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BTF3在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与PINCH的相关性.pdf
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1、:4162 胡洁,等BTF3 在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与 PINCH 的相关性BTF3 在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与 PINCH 的相关性胡洁,高峰,王云静,修小斐,王大维1河北医科大学第三医院口腔颌面外科;病理科,河北石家庄0 50 0 0 0【摘要】目的:探讨基础转录因子3(basic transcription factor3,BTF3)在口腔鳞状细胞癌(oral squamouscellcarcinoma,OSCC)组织中的表达及其与PINCH的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测 BTF3在7 3对 OSCC组织及相邻癌旁正常组织(45例伴淋巴结转移)中的表达,并通过肿
2、瘤基因组图谱(the Cancer Ge-nome Atlas,TCGA)数据库分析 BTF3、PINCH 在 OSCC 组织及相邻癌旁正常组织中的表达以验证免疫组织化学检测结果。分析 BTF3表达与患者年龄、性别、肿瘤分化程度及淋巴结转移等临床病理参数的关系及其与PINCH在OSCC中表达的相关性。结果:免疫组织化学检测结果显示,BTF3在OSCC 组织中的表达明显高于相邻癌旁正常组织(6 0.2 7%Vs39.73%,P=0.013);T CG A 数据库分析显示,OSCC组织中BTF3、PINCH 的阳性表达率均显著高于二者在相邻癌旁正常组织中的阳性表达率。在 OSCC 中,BTF3 在
3、淋巴结转移组中的阳性表达率明显高于其在无淋巴结转移组中的阳性表达率(7 1.11%vs42.86%,P=0.016);BTF3在低分化组OSCC中的阳性表达率明显高于其在高分化组OSCC中的阳性表达率(7 1.43%vs45.16%,P=0.023);BT F3的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小和部位无相关性(P0.05);BT F3和PINCH在OSCC中的表达呈正相关(r=0.286,P=0.015)。结论:BTF3与OSCC的发生、发展及淋巴结转移有关,有望成为判断OSCC发生、发展及预测淋巴结转移的潜在分子标志物,其机制可能与PINCH正协同作用有关。【关键词】BTF3;PINCH;口腔
4、鳞状细胞癌;免疫组织化学;TCGA数据库【中图分类号】R739.8【文章编号】16 7 2-4992-(2 0 2 3)2 2-416 2-0 5Expression of BTF3 in oral squamous cell carcinoma tissues and its correlation withPINCHHU Jie,GAO Feng”,WANG Yunjing,XIU Xiaofei?,WANG DaweilDepartment of Oral and Maxillofacial Surgery;Department of Pathology,the Third Hospit
5、al of Hebei Medical University,Hebei Shiji-azhuang 050000,China.Abstract)Objective:To investigate the expression of basic transcription factor 3(BTF3)and its correlation withPINCH in oral squamous cell carcinoma(OSCC)tissues.Methods:The expression of BTF3 in 73 pairs of OSCC car-cinomas and adjacent
6、 normal tissues(45 cases with lymph node metastasis)was detected by immunohistochemistry.The expression of BTF3 and PINCH in OSCC cancer and adjacent normal tissues was analyzed by the Cancer GenomeAtlas(TCGA)database to verify the results of immunohistochemistry.To analyze the relationship between
7、BTF3 ex-pression and clinicopathological parameters such as age,gender,tumor differentiation and lymph node metastasis ofpatients and its correlation with PINCH expression in OSCC.Results:The results of immunohistochemistry showedthat the expression of BTF3 in OSCC cancer tissues was significantly h
8、igher than that in adjacent normal tissues(60.27%vs 39.73%,P=0.013).TCGA database analysis showed that the positive expression rates of BTF3 andPINCH in OSCC cancer tissues were significantly higher than that of both in adjacent normal tissues.In OSCC,thepositive expression rate of BTF3 in the lymph
9、 node metastasis group was significantly higher than that in the no lymphnode metastasis group(71.11%vs 42.86%,P=0.016).The positive expression rate of BTF3 in the hypodfferenti-ated OSCC group was significantly higher than that in the highly differentiated OSCC group(71.43%vs 45.16%,P=0.023).BTF3 e
10、xpression did not correlate with patient gender,age,tumour size and site(P 0.05).BTF3 and【收稿日期】2023 03 15【修回日期】2023 07 24【基金项目】河北省财政厅资助临床医学优秀人才培养项目(编号:冀卫办科教【2 0 2 1 1号)【作者简介】胡洁(19 9 6 一),女,陕西渭南人,医师,在读硕士,主要从事口腔颌面部恶性肿瘤相关研究。E-mail:18 39 2 6 7 9 2 38 16 3.c o m【通信作者】王大维(197 3一),男,河北高阳人,主任医师,硕士生导师,博士,主要从
11、事口腔颌面部恶性肿瘤相关研究。Ema i l:d a v i 6 7 8 【文献标识码】AD0I:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.22.012现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 2 期PINCH expression in OSCC were positively correlated(r=0.286,P=0.015).Conclusion:BTF3 is correlated withthe tumorigenesis,development and lymph node metastasis of OSCC,and may be a potentia
12、l molecular marker for de-termining the occurrence and development of OSCC and predicting lymph node metastasis,and its mechanism may berelated to the positive synergistic effect of PINCH.Key words BTF3,PINCH,oral squamous cell carcinoma,immunohistochemistry,TCGA database基础转录因子3(basic transcription
13、factor3,BTF3)是RNA聚合酶II的转录因子,可通过与RNA聚合酶II结合成稳定的复合物后,作为近端启动子元件(如TATAbox和CAAT box序列)的转录起始因子而发挥转录作用1-4。研究提示,BTF3 在结直肠癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中的表达比其在相邻正常组织中的表达显著增加,可能通过促进肿瘤细胞增殖、调控细胞周期及细胞调亡等机制,在恶性肿瘤的发生发展过程中发挥重要调节作用5-8 ,但BTF3在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及其与患者临床病理特征之间的关系尚未见报导。PINCH是一种参与整合素和生长因子信号转导的黏
14、着斑蛋白,在人体多种组织中均有广泛表达,参与细胞的增殖、迁移、黏附等过程,在乳腺癌、结直肠癌等恶性肿瘤的间质中表达上调,与肿瘤转移相关9-。我们课题组前期研究结果表明,PINCH在OSCC肿瘤浸润边缘的间质中的表达量比其在肿瘤内部间质中的表达量明显增加,这提示,PINCH可能参与了OSCC 的侵袭和转移过程12 。本研究旨在采用TCGA数据库和免疫组织化学法检测BTF3和PINCH在OSCC中的表达,分析BTF3与OSCC患者临床病理特征的相关性,寻找新的OSCC的分子生物学标志物,并通过分析BTF3与PINCH在 OSCC 中表达的相关性,探讨BTF3在OSCC发生发展过程中的作用机制。1资
15、料与方法1.1患者资料与标本本实验共选择OSCC组织及相邻癌旁正常组织7 3对,标本均来自我院病理科2 0 16 2 0 2 1年的存档蜡块。患者均于我院口腔颌面外科住院进行手术治疗。其中男性37 例,女性36 例;舌癌31例,颊癌18 例,牙龈癌2 4例;年龄30 7 8岁;伴发淋巴结转移者45例,无淋巴结转移者2 8 例;高分化者31例,低分化者42 例(根据WHO对OSCC分化程度的分类,将本实验OSCC组织分类为高分化、中分化、低分化和未分化,为统计方便,将高分化、中分化归为高分化组,将低分化和未分化归为低分化组)。所有标本均经2 位副高以上职称的病理科医生复查确诊。纳入标准:患者术前
16、未接受任何放疗或化疗;所有切除的组织均经医院病理科诊断病理类型为 OSCC;患者不合并全身其他部位恶性肿瘤。样本收集均获得患者知情同意并签署书面知情同意书。1.2试剂与实验方法石蜡包埋组织作5m连续切片,常规HE染色和免疫组织化学ABC染色。抗BTF3蛋白多克隆抗体(1:2 0 0,SantaCruz Biotechnology,Inc,Santa Cruz,CA,USA),兔抗人 PINCH蛋白多克隆抗体由REARDENA博士惠赠(美国加利福尼亚大学病理科),二抗、三抗购自福建迈新生物试剂有限公司。MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.22内源性过氧化物酶,依
17、次滴加一抗(抗BTF3抗体浓度1:200;抗PINCH蛋白抗体浓度1:5)、二抗、三抗,DAB显色,苏木精复染,常规脱水、透明、封片。用磷酸盐缓冲盐水(PBS溶液)代替一抗作空白对照。1.3肿瘤基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析肿瘤基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库(https:/portal.gdc.cancer.gov/)由美国国家癌症研究所和国家人类基因组研究所共同创办,该数据库收集整理了各类癌症有关的数据,是一个大型的癌症研究参考数据库。为了进一步验证本研究免疫组织化学检测结果的可靠性,本研究还从T
18、CGA数据库检索并下载提取OSCC相关的mRNA转录本数据信息,于该数据库下载32 对OSCC组织及相邻癌旁正常组织共6 4个文件,探讨BTF3、PINCH 基因在OSCC癌组织中的表达。1.4结果判读在不了解临床病理或生物学数据的情况下,切片染色结果由两名病理科医生独立进行显微镜检查和评估。BTF3免疫组织化学染色阳性以细胞胞质中出现棕黄色颗粒为主,PINCH染色阳性以细胞胞浆中出现棕黄色颗粒为主,根据阳性细胞所占比例分为阴性(无染色,或阳性染色的细胞百分比5%)、弱阳性(5%染色阳性的细胞的百分比2 5%)、阳性(2 5%50%的细胞染色阳性)。为方便统计学计算,将阴性和弱阳性归为阴性,将
19、阳性和强阳性归为阳性。如有争议,则对争议切片由两位研究者分别再次评估,对结果仍不能统一者,由两位研究者使用双头显微镜重新检查,直到达到一致评分。1.5统计学分析数据采用SPSS 22.0(SPSS软件,Inc.,A r mo n k,NY)进行分析,并使用Prism8.0版本进行绘图。采用检验和t检验分析BTF3、PI NC H 在OSCC组织中的表达情况,并分析BTF3与 OSCC 患者临床病理参数的相关性,双侧P值 0.0 5认为差异有统计学意义。BTF3和PINCH在OSCC组织中表达的相关性分析采用Spearman相关性分析。2结果2.1免疫组织化学法检测BTF3及PINCH在 OSC
20、C组织及相邻癌旁正常组织中的表达免疫组织化学法检测结果提示,BTF3主要表达在肿瘤细胞的胞质中(见图1A、B),PI NC H 主要表达在肿瘤间质细胞的胞浆中(见图1C、D),BT F3在OSCC组织中的阳性表达率明显高于其在相邻癌旁正常组织中的阳性表达率,二者差异有统计学意义(6 0.2 7%vs39.73%,P=0.013,见表1)。:4163:Modern Oncology 2023,31(22):4162-4166免疫组织化学过程:切片脱蜡水化,3%H,02甲醇灭活.4164:胡洁,等BTF3 在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与 PINCH 的相关性A图 1BTF3 及 PINCH 在
21、癌及相邻癌旁正常组织中的表达(IHC 400)A:BTF3 在相邻癌旁正常组织中的表达;B:BTF3 在癌组织中的表达;C:PINCH在相邻癌旁正常组织中的表达;D:PINCH在癌组织中的表达。Fig.1 The expression of BTF3 and PINCH in tumor tissues and adjacent normal tissues(IHC 400)A:Expression of BTF3 in adjacent normal tissues.B:Expression of BTF3 in tumor tissues.C:Expression of PINCH in
22、adjacent normal tissues.D:Ex-pression of PINCH in tumor tissues:表1BTF3在OSCC 组织和相邻癌旁正常组织中的表达n(%)Tab.1The expression of BTF3 in OSCC tissues and adjacent normal tis-suesn(%)TissusOsCC tissuesNormal para-cancerous tissues注:*P0.05,表示差异具有统计学意义。Note:*P0.05,indicating a statistically significant difference
23、.2.2TCGA数据库中 BTF3、PINCH 在OSCC组织及相邻癌旁正常组织中的表达我们进一步使用 TCGA数据库验证了 BTF3、PINCH 在OSCC 癌组织(n=32)及相邻癌旁正常组织(n=32)中的表达水平,结果表明,与相邻癌旁正常组织相比,BTF3、PI NCH在OSCC 癌组织中的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P均 0.0 1,见图2)。10BTF3*86420图 2 BTF3、PINCH 在 OSCC 组织及相邻癌旁正常组织中的表达*P0.01,*P 0.0 0 1,表示差异具有统计学意义。Fig.2Expression of BTF3,PINCH in OSCC
24、tissues and adjacent normaltissues*P0.01,*P0.05,见表2)。BTab.2 The relationship between BTF3 expression and clinicopathologicalvariablesn(%)BTF3 positivenexpression7344(60.27)7329(39.73)5PINCH*20OSCCNormalD表 2 BTF3表达与 OSCC 患者临床病理特征的关系n(%)BTF3 positivePGroup0.013*GenderMaleFemaleAge(years)5050SitesGingi
25、valTongueBuccalSizes(cm)2.52.5Lymph node metastasisPositiveNegativeDegree of differentiationWell-differentiationPoor-differentiation注:*P0.05,表示差异具有统计学意义。Note:*P0.05,indicating a statistically significant difference.2.4BTF3与PINCH在OSCC中的相关性分析在7 3例 OSCC 组织中,BTF3表达阳性的44例中,有2 8OSCCNormaln3736403324311830
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