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细菌鉴定的总体思路.ppt
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1、临床常见细菌鉴定的思路临床常见细菌鉴定的思路检验科检验科张诗海张诗海细菌鉴定的指南细菌鉴定的指南一、培养特性一、培养特性1、温度、温度2、气体、气体3、营养要求、营养要求4、PH5、湿度湿度细菌鉴定的指南细菌鉴定的指南二、生长特性二、生长特性1、生长速度、生长速度2、菌落特征、菌落特征3、液体培养基的生长特性、液体培养基的生长特性三、细菌的形态与染色三、细菌的形态与染色四、生理及生化特性四、生理及生化特性五、血清学诊断五、血清学诊断六、致病性试验:动物接种六、致病性试验:动物接种细菌的分类及鉴定步骤细菌的分类及鉴定步骤细菌的分类单位细菌的分类单位由高到低由高到低分分7个层次,个层次,界界门门纲
2、纲目目科科属属种种有的种还分血清型(如沙门菌及志贺菌有的种还分血清型(如沙门菌及志贺菌等)和生物型(如流感、副流感嗜血杆等)和生物型(如流感、副流感嗜血杆菌菌1-8生物型等)还有噬菌体分型(如伤生物型等)还有噬菌体分型(如伤寒沙门菌、铜绿等)。寒沙门菌、铜绿等)。细菌鉴定步骤细菌鉴定步骤1、首先必须分离有单个菌落的纯培养、首先必须分离有单个菌落的纯培养2、革兰氏染色,先确定是、革兰氏染色,先确定是G-b,G+b,G+c,G-c3、如为如为G-b,G-c先做氧化酶试验,如为先做氧化酶试验,如为G+c或或G+b先做触酶,根据结果,选择最先做触酶,根据结果,选择最少几项关键性鉴定试验。少几项关键性鉴
3、定试验。G+c(动力、触酶、动力、触酶、动力、触酶、动力、触酶、O/F)O/F)-w/-F-+O/-+F+/-F微微球球菌菌气气球球菌菌链链球球菌菌葡葡萄萄球球菌菌革兰阳性球菌革兰阳性球菌之葡萄球菌之葡萄球菌一、一、革兰阳性球菌,排列成葡萄状,触酶(革兰阳性球菌,排列成葡萄状,触酶(+):首先做血浆凝固酶试验、甘露醇、尿素及对:首先做血浆凝固酶试验、甘露醇、尿素及对新生霉素的敏感性,如果确定不了,再加做麦新生霉素的敏感性,如果确定不了,再加做麦芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸盐,同时结合芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸盐,同时结合菌落颜色和溶血情况。菌落颜色和溶血情况。几种常见葡萄球菌的鉴定几种常见葡
4、萄球菌的鉴定凝固酶凝固酶甘露醇甘露醇尿素尿素新生新生金葡金葡+-S中间中间+-S表皮表皮-dS腐生腐生-+R溶血溶血-d-S革兰阳性球菌革兰阳性球菌之链球菌之链球菌二、革兰阳性球菌,排列成链状,触二、革兰阳性球菌,排列成链状,触酶(酶(-):根据溶血情况,根据溶血情况,先做先做七叶苷七叶苷6.5%NaCl肉汤。肉汤。v溶血:溶血:1、-沉淀生长,加做杆菌肽沉淀生长,加做杆菌肽S为化脓性链球菌为化脓性链球菌2、-微混,加做微混,加做CAMP+为为B群链球菌(无乳链球菌)群链球菌(无乳链球菌)3、-沉淀生长,加做杆菌肽沉淀生长,加做杆菌肽R,为为溶血性链球溶血性链球菌(非菌(非A、B)4、+沉淀生
5、长,加做杆菌肽沉淀生长,加做杆菌肽R,为咽峡链球菌(草链中的一种)为咽峡链球菌(草链中的一种)革兰阳性球菌之革兰阳性球菌之链球菌链球菌v溶血:溶血:1、-或或+-沉淀生长,为草链沉淀生长,为草链2、-混浊生长,加做胆汁溶菌试验混浊生长,加做胆汁溶菌试验+,菊糖,菊糖+,OptochinS,为肺炎链球菌为肺炎链球菌v不溶血或不溶血或溶血:溶血:1、+-混浊生长,为混浊生长,为D群链球菌群链球菌2、+混浊生长,为肠球菌混浊生长,为肠球菌革兰阳性球菌革兰阳性球菌如如D群链球菌和肠球菌要进一步鉴定:群链球菌和肠球菌要进一步鉴定:D群链球菌群链球菌乳糖乳糖+-牛链牛链马肠链马肠链肠球菌肠球菌山梨醇山梨醇
6、+-棉子糖棉子糖甘露醇甘露醇+-+-粪肠球粪肠球禽肠球禽肠球屎肠球屎肠球坚忍肠球坚忍肠球革兰阳性球菌之革兰阳性球菌之绿色气球菌绿色气球菌l绿色气球菌是一种条件致病菌,它可引创面感染、败血症等。绿色气球菌是一种条件致病菌,它可引创面感染、败血症等。l绿色气球菌在血平板上生长灰色、光滑、有绿色气球菌在血平板上生长灰色、光滑、有溶血的菌落。革兰染色为溶血的菌落。革兰染色为G+C,排列呈四联状。排列呈四联状。l绿色气球菌生化反应绿色气球菌生化反应试验试验+%试验试验+%试验试验+%触酶触酶*0麦芽糖麦芽糖100阿拉伯糖阿拉伯糖48硝还硝还*0蔗糖蔗糖100棉子糖棉子糖19七叶苷七叶苷*100乳糖乳糖9
7、0木糖木糖106.5%NaCl*100果糖果糖100山梨醇山梨醇0葡萄糖葡萄糖*100蕈糖蕈糖90甘露醇甘露醇*86水杨苷水杨苷76*为确诊试验为确诊试验革兰阳性球菌之革兰阳性球菌之溶血孪生球菌溶血孪生球菌l本菌染色多变,可以染成阴性,呈单个或成双、短链本菌染色多变,可以染成阴性,呈单个或成双、短链排列。血板上排列。血板上35度培养度培养24h形成较大的菌落,呈水滴状,形成较大的菌落,呈水滴状,易融合生长,易融合生长,48h后菌落周围出现宽大的透明溶血环,后菌落周围出现宽大的透明溶血环,有自溶现象,类似肺炎链球菌的菌落。肉汤培养中呈有自溶现象,类似肺炎链球菌的菌落。肉汤培养中呈混浊生长,混浊生
8、长,6.5%高盐肉汤中能生长。高盐肉汤中能生长。l生化反应:触酶生化反应:触酶-,氧化酶,氧化酶-,分解葡萄糖、果糖;不,分解葡萄糖、果糖;不分解乳、麦、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇;分解乳、麦、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇;七叶苷七叶苷-,靛基质,靛基质-。对青、氯霉素敏感,对丁胺卡那。对青、氯霉素敏感,对丁胺卡那耐药。耐药。革兰阳性球菌之革兰阳性球菌之马红球菌马红球菌马红球菌是马、猪和牛的致病菌,近来发现本菌也可马红球菌是马、猪和牛的致病菌,近来发现本菌也可引起艾滋病、血液病和肾移植病人的肺部感染。引起艾滋病、血液病和肾移植病人的肺部感染。本菌为革兰阳性无动力杆菌,本菌为革兰阳性无
9、动力杆菌,为多形态,有时呈杆状,为多形态,有时呈杆状,有时呈球状。在血平板上有时呈球状。在血平板上3524-48h,可长出淡桔红色可长出淡桔红色到粉红色的粘液样大菌落,不到粉红色的粘液样大菌落,不溶血。溶血。生化反应:触酶生化反应:触酶+,氧化酶,氧化酶-,硝还硝还+,靛基质,靛基质-,枸盐,枸盐-,明胶酶明胶酶-,脲酶不定,不分解糖,脲酶不定,不分解糖类,可形成类类,可形成类CAMP样样反应。反应。G-c(触酶、氧化酶、触酶、氧化酶、触酶、氧化酶、触酶、氧化酶、O/F)O/F)+o o脑膜炎奈瑟氏菌脑膜炎奈瑟氏菌淋病奈瑟氏菌淋病奈瑟氏菌其他奈瑟菌其他奈瑟菌布兰汉菌属布兰汉菌属金黄色奈瑟菌金黄
10、色奈瑟菌革兰阴性双球菌革兰阴性双球菌l氧化酶氧化酶+脑膜炎脑膜炎卡他布卡他布淋病淋病双球菌双球菌兰汉菌兰汉菌奈瑟菌奈瑟菌葡萄糖葡萄糖+-+麦芽糖麦芽糖+-硝还硝还-+-DNA酶酶+G-b(动力动力动力动力、氧化酶、触酶、氧化酶、触酶、氧化酶、触酶、氧化酶、触酶、O/F)O/F)-+-莫莫拉拉菌菌属属+-+fwfw-+-+0/f0/f-+f f+F F-+O/O/-F F+-+-嗜嗜血血杆杆菌菌黄黄色色杆杆菌菌莫莫拉拉菌菌属属假假单单胞胞菌菌巴巴斯斯德德菌菌弧弧菌菌属属不不动动杆杆菌菌产产碱碱杆杆菌菌军军团团菌菌属属弯弯曲曲杆杆菌菌属属邻邻单单胞胞气气单单胞胞+/-F F肠肠杆杆菌菌科科革兰阴性
11、杆菌之革兰阴性杆菌之嗜血杆菌嗜血杆菌q嗜血杆菌为嗜血杆菌为G-小杆菌,在巧克力平板上生长灰色、透小杆菌,在巧克力平板上生长灰色、透明的小菌落,似露滴状,有时呈球杆菌,有时呈丝状,明的小菌落,似露滴状,有时呈球杆菌,有时呈丝状,一般情况下在血平板上不生长。一般情况下在血平板上不生长。q氧化酶(弱氧化酶(弱+),在血平板和),在血平板和MH上同时做卫星试验,上同时做卫星试验,两种平板上均阳性,为副流杆两种平板上均阳性,为副流杆菌嗜血杆菌,血平板上菌嗜血杆菌,血平板上阳性、阳性、MH上阴性,为流感嗜血上阴性,为流感嗜血杆菌。杆菌。q注:杜克嗜血杆菌是软性下疳注:杜克嗜血杆菌是软性下疳的病原菌,的病原
12、菌,72h后才生长后才生长细小的菌落,阴道分泌物培养细小的菌落,阴道分泌物培养时要注意。时要注意。革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验涂片为革兰阴性杆菌,做氧化酶试验。涂片为革兰阴性杆菌,做氧化酶试验。1、氧化酶、氧化酶-做全套生化做全套生化克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、葡萄糖、甘露醇、葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸盐硝酸盐革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验致致病病性性大大肠肠埃埃希希菌菌克克氏氏双双糖糖、苯苯丙丙氨氨酸酸、葡葡萄萄糖糖酸酸盐盐、甘露醇、甘露醇、IMViC、山梨醇。
13、山梨醇。迁迁徙徙生生长长,可可能能为为变变形形杆杆菌菌克克氏双糖、尿素、苯丙氨氏双糖、尿素、苯丙氨酸酸、葡葡萄萄糖糖酸酸盐盐、甘甘露露醇醇、靛靛基基质、麦芽糖。质、麦芽糖。灰灰凸凸的的菌菌落落,染染色色为为典典型型的的阴阴性性球杆菌球杆菌克氏双糖、葡克氏双糖、葡萄萄糖糖、甘甘露露醇醇、靛靛基基质质、枸枸橼橼酸酸盐、硝酸盐、丙二酸盐盐、硝酸盐、丙二酸盐、42。灰黄色菌落灰黄色菌落可能为嗜麦芽窄可能为嗜麦芽窄食假单胞菌食假单胞菌同氧化酶同氧化酶+生化试验。生化试验。革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验2、氧化酶、氧化酶+全全套套生生化化克克氏氏双双糖糖、葡葡萄萄糖糖
14、、甘甘露露醇醇、靛靛基基质质、枸枸橼橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。可可疑疑气气单单胞胞菌菌克克氏氏双双糖糖、葡葡萄萄糖糖、甘甘露露醇醇、靛靛基基质质、枸枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP(25)。可疑弧菌可疑弧菌同气单胞菌生化试验,另加不同浓度的同气单胞菌生化试验,另加不同浓度的NaCl。肠杆菌科肠杆菌科 l肠杆菌科为一大群革兰阴性杆菌,肠杆菌科为一大群革兰阴性杆菌,氧化酶阴性氧化酶阴性.l多数菌种为周毛菌,能运动,少数无鞭毛,不能运动。多数菌种为周毛菌,能运动,少数无鞭毛,不能运动。l绝大多数菌种在普通营养琼脂上
15、生长良好。绝大多数菌种在普通营养琼脂上生长良好。l发酵葡萄糖,还原硝酸盐。发酵葡萄糖,还原硝酸盐。l临床常见的临床常见的10多个菌属,多个菌属,30多个种。多个种。肠杆菌科与其他科细菌的区别肠杆菌科与其他科细菌的区别试验试验肠杆菌科肠杆菌科弧菌科弧菌科非发酵菌非发酵菌葡萄糖发酵葡萄糖发酵FFO/-氧化酶氧化酶-+*形态形态杆状杆状弧形或杆状态弧形或杆状态杆状杆状鞭毛鞭毛周毛或无周毛或无单毛单毛单毛、丛毛、单毛、丛毛、周毛或无周毛或无*不动杆菌和嗜麦芽窄食假单胞菌除外。不动杆菌和嗜麦芽窄食假单胞菌除外。肠杆菌科的初步分类肠杆菌科的初步分类 肠杆菌科初步分类肠杆菌科初步分类菌属菌属苯丙氨酸苯丙氨酸
16、葡萄糖酸盐葡萄糖酸盐埃希菌属埃希菌属志贺菌属志贺菌属沙门菌属沙门菌属枸橼酸杆菌属枸橼酸杆菌属爱德华菌属爱德华菌属耶尔森菌属耶尔森菌属克雷伯菌属克雷伯菌属+肠杆菌属肠杆菌属+沙雷菌属沙雷菌属+哈夫尼亚菌属哈夫尼亚菌属+变形杆菌属变形杆菌属+摩根菌属摩根菌属+普罗维登斯菌属普罗维登斯菌属+苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性各菌属的鉴别苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性各菌属的鉴别 枸橼酸枸橼酸爱德华爱德华结肠结肠试验试验埃希菌属埃希菌属志贺菌属志贺菌属沙门菌属沙门菌属杆菌属杆菌属菌属菌属耶尔森菌耶尔森菌动力动力+/-+-*硫化氢硫化氢-+/-+/-+-靛基质靛基质+-/+-/+-/+枸橼酸盐枸橼酸盐-+/-+-脲酶脲
17、酶-/+-+/-赖氨酸赖氨酸+/-+/-+/-*25-30培养动力培养动力+葡萄糖酸盐阳性各菌属的鉴别葡萄糖酸盐阳性各菌属的鉴别 试验试验克雷伯菌属克雷伯菌属肠杆菌属肠杆菌属沙雷菌属沙雷菌属哈夫尼亚菌属哈夫尼亚菌属动力动力-+山梨醇山梨醇+/-+-DNase-+-明胶酶明胶酶-+-苯丙氨酸阳性各菌属的鉴别苯丙氨酸阳性各菌属的鉴别 试验试验变形杆菌属变形杆菌属摩根菌属摩根菌属普罗维登斯菌属普罗维登斯菌属硫化氢硫化氢+-枸橼酸盐枸橼酸盐+/-+/-鸟氨酸鸟氨酸+/-+-大肠埃希菌与其他大肠埃希菌与其他3种埃希菌的鉴别种埃希菌的鉴别 黄色素黄色素吲哚吲哚乳糖乳糖山梨醇山梨醇戊五醇戊五醇大肠埃希菌大肠
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