MIC实验教案.ppt
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1、几种抗菌药物的最小抑菌浓度的几种抗菌药物的最小抑菌浓度的测定测定MICMIC试验试验 (微量肉汤二倍稀释法)(微量肉汤二倍稀释法)一、目的一、目的1、掌握微量肉汤二倍稀释法测定抗菌药物MIC的基本步骤,能准确测出各种抗菌药物的MIC值,了解单药的抗菌活性2、为后面的棋盘法设计棋盘做准备,求取棋盘的中心浓度 二、意义二、意义1、通过对MIC值的测定了解药物的体外抗菌活性2、为临床选药提供依据3、耐药检测三、菌种三、菌种1、大肠杆菌(标准菌株25922)2、沙门氏菌(标准菌株)3、金色葡萄球菌(标准菌株)(以上三种菌株均由中国兽药监察所提供)四、药品四、药品硫酸庆大霉素(批号:含量:厂家:)阿莫西
2、林(批号:含量:厂家:)硫酸四环素(批号:含量:厂家:)恩诺沙星(批号:含量:厂家:)阿米卡星(批号:含量:厂家:)氟苯尼考(批号:含量:厂家:)五、培养基五、培养基MH肉汤培养基、用去离子水配制5g/L显色剂TTC(氯化三苯四氮唑)六、器材六、器材96孔细胞培养板、培养皿、移液枪、1ml和200 l l枪头、EP管、锥形瓶、试管架、酒精灯、酒精棉球等分析天平、超净工作台、37度恒温培养箱、烘箱七、方法步骤七、方法步骤1、药液的配制及除菌配制 根据药物的效价或是含量及所需要的体积,计算出药物所需的量,并准确称取所需的各种抗菌药物,用适宜的溶剂及稀释及稀释剂将药物稀释至所需的浓度。除菌 抗菌素药
3、物通过过滤的方式过滤;化学合成类药物通过过滤或是高压灭菌的方式进行除菌。3、MIC的测定(微量二倍稀释法)第一步:在96孔板每个孔加入含TTC的空白肉汤100 l l 。图表第二步:在A/B/C三排的第一孔加配好的药液A(浓度为512IU/ml或 g g/ml)100 l l,然后对药物进行二倍稀释。即,第一孔中加入药液后用移液枪充分吹打(至少三次以上)使药物与肉汤充分混匀,然后吸取100 l l加入第二孔再充分吹打使之与肉汤充分混匀,照此重复直至最后一孔,吸取100 l l弃去;此时每孔药物浓度从左到右依次为:256,128,64,32,16,8,4,2,1,0.5,0.25,0.125(单
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