肺炎支原体的耐药性ppt课件.pptx
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1、肺炎支原体的耐药性肺炎支原体的耐药性辛德莉首都医科大学附属北京友谊医院2018年4月12日1流行病学分析2肺炎支原体耐药现状3 大环内酯抗生素耐药机制目录CONTENT5肺炎支原体耐药与临床3 体内诱导耐药株流行病学分析1.肺炎支原体年度流行特点肺炎支原体年度流行特点流行病学年度肺炎支原体为呼吸道传播性疾病,有地区性流行的特点,肺炎支原体为呼吸道传播性疾病,有地区性流行的特点,每每4-5年流行一次,每次约持续年流行一次,每次约持续18个月,秋冬季多发,个月,秋冬季多发,但有研究显示,流行特点与该地区的气候等因素相关,但有研究显示,流行特点与该地区的气候等因素相关,不同地区间有所差异。不同地区间
2、有所差异。自自2005年的一次暴发流行后,约年的一次暴发流行后,约2011年开始,又出年开始,又出现了一次新的流行,多个国家监测到这次流行情况并进现了一次新的流行,多个国家监测到这次流行情况并进行了相关报道,主要为北欧、美国、东亚、中东部分地行了相关报道,主要为北欧、美国、东亚、中东部分地区区2.肺炎支原体感染人群特点肺炎支原体感染人群特点流行病学人群肺炎支原体感染多呈自限性的特点,其致病性与机体的肺炎支原体感染多呈自限性的特点,其致病性与机体的免疫特点相关,儿童和青少年免疫系统发育尚未成熟,免疫特点相关,儿童和青少年免疫系统发育尚未成熟,为其易感人群,且易引起临床症状,尤其是学龄前儿童,为其
3、易感人群,且易引起临床症状,尤其是学龄前儿童,为肺炎支原体感染的主要人群。为肺炎支原体感染的主要人群。3.肺炎支原体流行型别特点肺炎支原体流行型别特点流行病学流行型肺炎支原体表面蛋白肺炎支原体表面蛋白P1为其致病的主要部分,对基于为其致病的主要部分,对基于P1蛋白的分型是目前肺炎支原体分型的主要方式,根据蛋白的分型是目前肺炎支原体分型的主要方式,根据P1蛋白编码基因蛋白编码基因MPN141序列特点,采用比较脉冲场凝序列特点,采用比较脉冲场凝胶电泳是经典的分型方法,将肺炎支原体分为两型,胶电泳是经典的分型方法,将肺炎支原体分为两型,I型型和和II型,目前主要的流行型别为型,目前主要的流行型别为I
4、I型。型。小范围内的流行呈现同一型别流行的现象,提示同一区小范围内的流行呈现同一型别流行的现象,提示同一区域的肺炎支原体流行可能是来源于同一菌株。域的肺炎支原体流行可能是来源于同一菌株。各国的流行的具体型别各有不同,但未有研究表明型别各国的流行的具体型别各有不同,但未有研究表明型别与致病性相关。与致病性相关。目前研究提示,大环内酯类抗生素耐药与型别并无直接目前研究提示,大环内酯类抗生素耐药与型别并无直接相关性相关性MPPMPP的流行病学变化的流行病学变化趋势趋势1:社区获得性肺炎的重要病原菌社区获得性肺炎的重要病原菌,发病发病率有上升趋势;率有上升趋势;趋势趋势2;2;发病年龄低龄化发病年龄低
5、龄化(学龄前儿童、婴幼儿发病增多学龄前儿童、婴幼儿发病增多)趋势趋势3 3:难治性:难治性/重症病例增多重症病例增多趋势趋势4 4:出现耐药,中国耐药率高;:出现耐药,中国耐药率高;全球范围内全球范围内MPMP耐药情况耐药情况2010-2012加拿大加拿大12.1%2010-2014美国美国8.213.2%2010-201288.1%100%2008-2012澳大利亚澳大利亚3.3%2011-2012日本日本87.1%89.2%2010-2015英英国国0-9.3%2010-2011丹麦丹麦1.6%2007-2011法国法国3.48.3%2003-2012德国德国1.23.6%2010意大利意
6、大利26%2010以色列以色列22%30%文献文献报报道国内部分地区道国内部分地区MPMP耐耐药药数据数据日本日本MPMP耐药数据变化情况耐药数据变化情况200020062008200920102011201200.10.20.30.40.50.60.70.80.900.30.560.690.710.630.82可以看出,耐药可以看出,耐药MP在日本出现的时间报道比较早,呈上升趋势在日本出现的时间报道比较早,呈上升趋势首首例例近年来北京市支原体耐药监测情况近年来北京市支原体耐药监测情况自2012年开始,为贯彻落实抗菌药物临床应用指导原则,牵头组织了北京市支原体耐药监测的工作,北京市肺炎支原体对
7、大环内酯类的耐药率依然保持在较高水平,尚未发现对四环素类和喹诺酮类抗生素耐药的MP菌株。201420152016100.00%90.00%80.00%70.00%60.00%50.00%40.00%30.00%20.00%10.00%0.00%84.30%71.42%84.60%84.30%71.42%84.60%2014-2016年北京市肺炎支原体耐药监测情况红霉素阿奇霉素四环素左氧氟沙星大环内酯类耐药机制大环内酯类耐药机制u50S大亚基大亚基 23S rRNA 结结构域构域V区;区;u50S大亚基大亚基 23S rRNA结结构域构域区区;u核糖体蛋白核糖体蛋白L4、L22;肺炎支原体耐药主
8、要检测手段肺炎支原体耐药主要检测手段分离培养+药敏实验:实验的周期长,分离培养阳性率不高,不适用临床诊断。传统分离培养+药敏;快速培养+药敏(一体化)试剂盒分子药敏:PCR扩增大环内酯类抗生素耐药相关靶位基因,不同方式检测其耐药性,近年来发展较快。PCR+基因测序:针对23SrRNA基因扩增+测序,标准基因序列比对;单链构象多态性分析:巢式PCR产物+毛细管电泳-单链构象多态性检测,与标准株图形比较;高分辨率溶解曲线分析:23SrRNAV区域所有已知与耐药相关的突变位点区域进行扩增,根据高分辨率溶解曲线形态判断突变类型;分子开关:应用敏感性分子开关(高保真DNA聚合酶和3硫化修饰引物的分子开关
9、),通过琼脂糖凝胶上的条带或直接观察荧光信号检测MP对大环内酯类药物的耐药性(高或低);,AS-PCR:最新研究MP耐药检测方法-等位基因特异扩增实时定量PCR方法(AS-PCR),可以同时检测样本中存在的敏感菌和耐药菌,并进一步确定其比例,为临床治疗提供参考和依据。检测耐药基因位点,发现临床样本可以中同时存在2063A和2063G位点;也就是说在一份临床样本中同时存在敏感菌和耐药菌的混合感染。在检测的178份临床咽拭子标本中,ASPCR检测的总阳性率为92.1%(164/178)敏感菌14例,占8.5%;耐药菌36例,占 21%;耐药敏感混合114例,占69.5%。也就是说:敏感菌存在128
10、/164,占78%;耐药菌 150/164,占91.4%。这提示我们,在临床治疗MP感染的病人时,需要注意敏感菌和耐药菌的混合感染。耐药的检测:等位基因特异扩增实时定量耐药的检测:等位基因特异扩增实时定量PCRPCR方法建立方法建立国内文献报道的国内文献报道的MPMP耐药监测数据耐药监测数据2011年北年北京京84.4%2012-2014湖南邵阳湖南邵阳92%盒盒m2015年无锡年无锡88.2%pm2015年河年河北北90%2008年北年北京京91%2005-2008上海上海81.4%2005-2010温州温州58.5%2003-2006年北京年北京92%2007-2008年广东年广东40%2
11、009-2011上海上海87.5%2013年河年河南南33%2010-2011湖南湖南47.1%2010-2012北京北京71.7%2014年贵年贵州州27.63%2010年广年广东东54.5%大大环内内酯类抗生素耐抗生素耐药现状?状?各地区耐各地区耐药率差异的率差异的产生与哪些因素有关生与哪些因素有关?数据的可靠性如何?数据的可靠性如何?检测技技术和方法和方法对结果是否果是否产生了影响?生了影响?MPMP耐药监测数据的回顾及思考耐药监测数据的回顾及思考不同年代、不同国家、不同地区、不同人不同年代、不同国家、不同地区、不同人群、不同检测方法的耐药率是有差异的。群、不同检测方法的耐药率是有差异的
12、。(真与假),治疗方案要调整。(真与假),治疗方案要调整。MP耐药监测数据的回顾及思考耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量PCRPCRPCRPCR方法建立及数据方法建立及数据方法建立及数据方法建立及数据针对大环内酯类抗生素耐药严重的现状,传统耐药检测手段已不能满足临床需求。如何准确快速检测临床样本中是否存在耐药菌和敏感菌的混合感染?同时鉴定出敏感菌和耐药菌的比例?针对上述问题,研究建立了一种准确快速诊断MP感染和耐药基因型,并进一步鉴定样本中敏感菌和耐药菌比例的新方法:即
13、等位基因特异扩增实时定量PCR(Allele-specificreal-timePCR(ASPCR))的建立ASPCR检测出MP的阳性率92.1%(164/178)。其中:野生敏感型14份(8.5%),单纯A2063G突变型36份(21%),耐药和敏感的混合基因型114份(69.5%)。耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量PCRPCR方法建立及数据方法建立及数据检测耐药基因位点,发现临床样本可以中同时存在2063A和2063G位点;敏感菌14例,占8.5%;耐药菌36例,占 21%;耐药敏感混合114例,占69.5%。也就是说:敏感菌存在128/16
14、4,占78%;耐药菌存在150/164,占91.4%。这提示我们,在临床治疗MP感染的病人时,需要注意敏感菌和耐药菌的混合感染耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量耐药的最新研究:等位基因特异扩增实时定量PCRPCR方法建立及数据方法建立及数据体内诱导耐药株一 大环内酯抗生素耐药株的出现与流行与临床上抗生素的广泛使用密切相关,有研究显示,患者在接受抗生素治疗过程中发生了耐药突变。2013年,日本报道两例患者在阿奇霉素治疗过程中发生耐药突变,分别为23S rRNA 区耐药相关位点2063位AG和2064位AG,体外药敏实验显示,阿奇霉素MIC显著升高。体内诱导耐药株二 目前对该两种抗生素耐药的
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