miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响.pdf
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1、基金项目:蚌埠医学院自然科学重点项目();安徽省高等学校科学研究项目()作者简介:陶露,女,生,硕士,研究实习员,:收稿日期:表达对鼻咽癌细胞 增殖和凋亡的影响陶露,汤迎凯,韦卓利,项平(蚌埠医学院第一附属医院中心实验室,蚌埠 ;蚌埠医学院人体解剖学教研室;蚌埠医学院组织移植安徽省重点实验室;通讯作者,:)摘要:目的探讨 表达对鼻咽癌细胞 增殖和凋亡的影响。方法荧光定量 检测 在人永生化鼻咽上皮细胞 和鼻咽癌细胞中的表达。荧光定量 检测上调和下调 表达转染效率。实验分为 组(未处理)、组()、组()、组()和 组()。实验、细胞集落形成实验和活细胞 死细胞双染色实验检测细胞增殖的情况;流式细胞
2、术检测细胞凋亡情况;细胞核染色检测细胞核的形态变化;线粒体膜电位检测细胞早期凋亡情况。结果与人永生化鼻咽上皮细胞 相比,鼻咽癌细胞中 的表达较高()。与 组和 组相比,组 表达上调();与 组和 组相比,组 表达下调()。与 组相比,组细胞增殖能力较强(),细胞凋亡能力较弱(),线粒体膜电位较高();相较于 组,组细胞增殖能力被抑制(),细胞凋亡能力较强(),核固缩核碎裂较多,线粒体膜电位较低()。结论下调 能抑制鼻咽癌细胞 的增殖,促进细胞的凋亡。关键词:;鼻咽癌;细胞增殖;细胞凋亡;中图分类号:文献标志码:文章编号:():,(,;,;,;,:):(),(),()()(),(),(),(),
3、(),(),(),(),(),():;,鼻咽癌(,)是由鼻咽上皮癌变引起的一种头颈部上皮性恶性肿瘤,在中国南方、北非和东南亚地区发病率较高 。近年来,随着放疗技术的进步,鼻咽癌早期治疗效果良好 ,然而,的新诊断患者的临床结果很差,他们通常表现为晚期疾病。因此,开发有效的治疗策略从而使这种致命疾病得以根除是至关重要的。()是一类非编码 ,可通过与 的 非翻译区()碱基配对,增强 降解或抑制其翻译,大约三分之一的人类基因可以被 调控 。最近的研究表明,在许多人类疾病中异常表达,调控多种生物学作用,包括增殖、凋亡、迁移和分化,在肿瘤的发展过程中,既可以作为癌基因,也可以作为肿瘤抑制因子 。研究发现
4、在结直肠癌 、乳腺癌 和口腔鳞状细胞癌 等肿瘤中发挥作用。在鼻咽癌中发挥何种作用?目前尚未发现相关研究。本研究通过分析 在鼻咽癌细胞中的表达水平及其对鼻咽癌细胞 增殖和凋亡的影响,为鼻咽癌的诊断和治疗提供新的依据。材料和方法 细胞株和主要试剂鼻咽癌细胞 和 为蚌埠医学院第一附属医院中心实验室冻存细胞,人永生化鼻咽上皮细胞 购自赛库生物技术有限公司。购自美国 公司;胎牛血清购自南美 公司;购自美国 公司;、和 以 及 引 物(序列:,:)购自吉玛基因股份有限公司;(货号 )购自易锦生物技术有限公司;提取分离试剂盒购自天根生化科技有限公司;定量检测体系购自美国 公司;检测试剂盒购自迈珂生物科技有限
5、公司;活细胞 死细胞双染试剂盒和 染色液购自索莱宝科技有限公司;细胞凋亡检测试剂盒和线粒体膜电位检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。细胞培养与转染 、和 细胞株均在 ,条件下培养,完全培养液是由 胎牛血清和 青 链霉素混合 配制。收集对数生长期 细胞,计数并均匀铺板于 孔板,待细胞生长至密度约 时进行细胞转染,分别转染 和 ,和 ,然后验证转染效率。在后续实验中分为 组(未处理)、组()、组()、组()和 组()。荧光定量 检测 表达水平收集对数生长期细胞,根据 提取分离试剂盒说明书提取总 ,根据 定量检测体系使用说明书依次进行反转录和 反应,设置参数:预变性 ;,个循环。以 为内参,采用相
6、对定量 方法计算。细胞集落形成的测定收集对数生长期转染后 细胞并计数均匀铺板,培养期间间断观察细胞生长情况,后终止培养。组织细胞固定液固定 ,洗 次,结晶紫染色 ,拍照并统计集落形成数目。检测细胞增殖能力收集对数生长期转染后 细胞并计数,孔铺板于 孔板,分别在培养箱中培养 ,后终止培养,更换培养液,每孔加 溶液,在培养箱中孵育 使用酶标仪测定在 处的吸光值。活细胞 死细胞双染色检测细胞活力收集对数生长期转染后 细胞,计数后铺板于 孔板,分别在细胞培养箱中培养 后终止培养,洗 次,根据 活细胞 死细胞双染试剂盒说明书,每孔依次加入 和 孵育 ,洗次,荧光显微镜使用()激发滤片观察拍照。流式细胞仪
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