs 的凋亡。此外，Chen等 19 表明，miR-29c-3p通过激活ADH6增强子促进酒精脱氢酶（alcoholdehydrogenase，A D H s)基因簇表达，而ADHs在酒精代谢和酒精毒性中起着至关重要的作用，这或许是miR-29c-3p调控HSCs参与ALD 的机制之一。众所周知，miRNAs通过介导下游靶标mRNA的表达是参与调控多种生物学进程的主要途径之一 2 0-2 1。在本研究中，通过 Starbase 数据库预测发现IGF-1是miR-29c-3p的下游靶标之第9期一，并通过双荧光素酶报告基因实验进行了验证。IGF-1是一种7 0-氨基酸合成代谢激素，具有多种内分泌，旁分泌和自分泌作用 2 2 。胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor-1,IGF-1）和IGF结合蛋白（IGF-binding proteins,IGFBPs）在包括肝脏在内的多种组织中产生，主要是对生长激素(growth hormone,GH)信号的反应。肝脏合成的IGF-1和IGFBPs占全身循环ICF-1和IGFBPs的大部分 2 3。众所周知，IGF-1主要由肝脏产生（占循环IGF-1的7 5%），但几乎每个组织都能够分泌IGF-1用于自分泌/旁分泌的目的-2 3。此前的研究表明，IGF-1 是非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liverdisease，NA FLD)/非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NA SH)治疗的生物学靶标，IGF-I可以调控细胞衰老和激活，从而介导 NASH中的肝纤维化 2 4-2 6 。IGF-I治疗已被证明可以改善NASH和肝硬化的动物模型 2 7-2 8 ，表明IGF-I在这些条件下的潜在临床应用。在ALD中，有研究表明，S-烯丙基巯半胱氨酸通过直接调节IGF-I信号通路来改善ALD29。Molle等 30 表明，IGF-I是ALD患者的生存独立预测因子。本研究中，HSCs中转染sh-IGF-1能够降低细胞活化和增殖，并上调其凋亡比例。但是，这一过程受miR-29c-3p的调控。综上所述，笔者证明了miR-29c-3p能够通过靶向下调IGF-1的表达水平，进而抑制HSCs活化和增殖，并促进其调亡。本研究为AH提供了新的治疗策略。但是，本研究仅仅只在HSCs验证了miR-29c-3p的功能，体内实验验证miR-29c-3p在ALD中的功能仍需进一步的挖掘。1 Seitz H K,Bataller R,Cortez-Pinto H,et al.Alcoholic liv-er diseaseJ.Nat 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