HPLC法同时测定炮制前后鸡内金中6种黄酮类成分.pdf

法同时测定炮制前后鸡内金中 种黄酮类成分刘清豪，张 丹，陈 卓，韦婉婷，王城城，金 言，修彦凤（上海中医药大学中药学院，上海；陕西省人民医院药学部，陕西 西安）收稿日期：基金项目：陕西省自然科学基础研究项目（）；上海中医药大学第十四批大学生创新活动计划项目（）作者简介：刘清豪（），男，研究方向为中药学。：通信作者：修彦凤（），女，副教授，博士，从事中药炮制与制剂研究。：（），：摘要：目的 建立 法同时测定炮制前后鸡内金中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的含量。方法 该药物的分析采用 色谱柱（，）；流动相乙腈 甲酸，梯度洗脱；体积流量 ；柱温 ；检测波长 。结果 种成分在各自范围内线性关系良好（），平均加样回收率 ，。鸡内金生品和炮制品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的平均含量分别为 、和 、。结论 该方法稳定可靠，可用于鸡内金生品和炮制品的质量控制。关键词：鸡内金；炮制；黄酮类成分；中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：，（，；，）：，（，），（），：；在临床常用的鸡内金有生品和炮制品，炮制品主要为炒鸡内金，用于治疗积证（食积、石积、酒积、瘀血）、消渴证、疮疡、遗尿等。鸡内金含有蛋白质、多糖、氨基酸、微量元素等，目前，对于其成分含量测定方法的报道仅限于对氨基酸、多糖、核苷类的测定，未见对其他药效成分含量测定方法的研究报道，年版 中国药典 对鸡内金的质量控制仅通过检查水分、总灰分、浸出物，缺少药效成分的含量测定项，饮片的质量控制也仅有性状鉴别项，鸡内金饮片存 年 月第 卷 第 期中 成 药 在生熟异用现象，但其饮片无专属性质控指标，难以保证鸡内金的有效性。为了完善鸡内金的质量控制方法，本研究以大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素这 种黄酮类成分为指标，建立 含量测定方法，并对鸡内金生品和炮制品中 种成分的含量进行比较，以期为解析鸡内金的炮制机理奠定基础。材料 仪器 色谱仪（美国 公司）；电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；数显恒温水浴锅（江苏杰瑞尔电器有限公司）；超声清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。试剂与药物大豆苷（批号）、黄豆黄苷（批号）、染料木苷（批号）、黄豆黄素（批号）、大豆苷元（批号）、染料木素（批号）对照品，纯度均大于 ，购自上海源叶生物科技有限公司。乙腈为色谱纯，购自美国 公司；甲醇、甲酸为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；水为纯化水。批鸡内金生品和炮制品分别购自全国各地药店，经上海中医药大学修彦凤副教授鉴定为雉科动物家鸡 的干燥沙囊内壁，生品、炮制品分别编号 、，详见表。表 样品信息 鸡内金编号产地购买地批号生品浙江上海云南云南未知未知四川未知黑龙江黑龙江未知河北新疆福建海南浙江浙江亳州河南未知浙江上海上海上海未知炮制品黑龙江黑龙江山东广西未知山西未知浙江浙江未知山西未知河北河南未知安徽甘肃未知陕西新疆浙江上海上海上海未知 方法与结果 色谱条件 色谱柱（，）；流动相乙腈（）甲酸（），梯度洗脱（，；，；，；，；，）；体积流量 ；柱温 ；检测波长；进样量 。溶液制备 供试品溶液称取鸡内金生品或炮制品粗粉约 ，精密称定，精密加入 甲醇 ，加热回流提取，过滤，药渣再加入 甲醇，加热回流提取 ，过滤，合并滤液，挥干溶剂，残渣用 甲醇溶解，至 量瓶中，定容，即得。对照品溶液精密称取大豆苷 、黄豆黄苷 、染料木苷 、大豆苷元 、黄豆黄素 、染料木素 ，置于 量瓶中，加入甲醇溶解，摇匀，定容，即得。方法学考察 专属性考察取“”项下对照品溶液适量，依次稀释、倍，得到系列浓度对照品溶液，按“”项下方法制备鸡内金生品和炮制品供试品溶液，以 甲醇为空白溶剂，在“”项色谱条件下进样测定，结果见图。由此可知，各成分色谱峰与相邻峰之间分离度良好。线性关系考察取“”项下对照品溶液适量，稀释得到系列浓度对照品溶液，在“”项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标（）、峰面积为纵坐标（）进行回归，结果见表，可知各成分在各自范围内线性关系良好。表 各成分线性关系 成分回归方程线性范围（）大豆苷 黄豆黄苷 染料木苷 大豆苷元 黄豆黄素 染料木素 精密度试验取“”项下对照品溶液适量，在“”项色谱条件下进样测定 次，年 月第 卷 第 期中 成 药 大豆苷 黄豆黄苷 染料木苷 大豆苷元 黄豆黄素 染料木素 图 各成分 色谱图 或连续测定 ，每天 次，测得大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素日内精密度 为 、，日 间 精 密 度 为 、，表明仪器精密度良好。稳定性试验分别取鸡内金生品（）、炮制品（），按“”项下方法制备供试品溶液，于、在“”项色谱条件下进样测定，测得鸡内金生品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素峰面 积 分 别 为 、，鸡内金炮制品中 种成分峰面积 分别为 、，表明溶液在 内稳定性良好。重复性试验分别取鸡内金生品（）、炮制品（）各 份，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，测得鸡内金生品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素含量 分别为 、，鸡内金炮制品中 种成分含量 分别为 、，表 明该方法重复性良好。加样回收率试验分别称取各成分含量已知的鸡内金生品（）、炮制品（）各 份，每份约 ，精密称定，按照 的比例加入 种对照品适量，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，鸡内金生品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素平均加样回收率分别为 、，分 别 为 、；鸡内金炮制品中 种成分平均加样回收率分别为 、，分别为、。含量测定取鸡内金生品、炮制品各 批，粉碎成粗粉，称取约 ，精密称定，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，结果见表。由此可知，鸡内金炮制后，大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的含量与鸡内金生品中各成分的含量比分别为 、，炮制后鸡内金中苷类成分大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷含量降低，而相应的苷元大豆苷元、黄豆黄素、染料木素含量升高。讨论大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素等黄酮类成分是很多中药的有效成分，大豆苷有抗骨质疏松作用，大豆苷元有降血糖、抗菌活性，黄豆黄苷有 葡萄糖苷酶抑制活性、降血糖作用，黄豆黄素有抗氧化作用，染料木苷、染料木素有抗氧化、抗肿瘤、抗血脂、抗肝纤维化、抗雌激素作用等。研究表明，鸡内金可以调节肠胃功能，提升尖吻鲈幼鱼的消化和肠道抗氧化能力、改善血清生化水 年 月第 卷 第 期中 成 药 表 各成分含量测定结果（）（）编号大豆苷黄豆黄苷染料木苷大豆苷元黄豆黄素染料木素 生品平均值 炮制品平均值 平、促进生长性能，能够干预动脉粥样硬化斑块形成及调节血脂水平，具有抗炎、抗纤维化、抗肾 结 石作 用，此 外 还 具 有 解 酒 作用。黄酮类成分与鸡内金的药理作用关系密切，以黄酮类成分为指标，建立含量测定方法，对于控制中医临床用鸡内金饮片的质量具有重要的作用。课题组前期对鸡内金供试品溶液的制备方法进行了优化，确定加热回流的提取效率优于超声提取法，采用 甲醇作为提取溶剂，加入 （、）倍量溶剂提取 次，每次 的提取方法，可以最大程度地提取有效成分。本研究建立的 种黄酮类成分 含量测定方法，可以将鸡内金生品、炮制品中 种成分成功地分离并准确测定其含量。研究发现，与 批鸡内金生品比较，批炮制品中苷类成分含量降低，苷元含量升高；炮制品 是由生品 炮制得到，比较两者的 种成分含量发现，炮制后大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷含量降低，大豆苷元、黄豆黄素、染料木素含量升高。炮制前后苷类及苷元成分含量的变化，可能是因为炮制鸡内金可导致苷类成分分解。黄酮类成分的组成对其药理作用和生物利用度具有显著的影响，将黄酮苷类转化成苷元可以显著提高其吸收效率和生物利用度。由此推测，炮制过程可使鸡内金中的大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷转化为大豆苷元、黄豆黄素、染料木素，提高鸡内金的药理活性与生物利用度。本研究明确鸡内金生品和炮制品中黄酮类成分含量的差异，为鸡内金炮制前后的药效差异提供了实验依据。参考文献：王 楠，顾笑妍，吴怡，等 鸡内金的临床应用及药理作用研究概况 江苏中医药，（）：梁 琨，张 丹，史 辑，等 柱前衍生化 测定鸡内金中 种氨基酸的含量 中国中药杂志，（）：王 楠，干仲元，宋雨庆，等 鸡内金炮制前后多糖含量及组成比较 中成药，（）：樊 佳，刘晓谦，孟辰笑凝，等 基于 指纹图谱与核苷类成分含量测定的鸡内金质量评价研究 中国中药杂志，（）：国家药典委员会 中华人民共和国药典：年版一部 北京：中国医药科技出版社，：袁铭君，张 恬，叶杨玉，等 中药鸡内金质量评价研究概述 中国食品药品监管，（）：王丽娟，张迎春 大豆苷抑制 细胞增殖和迁移的实验研究 沈阳药科大学学报，（）：牛丽颖，王鑫国，任艳青，等 淡豆豉提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨微细结构的改善作用 中成药，（）：楚纪明，马树运，李海峰，等 葛根有效成分及其药理作用研究进展 食品与药品，（）：冯长根，宇微微，甘强，等 甘草中黄豆黄苷的分离鉴定及其 葡萄糖苷酶抑制活性 科技导报，（）：年 月第 卷 第 期中 成 药 柴 川，崔小兵，戴贞丽，等 淡豆豉炮制前后异黄酮成分的测定及炮制工艺的研究 中国实验方剂学杂志，（）：梅建凤，刘姜华，易喻，等 染料木素与其糖苷的抗肿瘤和抗氧化活性比较 中国药理学通报，（）：沈 明，黄小强，阮美江 鸡内金对功能性消化不良模型大鼠胃肠功能改善作用 福建中医药，（）：曾祥兵，董宏标，韦政坤，等 鸡内金多糖对尖吻鲈幼鱼生长、消化、肠道抗氧化能力和血清生化指标的影响南方水产科学，（）：谈太鹏，武英超，张 静 生鸡内金粉对颈动脉粥样硬化斑块形成的干预效果及血脂水平的影响 中国中医药科技，（）：李 叶，孟伟明，赵雪梅 鸡内金提取物通过调节肺泡巨噬细胞自噬水平减轻尘肺大鼠肺间质纤维化的机制临床和实验医学杂志，（）：，：陆齐天，丛晓凤，朱修乐，等 鸡内金解酒作用的初步实验研究 中国中医药科技，（）：，（）：木芙蓉叶质量标准的提升研究冯丽萍，黄李璐，叶 磊，刘语诗，胡 攀，熊 静，严 鑫，夏厚林（成都中医药大学药学院，四川 成都；成都市中草药研究所，四川 成都）收稿日期：基金项目：年四川省中医药健康旅游示范项目（川中医药办发 号）作者简介：冯丽萍（），女，硕士，从事中药质量控制与评价研究。：，：通信作者：夏厚林（），男，博士，教授，从事中药质量控制与评价研究。：，：摘要：目的 提升木芙蓉叶质量标准。方法 在原标准的基础上，优化供试品制备方法，增加银锻苷 鉴别，采用 法同时测定芦丁、异槲皮苷、山柰酚芸香糖苷、银锻苷的含量。该药材 甲醇提取液的分析采用 色谱柱（，）；流动相乙腈 甲酸，梯度洗脱；体积流量 ；柱温；检测波长 。结果 银锻苷 特征斑点清晰，分离度好。芦丁、异槲皮苷、山柰酚芸香糖苷、银锻苷在各自范围内线性关系良好（），平均加样回收率为 ，为 。结论 该方法准确可行，可用于木芙蓉叶的质量控制。建议木芙蓉叶含芦丁、异槲皮苷、山柰酚芸香糖苷、银锻苷总含量不得少于 ，即 。关键词：木芙蓉叶；芦丁；异槲皮苷；山柰酚芸香糖苷；银锻苷；中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：，（，；，）：，年 月第 卷 第 期中 成 药