CLBIII四通道残留农药测定仪使用说明ppt课件.ppt
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1、CL-BIIICL-BIII四通道残留四通道残留四通道残留四通道残留农药农药测测定定定定仪仪使用使用使用使用说说明明明明上海博上海博上海博上海博纳纳新技新技新技新技术术研究所研究所研究所研究所20062006年年年年2 2月月月月1.农农残常残常残常残常识识1 1有机磷和氨基甲酸酯类杀虫、杀螨剂的特点。两类农药的作用机理均为抑制动物体内乙酰胆碱酯酶的活性,破坏神经传导,引起一系列的神经中毒症状,直至死亡。二者的主要区别在于:有机磷类杀虫、杀螨剂对乙酰胆碱酯酶的抑制是不可逆的,而氨基甲酸酯类杀虫、杀螨剂对乙酰胆碱酯酶的抑制是可逆的。2.农农残常残常残常残常识识2 2酶抑制率法和酶系酶源:国家标准
2、GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测推荐的酶抑制率法能方便、快速、准确、成本低廉检测出农产品中的农药残留,也同时肯定了乙酰胆碱酯酶酶系作为快速检测推荐试剂的活性量和具体要求。近年来,我们通过对动物源和植物源的多种丁酰胆碱酯酶、乙酰胆碱酯酶进行检测实验和比较研究,发现乙酰胆碱酯酶对农药的检测敏感度和综合指标优于丁酰胆碱酯酶;确定了有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酸有较专一性的抑制作用;分析出在抑制率70%以下,大多数农药浓度和乙酰胆碱酯酶抑制率呈较好的线性关系,并能实现对单种农药的定量分析;解决了酶的活性和稳定性控制等技术 3.农农残常残常残常残常
3、识识3 3 什么是间接比色法:由于只有当底物与产物之间,在光学性质或其它理化性质有显著差异时,才可能直接用分光光度计法测定,因此对酶活性浓度的监测大多是采用间接监测法。如对胆碱酯酶的测定:底物(硫代乙酰胆碱)及酶水解产物(硫代胆碱和乙酸)并不具有颜色,不能用分光光度计法测定。所以必须设法在原来反应体系中添加一些试剂,这些试剂必须不与酶作用也不影响酶活性,同时又能与酶反应物迅速作用,产生可以被直接测定的物质。这就产生了Ellman的胆碱酯酶测定法即间接连续监测法。目前国内大多厂家生产的快速农药测定仪都采用了 Ellman的胆碱酯酶测定法即间接比色法。该方法通过监测底物(硫代乙酰胆碱),酶水解产物
4、硫代胆碱与添加的二硫代硝基苯甲酸(DTNB)作用立刻生成黄色化合物的反应速度来测定酶活性变化。4.农农残常残常残常残常识识4 4 什么是固定时间法:早期这类方法常被命名为“终点法”、“二点法”、“固定时间法”和“取样法”。该方法先选择一段固定的时间(固定为3分钟),先让酶与底物在一定温度下进行一段固定的时间(固定为3分钟)的化学反应,并根据呈色测出底物和产物的变化用比色法对反应结果进行评定。由于“二点法”容易受到干扰,并产生误差,使检测稳定性较低。5.农农残常残常残常残常识识5 5 什么是连续监测法:50年代,Warburg首先用分光光度计测定酶的活性。该方法不需停止酶反应就可测定反应物的变化
5、,容易观察到反应的整个过程和干扰情况(通过绘制反应曲线)。因此逐步取代了固定时间法成为目前测酶活性的主要方法。该方法是利用连续对反应过程进行高灵敏度检测,并通过绘制整个酶反应曲线避开延滞期和非线性反应期,只在线性反应期测定最大反应初速度。由于仪器的高精密度,连续监测法能在很短时间,甚至在1分钟反应时间内就能准确测定出活性的抑制率。6.技技技技 术术 指指指指 标标CL-BIII四通道残留四通道残留农药测定定仪的技的技术指指标:测量波长:410nm通道数:4检测用样品器皿:10mm比色皿光电流漂移:1%(3min)暗电流漂移:1%(3min)抑制率显示范围:0-100%抑制率测量范围:10-10
6、0%农药检测:(用甲胺磷农药标样测试)抑制率示值误差:10%抑制率重复性误差:5%7.第一部分第一部分 试剂配制配制第二部分第二部分 联机使用机使用第三部分第三部分 单机使用机使用第四部分第四部分 相关技巧与常相关技巧与常识目目目目 录录8.第一部分第一部分第一部分第一部分试剂试剂配制配制配制配制 9.1 1、试剂试剂的配制的配制的配制的配制提提取取液液:把提取液甲乙粉末倒入大玻璃瓶中,并加510ml蒸馏水溶解。酶试剂:用移液枪取3.1ml提取液,加入酶试剂瓶中。显色色剂:用移液枪取20ml提取液,加入显色剂瓶,溶 解后倒入棕色瓶中。底底 物物:用移液枪取3.1ml蒸馏水,加入底物瓶中。10.
7、2 2、试剂试剂的保存及注意事的保存及注意事的保存及注意事的保存及注意事项项返回目录1、本、本试剂适用的国家适用的国家标准准为:GB/T5009.199-2003。2、未配制的、未配制的试剂,要保存在,要保存在0以下的冷以下的冷冻箱里。箱里。(保(保质期可达期可达1年)年)3、配制好的、配制好的酶和底物和底物试剂,要保存在,要保存在4的冷藏箱内。的冷藏箱内。(保(保质期期为一周)一周)4、配制好的提取液常温下可以、配制好的提取液常温下可以长期保存。期保存。5、配制好的、配制好的显色色剂需避光保存;常温或冷藏,可以需避光保存;常温或冷藏,可以 保存保存1年。年。11.第二部分第二部分第二部分第二
8、部分联联机使用机使用机使用机使用12.第一步第一步第一步第一步 仪仪器器器器连连接接接接13.1 1、连连接接电电源源将仪器的电源接头和数据信号线接好。如图:14.2 2、连连接接电脑电脑把RS232/RS485的转换器接入电脑主机背后的COM口(串口)上,然后把数据信号线与转换器连接上,这样就完成了仪器与电脑的硬件连接。15.第二步第二步第二步第二步 检测检测操作操作操作操作16.安装安装安装安装“农产农产品品品品质质量安全量安全量安全量安全检测软检测软件件件件”把“农产品质量安全检测软件”光盘放入电脑光驱中,等自动读取或在光盘目录下找到并双击“setup”后,按提示点击“下一步”安装。安装
9、完成以后,桌面上会出现“食品质量安全检测平台”的图标。安装完成桌面上出现的图标17.仪仪器器器器设设置置置置首先按仪器“设置”键,选择为“受控”。然后再打开检测软件,检测软件的用户名默认为“管理员”,密码是“111111”。这样检测软件对检测仪器进行控制了。检测软件登陆18.操作步操作步操作步操作步骤骤整个的实验操作过程可以分为三个大部分:调0、调100空白对照样品分析19.调调0/1000/100注:以上是一个注:以上是一个检测窗口窗口的步的步骤,其他三个窗口都,其他三个窗口都是如此。是如此。等待10-15秒按“确定”放入黑块等待10-15秒按“确定”拿出黑块按“”键按“”键按“”键按“”键
10、20.空白空白空白空白对对照照照照 用小移液用小移液枪取取0.1ml酶试剂加入加入试管中管中用小移液用小移液枪取取0.1ml显色色剂加入加入试管中管中用小移液用小移液枪取取0.1ml底物加入底物加入试管中管中迅速迅速摇匀并倒入比色皿匀并倒入比色皿放入比色池放入比色池按按“开始开始对照分析照分析”键等待等待对照照结束束用大移液用大移液枪抽取抽取2.5ml提取液放入提取液放入试管中管中21.装入装入装入装入对对照照照照 按“装入对照分析”键选择所需对照选择需要装入对照的通道号(在通道号码前)按“读取”键完成装入工作注:注:对照照结束后,束后,对照曲照曲线会自会自动保存保存.(标准准对照照库中已有中
11、已有3030种蔬种蔬菜的菜的对照,在做照,在做这3030种蔬菜种蔬菜时,请参照参照这些些对照。)照。)22.装入装入装入装入标标准准准准对对照照照照库库 按“装入对照分析”键选择所需的空白对照和相应的样品修正值选择需要装入对照的通道号(在通道号码前)按“读取”键完成装入工作23.用天平称取1克果蔬剪成2cm见方放入烧杯中,用大移液枪抽取5ml提取液加入到烧杯中静置15分钟(或震荡1分钟)用大移液枪从烧杯中抽取2.5ml浸泡液移至空试管中用小移液枪取0.1ml酶试剂加入试管中用小移液枪取0.1ml显色剂加入试管中静置15分钟用小移液枪取0.1ml底物加入试管中迅速摇匀并倒入比色皿放入比色池按“开
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