FⅧ抑制物与狼疮抗凝物对凝血因子检测结果的影响.pdf

572D0I:10.13602/ki.jcls.2023.08.03FVI抑制物与狼疮抗凝物对凝血因子检测结果的影响临床检验杂志2 0 2 3年8 月第41卷第8 期月Chin J Clin Lab Sci,Aug.2023,Vol.41,No.8临床检验技术研究颜楠，刁艳君，韩峰,刘家云（空军军医大学附属西京医院检验科，西安7 10 0 32)摘要：目的分析与探讨内源性凝血因子活性假性减低的原因。方法回顾性分析我院2 0 2 2 年2 月至2 0 2 3年2 月门诊与住院病例并分为2 组,FVI抑制物阳性致内源性凝血因子活性假性减低组6 例;狼疮抗凝物(LAC)阳性致内源性凝血因子活性假性减低组15例,检测相关凝血指标,分别将2 组稀释3个梯度（1:2、1:4、1:8)后检测内源性凝血因子,对比分析稀释前后数据。结果FVI抑制物组:6 例患者活化部分凝血活酶时间(APTT)延长显著且纠正试验均不纠正;内源性凝血因子活性均减低，其中FVI活性减低最显著,经3个梯度稀释后FVI活性变化均较小,FIX、FXI、FXI 活性均恢复为接近正常水平;LAC组：稀释前后FVI、FI X、FXI、FXI 活性结果差异均有统计学意义(P0.05)且均能恢复至接近正常水平。结论FVII抑制物阳性与LAC阳性均可对内源性凝血因子活性检测结果造成干扰并导致其出现假阳性,但FVI抑制物阳性组稀释3个梯度后FVI检测结果变化较小,未恢复为接近正常水平，而LAC 阳性组FVII、FIX、FXI、FXI 活性均恢复为正常水平。关键词：FVI抑制物；狼疮抗凝物；内源性凝血因子活性假性减低中图分类号：R446关于获得性凝血因子V(FV)抑制物的来源，一种是非血友病患者产生的抗 FVI自身抗体,另一种是血友病患者接受外源性凝血因子产品输注后产生的抗FVII同种抗体。抑制物形成受多种因素影响,遗传和治疗因素协同作用促成抑制物产生,表现为出血不止或出血难止，出血的严重程度主要取决于凝血因子水平 2 。狼疮抗凝物（Lupusanticoagulants,LAC)是一种抗磷脂抗体,在体外试验中,LAC可通过拮抗带负电荷的磷脂或磷脂-蛋白质复合物，干扰凝血试剂使凝血时间假性延长，在体内LAC则是强烈的促凝物质，诱导组织因子表达、干扰纤溶酶原激活物释放、激活血小板、影响补体活化、抑制蛋白C,使人体呈现病理性高凝状态,是引发静、动脉血栓形成的重要风险因素 3-4。FVI抑制物与LAC都会引起活化部分凝血活酶时间（APTT)延长,甚至干扰依赖 APTT试剂检测的内源性凝血因子的定量检测,因此在凝血因子定量检测时含量均同时减低的患者，需要排除是否存在病理性抑制物的干扰引起的假性减低 5。通过对内源性凝血因子的多梯度稀释检测可以辨别FVI抑制物与 LAC。1材料和方法1.1研究对象回顾性分析我院2 0 2 2 年2 月至2023年2 月门诊与住院病例。收集FVI抑制物阳作者简介：颜楠，198 3年生，女，主管技师,大学本科，主要从事血栓与止血检验工作。通信作者：刘家云，主任医师,E-mail:。文献标志码：A性致内源性凝血因子活性假性减低组6 例,均为男性,年龄9 6 4（40.0 2 2.6）岁;LAC阳性致内源性凝血因子活性假性减低组 15 例,男 1 例,女14 例,年龄11 6 0(34.515.5)岁。1.2仪器与试剂CS5100全自动凝血分析仪（日本Sysmex公司）。APTT、凝血酶原时间（PT）、LA C试剂以及FVI、FI X、FXI、FXI 活性试剂购自德国SIEMENS公司。1.3方法清晨空腹抽取静脉血2.7 mL,枸橡酸钠抗凝,150 0 g离心10 min后分离血浆。FVII抑制物组:检测PT、A PT T 以及内源性凝血因子FVII、FI X、FXI、FXI 活性及其稀释3个梯度后的活性,进行APTT纠正试验，检测FVII抑制物、LAC(LA1/LA2)。LAC组：分别检测LAC（LA 1/LA 2）,检测内源性凝血因子FVI、FI X、FXI、FXI 活性及其稀释 3 个梯度后的活性。1.4统计学分析采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析。计量资料符合正态分布用x土s表示，组间比较采用t检验，以P0.05表示差异有统计学意义;用GraphPad Prism8软件绘图。2结果FVI抑制物组6 例患者APTT延长显著（见表1)且APTT纠正试验均不纠正（见表2）;内源性凝临床检验杂志2 0 2 3年8 月第41卷第8 期血因子FVII、FI X、FXI、FXI 活性均减低,其中FVII活性减低最显著（见表1）；经3个梯度（1：2、1:4、1:8)稀释,FVI活性稀释后变化均较小,FIX、FXI、FXI活性稀释后均恢复为接近正常水平（见图1)。FVI抑制物结果均为阳性,LAC(LA1/LA2)检测结果均为阴性（见表2）。患者例1例2例3例4例5例6A8040-00D10080-（%）用星士图亚6040-20-00Chin J Clin Lab Sci,Aug.2023,Vol.41,No.8表 1FVI抑制物组 6 例患者 PT、A PT T 与内源性凝血因子结果PT(s)APTT(s)11.187.612.093.610.778.410.958.811.849.411.999.1B801-FVIIFIX+FXT+-FXI24稀释倍数24稀释倍数图1FV抑制物组6 例患者内源性凝血因子活性在不同稀释度下的变化曲线表2 FVI抑制物组6 例患者APTT纠正试验、FVI抑制物与LAC结果患者APTT(s)(患者)例187.6例293.6例378.4例458.8例549.4例699.8表3LAC 组患者各内源性凝血因子稀释前后结果比较（xs）处理方式FVII活性(%)原倍29.9712.281:2稀释48.75 26.49*1:4稀释68.0436.50*1:8稀释84.75 31.49*注：FVI稀释前后结果比较，*,P0.05;FIX稀释前后结果比较，,P0.05;FXI稀释前后结果比较，a,P0.05;FXI稀释前后结果比较，b,P0.05。573将 LAC 组15 例 LAC 阳性患者内源性凝血因子 FVII、FX、FXI、FXI活性稀释前后检测结果进行对比分析,差异均有统计学意义（P0.05）,且均能恢复至接近正常水平（见表3）。通过对比FVI抑制物组和 LAC组稀释后的FVII活性（见图2）,可有效鉴别FVII抑制物与LAC。FVII活性(%)FIX活性(%)FXI活性(%)FXI活性(%)1.714.20.915.41.820.25.938.47.248.50.912.7-FV-FIX+FXI40-+FXI0-：7E1007-FVIIFIX(%）利士国豫+FXI60+FXI4020-0760注：AF分别为患者1 6。APTT(s)(NPP)混合(s)(即刻)26.397.4(不纠正)25.492.6(不纠正)25.680.2(不纠正)24.952.1(不纠正）26.648.3(不纠正)25.993.4(不纠正)FIX活性(%)FXI活性(%)FXI活性(%)LA1/LA226.920.9022.8812.1939.13 15.89439.08 13.24a57.587.99.455.8812.09a76.2 10.19478.289.04a12.911.122.428.639.110.9C80740-20-028018.514.619.418.023.213.1-80764稀释倍数稀释倍数-FVII+FIX+FXI+FXI0-2FO-FVII80+FIX-FXI+FXI80167FVII抑制物(BU/L)10.420.38.74.32.918.622.4312.4243.78 12.39b61.83 11.23b86.73 9.65b-804稀释倍数40-20-02.490.3416-FVI-FIX+FXI+FXI24稀释倍数LA1/LA21.131.171.161.181.201.19：165741001-LAC阳性组+FVI抑制物阳性组80-(%)星60-40-20-0图2 LAC组与FVI抑制物组FVII活性不同梯度稀释检测对比3讨论抑制物的产生可分为遗传因素和非遗传因素，遗传因素是主要因素,后者为次要因素 。FVII抑制物筛选采用APTT纠正试验，由于FVII抑制物有时间温度依赖性,因此若APTT即刻被纠正,则需要进一步进行37 温育2 h后的纠正试验 7 。FVI抑制物滴度检测采用改良的Bestheda 法 8 。用不同稀释度的患者血浆与正常血浆等量混合温育2 h,测定残余 FVI活性。能使正常血浆 FV活性减少50%时,FVII抑制物的含量为1个Bethesda单位，以BU/L表示 9。LAC 是一种能与带负电荷的磷脂或磷脂蛋白复合物结合的免疫球蛋白,属于抗磷脂抗体可干扰依赖磷脂的体外凝血反应 10 ,其机制为血浆中的 LAC能中和APTT试剂中的磷脂,导致凝血时间延长 。APTT检测参与的凝血因子主要有 FVII、FI X、FXI、FXI,当其时间延长时提示内源性凝血功能障碍 12 。行标中对标本的稀释要求规定,因子V和X活性检测至少应进行2 个稀释度的检测 13本研究 FVI抑制物组中6 例患者APTT延长显著且 APTT纠正试验均不纠正,提示可能有病理抑制物存在。本研究中，内源性凝血因子活性均减低,其中 FV活性减低最显著,稀释不同梯度后检测,除FV外其他因子均恢复至接近正常水平；提示可能存在 FVI抑制物。LAC组中对 15 例患者的内源性凝血因子活性进行不同梯度稀释检测,差异均有统计学意义（P0.05）,且均能恢复至接近正常水平。FVI抑制物与LAC 均为病理性抗凝物质,实验室诊断病理性抗凝物质的确证试验较为复杂或尚无参考物质和参考方法,分析前、分析中诸多因素均可影响检测结果的准确性和重复性,其临床应用效果不是非常理想 14。通过对凝血因子多梯度稀释的方法不仅可以排除病理性抗凝物质的干扰,甚临床检验杂志2 0 2 3年8 月第41卷第8 期ChinJClinLab SciAug.2023,Vol.41,No.8至可辨别抑制物与LAC。为临床早期诊断和治疗提供依据,同时也是对不能开展 FV抑制物与 LAC检测的实验室的有效补充。4参考文献1中华医学会血液学分会血栓与止血学组，中国血友病协作组。F24稀释倍数凝血因子VI/IX抑制物诊断与治疗中国指南（2 0 18 年版）J.16中华血液学杂志，2 0 18，39（10）：7 93-7 99.【2 易维佳，郭玉霞，曾星，等.5例儿童A型血友病合并凝血因子VI抑制物生成临床回顾性分析 J：儿科药学杂志，2 0 2 2，2 8(10):37-41,3 马睿，任静，张珠博，等.狼疮抗凝物阳性患者临床数据横断面研究 J.临床检验杂志，2 0 2 0，38（7）：50 3-50 7.4 Moulis G,Audemard-Verger A,Arnaud L,et al.Risk of thrombosisin patients with primary immune thrombocytopenia and 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