HPLC法同时测定清热暗疮片中10种成分.pdf

李美芳，刘 敏，肖丽和，等 氨金黄敏颗粒中人工牛黄的胆红素含量测定 中国药品标准，（）：张梦轩，张轶华，张 越，等 法测定 种感冒药制剂人工牛黄或体外培育牛黄中的胆红素 中成药，（）：阮家钊，赵 芳，李高天，等 一测多评法同时测定芍药汤中 种成分 中成药，（）：林 林，刘广桢，于凤蕊，等 高效液相色谱法同时测定乙肝解毒胶囊中 种成分的含量 中国药学杂志，（）：赵 迪，周悌强，张 蕾，等 法同时测定栀子金花丸中 种成分 中成药，（）：王福成，李冬华，郭文宾，等 法同时测定栀子金花丸中 个成分的含量 药物分析杂志，（）：李军鸽，王永春，孟珈同，等 黄连解毒汤中盐酸小檗碱、黄芩苷、黄柏碱、栀子苷的含量测定 人参研究，（）：张文文，王 姚，曾嵘，等 黄连解毒丸质量标准的再评价 中成药，（）：姚 瑶，赵淑淑，姚俊霞，等 郁金配方颗粒 指纹图谱及指标成分含量测定研究 中国药业，（）：刘 梅，郭小红，孙 全，等 温郁金的化学成分和药理作用研究进展 现代药物与临床，（）：肖 娅，李 晶，常金花，等 法同时测定栀子金花分散片中 种成分的含量 中国药房，（）：法同时测定清热暗疮片中 种成分方慧祥，孔艳娥（云南省食品药品审核查验中心，云南 昆明；曲靖医学高等专科学校，云南 曲靖）收稿日期：作者简介：方慧祥（），男，副主任药师，从事食品、药品质量标准研究。：，：摘要：目的 建立 法同时测定清热暗疮片中绿原酸、栀子苷、异绿原酸、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用 色谱柱（，）；流动相乙腈 磷酸，梯度洗脱；体积流量 ；柱温；检测波长 。结果 种成分在各自范围内线性关系良好（），平均加样回收率 ，。结论 该方法简便灵敏，重复性好，可用于清热暗疮片的质量控制。关键词：清热暗疮片；化学成分；中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：，（，；，）：，（，），（），年 月第 卷 第 期中 成 药 ，：；清热暗疮片是由金银花、大黄浸膏、穿心莲浸膏、人工牛黄、蒲公英浸膏、珍珠层粉、山豆根浸膏、甘草、栀子浸膏组成的中药制剂，具有清热解毒、凉血散瘀、泻火通腑之功效，用于治疗痤疮、疖痛等。方中金银花具有清热解毒、宣散风热之功效，为君药；大黄具有泻下攻积、清热凉血、泻火解毒、祛瘀通经之功效，穿心莲具有清热解毒、凉血、消肿之功效，栀子具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效。但该制剂现行质量标准无含量测定指标，文献 也仅测定大黄酚、大黄素的含量，尚无多成分同时测定含量的报道，不利于控制其质量。因此，本实验参考文献 报道，建立 法同时测定清热暗疮片中绿原酸、栀子苷、异绿原酸、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，以期为该制剂质量控制提供依据。材料 仪器 型高效液相色谱仪、型紫外可见分光光度计（日本 公司）；型电子天平（瑞士 公司）；超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器有限公司）。试剂与药物绿原酸（批号，纯度 ）、栀子苷（批号，纯度 ）、穿心莲内酯（批号，纯度 ）、脱水穿心莲内酯（批号，纯 度 ）、芦 荟 大 黄 素（批 号，纯 度 ）、大 黄 酸（批 号，纯 度 ）、大 黄 素（批 号，纯 度 ）、大 黄 酚（批 号，纯度 ）、大黄素甲醚（批号，纯度 ）对照品均购自中国食品药品检定研究院；异绿原酸 对照品（批号，纯度 ）购自上海鸿永生物科技有限公司外。清热暗疮片（广州王老吉药业股份有限公司，批号，片）。乙腈为色谱纯（德国 公司）；其余试剂均为分析纯；水为超纯水（自制）。方法与结果 色谱条件 色谱柱（，）；流动相 磷酸（）乙 腈（），梯 度 洗 脱（，；，；，；，）；体积流量 ；柱温 ；检测波长 ；进样量 。溶液制备 对照品溶液精密称取绿原酸、栀子苷、异绿原酸、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，甲醇制成质量浓度分别为 、的贮备液，精密吸取 ，置于 量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。供试品溶液 取本品 片，除去包衣，研细，取约 ，精密称定，置于具塞磨口锥形瓶中，精密加入 甲醇，称定质量，水浴回流提取 ，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，静置，上清液过滤，即得。阴性样品溶液按处方比例，分别制得缺金银花、缺大黄浸膏、缺穿心莲浸膏、缺栀子浸膏的阴性样品，按“”项下方法制备，即得。方法学考察 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液、，置于 量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，在“”项色谱条件下各进样 测定。以对照品质量浓度为横坐标（），峰面积为纵坐标（）进行回归，结果见表，可知各成分在各自范围内线性关系良好。专属性试验吸取“”项下对照品、供试品、阴性样品溶液适量，在“”项色谱条件下进样测定，结果见图。由此可知，阴性无干扰，表明该方法专属性良好。精密度试验取对照品溶液 ，在“”项色谱条件下进样测定 次，测得绿原酸、栀子苷、异绿原酸、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄 年 月第 卷 第 期中 成 药 表 各成分线性关系 成分回归方程线性范围（）绿原酸 栀子苷 异绿原酸 穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 素甲醚峰面积 分别为 、，表明仪器精密度良好。重 复 性 试 验 取 同 一 批 本 品（批 号）份，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，测得绿原酸、栀子苷、异绿原酸、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量 分别为 、，表明该方法重复性良好。绿原酸 栀子苷 异绿原酸 穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚 图 各成分 色谱图 稳定性试验取同一份供试品溶液，室温下于、在“”项色谱条件下各进样 测定，测得绿原酸、栀子苷、异绿原酸、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积 分别为 、，表明溶液在 内稳定性良好。加样回收率试验取各成分含量已知的本品（批号）份，每份约 ，精密称定，精密加入对照品贮备液 、甲醇 ，在“”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，绿原酸、栀子苷、异绿原酸、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚平均加样回收率（）分 别 为 （）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）。样品含量测定取 批样品，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表。讨论 指标成分选择前期报道，金银花主要有效成分为有机酸类的绿原酸、异绿原酸，栀子主要有效成分为环烯醚萜类的栀子苷，穿心莲主要有效成分为二萜内酯类的穿心莲内酯、脱水穿心莲内 年 月第 卷 第 期中 成 药 表 各成分含量测定结果（）（）批号含量（片）绿原酸栀子苷异绿原酸 穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯 芦荟大黄素大黄酸大黄素大黄酚大黄素甲醚 酯，大黄主要有效成分为蒽醌类的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚。因此，本实验选择上述成分进行含量测定。检测波长选择本实验称取各对照品适量，甲醇溶解并稀释至适宜质量浓度，在 波长范围内进行扫描，发现绿原酸在、，栀子苷在 ，异绿原酸 在、，穿心莲内酯在 ，脱水穿心莲内酯在 ，芦荟大黄素在、，大黄酸在、，大黄素在、，大黄酚在、，大黄素甲醚在、处有最大吸收。为了操作简便，使各成分能在同一波长下检测，根据紫外扫描图谱结合含量测定灵敏度要求，选择检测波长为 。提取方法选择参考文献 报道，本实验考察了超声、回流提取，发现 个大黄蒽醌类化合物在回流提取时回收率更高，而其他 个无明显差异。再考察了不同体积分数甲 醇（、），发现甲醇提取时效率最高，杂质干扰峰最少。然后，考察了不同提取时间（、），发现提取 后各成分含量不再升高。最终确定，提取方法为甲醇回流提取 。流动相选择参考文献 报道，本实验考察了乙腈 磷酸、甲醇 磷酸、甲醇水，发现甲醇水洗脱时绿原酸不出峰，大黄酸色谱峰拖尾严重；与甲醇 磷酸比较，乙腈 磷酸洗脱时洗脱能力更强，基线更平稳，各成分色谱峰峰形、分离度更理想。最终确定，流动相为乙腈 磷酸。参考文献：，国家食品药品监督管理总局国家药品标准 杨 敏，张素中，吴德玄 清热暗疮片中大黄素、大黄酚的含量测定 中药材，（）：郑清瑗，黄劲梅 法测定清热暗疮片中大黄素和大黄酚的含量 中药 新药 与临床 药理，（）：王建明，李若梅，张晓燕 清热暗疮片中大黄素与大黄酚的含量测定 中国药师，（）：何枭宇，王启砚，刘 毅，等 法同时测定清开灵颗粒中 种活性成分的含量 湖北中医药大学学报，（）：邱小玉，刘玉萍，刘 烨，等 法同时测定茵栀黄口服溶液中 种有效成分 中草药，（）：王福成，李冬华，郭文宾，等 法同时测定栀子金花丸中 个成分的含量 药物分析杂志，（）：谢更奇 法同时测定复方氨酚穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量 海峡药学，（）：郭海姣，覃洁萍，刘雯，等 一测多评法同时测定穿黄片、穿黄胶囊中 种成分 中成药，（）：唐德智，严秀荣 法测定清热暗疮丸中绿原酸、栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量 中药新药与临床药理，（）：李业永 高效液相色谱二极管阵列检测器同时测定清热祛浊胶囊中 种活性成分的含量 中国医院药学杂志，（）：郝乘仪，冯 波 法同时测定龙泽熊胆胶囊中 种成分的含量 中国药房，（）：苑思坤，王庚南 波长切换法同时测定茵栀祛黄胶囊中 种 成 分 的 含 量 中 国 药 师，（）：吴志芳，聂黎行 波长切换法同时测定牛黄清胃丸中 个 成 分 的 含 量 中 国 药 房，（）：唐维宏 法同时测定玉叶清火胶囊中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯 药物分析杂志，（）：郝乘仪，昌 盛 高效液相色谱法同时测定牛黄清宫丸中 种成分的含量 中国医院药学杂志，（）：田 刚，杨学芳，李 超，等 同时检测小儿豉翘清热颗粒中 种成分的含量 中国中药杂志，（）：郭 琪，王海波，李向阳，等 法同时测定利胆排石片中 个成分的含量 药物分析杂志，（）：年 月第 卷 第 期中 成 药