长链非编码RNA RAD51-AS1通过ERK信号通路对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响.pdf
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1、长链非编码 通过 信号通路对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响 四川达州 达州市中西医结合医院胸心血管乳腺外科叶美廷,刘 英,唐永恒【摘 要】目的 探讨 反义 ()通过抑制细胞外信号调节激酶()信号调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的潜在机制。方法 采用实时荧光定量()检测 对乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织以及乳腺癌细胞(、)和正常乳腺上皮细胞()中 的表达情况。培养 细胞并分为 组(转染 )、组(转染 以过表达)和 激动剂组(同时转染 和 激动剂以过表达 并激活 信号)。通过 法、划痕实验和 实验分别评估细胞的增殖、迁移和侵袭能力。利用 和 检测细胞中、和基质金属蛋白酶()的表达情况。结果乳腺癌
2、组织的 表达量低于癌旁组织(,);同时乳腺癌细胞()、()、()和()的 表达量低于 细胞的 ()。组 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于 组()。组中 和 表达低于 组()。另外,激动剂组 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均高于 组()。激动剂组中 和 表达高于 组()。结论 通过下调 信号通路活性来抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭过程,发挥肿瘤抑制因子的功效。【关键词】乳腺癌;反义 ;增殖;迁移;侵袭;细胞外信号调节激酶信号通路中图分类号:文献标识码:文章编号:(),【】(),()()(,)()(),()(),()(,)(),(),()()(),(),()临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,【】;
3、根据最新全球癌症流行病统计,女性乳腺癌已超越肺癌成为癌症发病率最高类型,全球每年有 万新发病例,而在我国女性乳腺癌的粗发生率已达到 ,总体发生率仍逐年上升,严重威胁女性生存质量。约 的乳腺癌死亡是由转移引起的,针对乳腺癌转移的研究意义重大。长链非编码(,)由于其在基因调控中的广泛细胞功能作用日益受到关注,包括发育、分化、细胞命运和癌症的发病等。目前已有部分 被证实在乳腺癌转移中发挥关键作用。最近有学者通过生信分析来鉴别乳腺癌患者生存相关关键基因,发现在乳腺癌组织中 反义 (,)异常低表达预示患者生存表现不佳。也作,其异常表达被报道参与结直肠癌细胞的转移和糖酵解过程。细胞外信号调节激酶(,)信号
4、作为多种生化信号的整合中枢,影响增殖、分化、转录、发育等细胞过程,与乳腺癌在内的多种人类癌症进展有关。调控肿瘤细胞转移的机制复杂,且 能否通过 信号通路影响乳腺癌进展尚不明确。本研究主要探讨 在乳腺癌组织和细胞的表达以及过表达 影响 信号通路调控乳腺癌细胞迁移和侵袭的潜在分子机制,现将研究结果报道如下。材料与方法 组织、细胞与主要试剂 对癌组织和对应癌旁组织来源于本院 年 月至 年 月经手术治疗的原发性乳腺癌患者(均经病理学确诊、获医院伦理委员会批准且得到患者或家属知情同意);正常乳腺上皮细胞 和乳腺癌细胞、购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心,购自中国科学院分子细胞科学卓越创新中心,
5、过表达载体 和空质粒 购自上海吉码生物科技有限公司,激动剂 购自美国 公司,转染试剂 购自美国 公司,逆转录试剂盒 和实时荧光定量()试剂盒 购自大连宝生物有限公司,、细胞裂解液和 蛋白检测试剂盒购自北京索莱宝公司,兔源、和基质金属蛋白酶 (,)一抗以及 标记的羊抗兔二抗均购自武汉三鹰生物技术有限公司,引物购自通用生物系统(安徽)有限公司。细胞培养和处理 将细胞按照 孔的密度接种于 孔板,观察细胞长至 更换为无 血 清 的 培 养 基。分 别 转 染、和 激动剂()至 细胞。实验分为 组、组和 激动剂组。转染处理 后检测转染效率。总 提取和 加入 提取细胞总,通过逆转录试剂盒合成 并行 检测,
6、目标基因表达使用 作为内参,定量结果采用 表示。上游引物:,下游引物:;上游引物:,下游引物:;上游引物:,下游引物:。法检测增殖 取对数生长期细胞,按照 孔密度接种至 孔板,转染处理第、和 ,向每孔加入 ,孵育 后,酶标仪测定 波长下吸光度值。细胞划痕实验常规培养细胞至长满形成单层细胞状态,使用灭菌 枪头垂直细胞划痕,分别于孵育、后置于显微镜拍照记录。每组设置 个重复,计算细胞致伤区愈合率。实验待小室水化后向室外加入 含 血清的培养基;小室内接种约 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ,个细胞,孵育 后利用多聚甲醛固定,结晶紫染液染色,显微镜拍照记录并计算细胞穿膜数量。采用 细胞裂解液提取总
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