霉菌和毒素的检测方法PPT课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,食品中霉菌及毒素的检测方法,专 业：食品科学,1,.,Number 1,研究背景及意义,Number 2,霉菌的检测方法,Number 3,毒素的检测方法,Number 4,参考文献,目 录,contents,2,.,霉菌,霉菌广泛分布于自然界中，由于其可形成各种微小的孢子，因而很容易污染食品。,霉菌毒素,霉菌毒素是霉菌产生的一种有毒的次生代谢产物，毒素污染会导致,营养价值降低，引起动物疾病，并直接或间接危害人类健康,。,1,研究背景及意义,3,.,自从,20,世纪,60,年代发现强致癌的黄曲霉毒素以来,霉菌与霉菌毒素对食品的污染日益引起重视。我国在,2011,年颁布了国家标准,GB2761-2011,食品中真菌毒素限量,各级食品监督检测机构全面开展霉菌的检测工作。,4,.,方法,01,GB4789.15-2010,食品微生物学检验霉菌和酵母计数。,方法,02,食品中霉菌和酵母计数,Petrifilm,TM,测试片法。,2.1,霉菌检测方法,5,.,03,菌落计数,结果和报告,04,05,镜检,培养,02,01,样品的稀释,2.1,食品微生物学检验霉菌和酵母计数,6,.,7,.,2.1.1,样品的稀释,2.1.2,培养,8,.,肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。,选取菌落数在,10 CFU150 CFU,的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数霉菌,蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计,。菌落数应采用两个平板的平均数。,2.1.3,菌落计数,9,.,2.1.4.1,结果,计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。,若所有平板上菌落数,均大于,150 CFU,，则对,稀释度最高,的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。,若所有平板上菌落数均,小于,10 CFU,，则应按,稀释度最低,的平均菌落数乘以稀释倍数计算。,若所有稀释度平板均无菌落生长，,则以小于,1,乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于,1,计数,。,10,.,2.1.4.2,报告,1),菌落数在,100,以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。,2),菌落数大于或等于,100,时，前,3,位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前,2,位数字，后面用,0,代替位数来表示结果；也可用,10,的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。,3),称重取样以,CFU/g,为单位报告，体积取样以,CFU/mL,为单位报告，报告或分别报告霉菌和,/,或酵母数。,11,.,2.1.5,镜检,B.1,检样的制备：取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为,1.3447,1.3460,（即浓度为,7.9%,8.8%,），备用。,B.2,显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率,90,125,倍调节标准视野，使其直径为,1.382 mm,。,B.3,涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备观察。,B.4,观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测，一般每一检样观察,50,个视野，同一检样应由两人进行观察。,B.5,结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（,1.382mm),的,1/6,或三根菌丝总长度超过标准视野的,1/6,（即测微器的一格）时即为阳性（,+,），否则为阴性（,-,），按,100,个视野计，其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。,12,.,13,.,2.1,食品中霉菌和酵母计数,PetrifilmTM,测试片法,PetrifilmTM,霉菌和酵母测试片：,1）测试片中添加抗生素，可抑制细菌生长；,2）含有酵母菌指示剂，使酵母菌更易计数；,3）适用与菌落总数、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、单增李斯特氏菌。,14,.,15,.,16,.,17,.,18,.,19,.,酶菌毒素,Text 1,酶 联 免 疫 吸 附 法,Text 2,荧光检测法,Text 3,近红外光谱法,Text 4,微柱法,Text 5,薄层色谱法,.,Text 6,气相色谱和气质谱联用法,Text 7,高效液相色谱法和液质联用,2.2,霉菌毒素检测方法,20,.,ELISA,是利用抗原抗体反应原理，已知抗原吸附在酶标板上 加入酶标记抗体和样品提取液并混合均匀，充分反应后用去离子水洗去多余抗体，再加入酶的底物，产生有色物质，最后加入终止液使反应终止。柳其芳,2006 ELISA,法,操作简单、检测速度快、成本低,，适用于大批量样品的快速筛选。蒋建云,2006,等也用此法检测饲料中黄曲霉毒素,B1,的含量，不但特异性强 提取纯化步骤简单，结果也易判读 回收率在,90%,左右。,2.2.1,酶,联 免 疫 吸 附 法,21,.,2.2.2,荧光检测法,荧光检测法,FLD,常结合免疫亲和柱使用，是美国,AOAC,的标准检测方法，我国国标,(GB/T 18979-2003),也采用此法检测黄曲霉毒素的含量，检测样品经,甲醇,/,水提取后、过滤、稀释。,用含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱层析,净化，超纯水洗去杂质，甲醇洗脱，加入溴溶液衍生,后用荧光光度计测定。赵东豪等,2009,此法也常用来检测玉米赤霉烯酮等。荧光检测法方便、快捷、花费少、不需使用霉菌毒素的标准品，减少对人的伤害 也常作为快速筛选方法使用。,22,.,2.2.3,近红外光谱法,近红外光谱法,（,NIR,）是近年来发展得比较快的光谱分析技术。,NIR,可以用来检测小麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇等霉菌毒素。使用,NIR,分析，,样品不需预处理，多种组分可以同时测定，分析速度快，重现性好，,但是此方法必须先建立准确的校正模型，适用于经常性质量控制分析。,23,.,2.2.4,微柱法,微柱法,：将样品提取液通过,氧化铝,-,硅镁型,吸附剂填充的微柱，样品中的杂质被氧化铝吸附，霉菌毒素则被硅镁型吸附剂吸附，在紫外分析灯下观察荧光环与标准比较定量 本法简便快速、灵敏度高。主要用于饲料中黄曲霉毒素的筛选。,微柱凝胶免疫监测仪,24,.,2.2.5,薄层色谱法,薄层色谱法,：将样品提取液在薄层板上点样，展开后，用吸收法或荧光法对被测样品与标准品扫描测定。对于黄曲霉毒素,B1,的检测，我国国标采用,(TLC),法，该方法更适于确认黄曲霉毒素 存在与否。,25,.,气相色谱和气质联用法,2.2.5,气相色谱和气质联用法,气相色谱和气相色谱,-,质谱联用,法,20,世纪,70,年代，气相色谱和气相色谱,-,质谱联用法开始用于霉菌毒素的检测毒素等,单端孢霉烯族毒素,。常采用气相色谱法检测，食品中毒素的检测，由于未知成分较多，一般采用与质谱联用，灵敏度也有较大的提高，检测限更低。,26,.,高效液相色谱法,较早用于霉菌毒素的检测 常用的检测器有荧光、紫外、二极管阵列、蒸发光散射等检测器，目前使用最广泛的检测霉菌毒素的方法 涉及到畜牧化工和食品等各行业。,2.5.6.,高效液相色谱和液质联用,液相色谱,27,.,液,-,质联用,HPLC-MS,具有,灵敏度高、特异性强、精确度和选择性好,等特点，能够对霉菌毒素进行准确的定性分析，不但检测霉菌毒素还可以检测结构类似的其他物质,但是仪器设备比较昂贵 检测成本高 操作步骤复杂 因此目前国内的普及率不高。,2.5.6,高效液相色谱和液质联用,28,.,4,参考文献,1,龚阿琼，胡骏鹏,.,常见霉菌毒素的危害及检测方法,J,2014;,2,施震地,.,食品中霉菌检测方法探究,J,，,2012,；,3 GB4789.15-2010,食品微生物学检验霉菌和酵母计数；,4,食品中霉菌和酵母计数,PetrifilmTM,测试片法；,5,Matsuda H Comparative study of the spread plate and pour plate techniques,in terms of colony forming units of fungi,，,29,.,THANK YOU,.,30,.,