硕士论文—疏肝导浊方干预家兔肝脏脂肪变的实验研究.doc

疏肝导浊方干预家兔肝脏脂肪变的实验研究
【摘要】  目的：观察疏肝导浊方对家兔实验性肝脏脂肪变的干预作用。方法：42只家兔随机分为正常组、模型组、疏肝导浊方低、中、高剂量组和饮食治疗组，每组7只。正常组家兔以普通饲料喂养，按10ml/kg体重给予蒸馏水灌胃；模型组家兔予高脂饲料喂养12周后处死；疏肝导浊方低、中、高剂量组家兔在喂饲高脂饲料12周后改为普通饲料，分别按1、2、3g/kg体重给予疏肝导浊方药液灌胃；饮食治疗组家兔在喂饲高脂饲料12周后改为普通饲料。于16周末心脏采血后处死各组家兔，制备肝组织石蜡切片，光镜下评估肝脏脂肪变性和炎症活动程度；分离血清，测定TC、TG、HDLC、LDLC、ALT和AST浓度。结果：与模型组和饮食组比较，疏肝导浊方中、高剂量组家兔血清TC、TG、LDLC、ALT和AST显著降低（P＜0.05或P＜0.01），HDLC显著增高（P＜0.01）；疏肝导浊方中、高剂量组家兔肝脂肪变性程度和炎症活动度积分明显低于模型组（P＜0.05）。结论：疏肝导浊方能改善实验性脂肪肝家兔的血脂和肝功能指标，减轻肝组织脂肪变性程度和炎症反应，以中、高剂量的作用最显著。
【关键词】  家兔 脂肪肝 血脂 疏肝导浊方
Abstract  Objective:To explore the effects of Shugandaozhuo complex prescription on steatosis in the liver in rabbits.
Methods:Forty-two rabbits were ran into 4 groups.Normal group was breed common forage.Model group was breed high lipoid forage.Shugandaozhuo complex prescription group was intragastric administered with Chinese materia medica after 12-week high lipoid forage(including 3 subgroups with different dosis).Placebo group was breed common forage after 12-week high lipoid forage.The model group were sacrificed 12 weeks later and other groups were killed 16 weeks later.Blood samples were harvested before putting to death and liver tissue samples were harvested for histological examination.The levels of total cholesterol(TC),triglyceride(TG),high density lipoprotein-cholesterol(HDL-C),low density lipoprotein-cholesterol(LDL-C),alanine aminotransferase(ALT) and aspartate aminotransferase(AST).
Results:Compared with the model and placebo groups,the levels of TC,TG,LDL-C,ALT and AST were dramatically decreased in the medium and high dosis subgroups of the Shugandaozhuo complex prescription group(P<0.05 or P<0.01) and HDL-C was increased(P<0.01);adipose degeneration and inflammation was degraded as compared to the model group.
Conclusion:Shugandaozhuo complex prescription may ameliorate the adipose degeneration and inflammation in the liver of rabbits by regulating serum lipids and improving liver function.

Key words  rabbits  steatosis  serum lipids  shugandaozhuo complex prescription
    现代医学认为，肝脏脂肪变与脂质代谢异常、激素水平改变、环境与遗传因素、脂质过氧化损害、免疫反应、缺氧和肝脏血液循环障碍等原因有关，这些因素均可引发体内脂肪过度增加，在肝细胞中形成脂肪微滴，布散于肝脏中所致[1]。中医认为，机体升清降浊功能失常，“浊”邪在肝脏的过度沉积是脂肪肝的病理基础[2]。本研究探讨疏肝导浊方对家兔实验性肝脂肪变的干预作用，报道如下。
1  实验材料 
1.1  动  物 
SPF级家兔42只，体质量2～2.5kg，雌雄不拘，由本院实验动物房提供。
1.2  药  物  疏肝导浊方由柴胡、泽泻、荷叶、丹参、决明子、姜黄、熟首乌组成，由本院第一附属医院中药房提供，经中药化学实验室鉴定为纯正中药。在机能实验室将上述药物按配方比例加10倍量的水煎煮2次，合并滤液，冷凝回流浓缩至含生药1g/ml，置冰箱保存备用。
1.3  仪  器  722型分光光度计、微量移液器、电热恒温水温箱等。
2  实验方法 
2.1  分  组  42只家兔随机分为正常组，模型组，疏肝导浊方低、中、高剂量组和饮食治疗组，每组7只。
2.2  造模及干预  正常组以普通饲料喂养，共16周；模型组给予高脂饲料(880g/kg普通饲料+100g/kg猪油+20g/kg胆固醇)喂养12周后处死；疏肝导浊方各组在喂饲高脂饲料12周后改为普通饲料，低剂量组予疏肝导浊方药液1g/kg体质量灌胃，中剂量组给2g/kg体质量灌胃；高剂量组给3g/kg体质量灌胃；正常组12周后按相同的给药体积10ml/kg体质量给予蒸馏水灌胃；均1天1次，早晨9：00给药；灌胃时兔经张口器固定，助手右手压兔头使其向腹侧屈曲，并使兔头维持在屈曲位，操作者持14号导尿管沿张口器中间孔插入15～20cm；饮食治疗组在喂饲高脂饲料12周后改为普通饲料喂养。各组大鼠自由进食、进水，分笼(每笼5只)饲养于20℃±2℃、明暗各12小时的动物实验室内。
2.3  检测指标  于16周末禁食12小时，次日早晨8∶00乙醚麻醉下，心脏采血后处死家兔，迅速取出肝脏，按常规制备肝组织石蜡切片标本，光镜下评估脂肪变性程度和炎症活动度。分离血清测定血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白 (HDLC)、低密度脂蛋白 (LDLC)、天冬氨酸氨基转移酶（ALT）和丙氨酸氨基转移酶（AST）水平。
2.4  统计学方法  应用SPSS 10.0软件包，计量资料以(±s)表示，采用方差分析，等级资料采用秩和检验。
3  实验结果 
3.1  各组TC、TG、HDLC、LDLC、ALT和AST水平比较  与正常组比较，模型组、疏肝导浊方低剂量组、饮食组TC、TG 、HDLC、LDLC增高(P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，疏肝导浊方低剂量组TC、AST降低(P<0.05);与模型组、饮食组比较，疏肝导浊方中、高剂量组TC、TG、LDLC、AST下降，HDLC增高(P<0.01或P<0.05)，见表1。
表1  各组血清TC、TG、HDLC、LDLC、ALT、AST水平比较(±s)

组  别剂量/（g/kg）n/只TC/(mg/dl)TG/(mg/dl)HDLC/(mmol/L)LDLC/(mmol/L)ALT/(IU/ml)AST/(IU/ml)
正常组757.29±8.3854.62±10.171.46±0.210.45±0.3631.41±3.7735.37±4.11
模型组792.54±10.84**82.89±9.02**2.71±0.36**3.97±1.03**39.98±5.32*47.10±5.02*
低剂量组1779.51±9.13**△71.33±10.87*▲2.66±0.41**2.74±1.12*31.36±6.6739.09±6.33△▲
中剂量组2762.94±7.35△△▲▲57.60±8.07△△▲3.97±0.59**△△▲▲1.02±0.55△△▲▲32.11±3.38△36.15±4.51△▲▲
高剂量组3758.21±7.11△△▲▲56.34±10.29△△▲4.73±0.81**△△▲▲1.13±0.99△△▲▲33.06±5.21△35.99±7.26△▲
饮食治疗组780.87±9.01**△72.71±11.10*2.77±0.51**3.83±0.79**38.34±4.1346.96±4.15*
    与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与饮食治疗组比较，▲P＜0.05,▲▲P＜0.01 3.2  各组肝脏病理学变化比较  光镜下评估肝脂肪变性程度[3]和炎症活动度[4]。与正常组比较，模型组家兔肝脂肪变程度加重，炎症活动度计分增加，差异有统计学意义(P<0.05)；疏肝导浊方中、高剂量组家兔肝脂肪变性程度和炎症活动度计分较模型组降低，疏肝导浊方低剂量组肝脂肪变性程度降低(P<0.05)；各剂量组与正常组肝脂肪变性程度比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；疏肝导浊方低剂量组炎症活动度计分比正常组高(P<0.05)；饮食治疗组肝脂肪变性程度较模型组有所减轻，但两者间差异无统计学意义(P＞0.05)，而其炎症活动度计分较正常组增高(P<0.05)，见表2、3。
4  讨  论 

脂肪肝作为一种可逆性病变，早期诊断与合理
表2  各组家兔肝脂肪变性程度比较

组  别n/只-++++++++++P值
正常组741110
模型组701123 *
低剂量组703220△
中剂量组713210△
高剂量组714110△
饮食治疗组701222

秩和检验，H=22.376，P=0.000；与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05（下同）

治疗可康复，治疗不及时，部分患者可能发展为肝纤维化、肝硬化[5]。根据中医理论，脂肪肝系肝失条达，肝木乘脾土，运化失常引起气血失调，血瘀脾虚，形成痰湿内困、瘀血阻络，导致脂质沉积于肝[6]。疏肝导浊方用熟首乌补益精血，柴胡疏肝解郁，决明
表3  各组家兔肝组织炎症活动度计分比较

组  别n/只中位数(m)minmaxP值
正常组73.00001.005.00
模型组79.00004.0012.00*
低剂量组78.00004.0011.00*
中剂量组74.00003.008.00△
高剂量组74.00002.008.00△
饮食治疗组78.00005.0012.00*
    秩和检验，H=24.134，P=0.000

子清肝泻浊，丹参活血化瘀通络，配以泽泻、荷叶、姜黄行气疏浊。从实验结果可见，疏肝导浊方可降低高脂血症家兔血清TC、TG，作用机制可能与首乌的有效成分降低或阻止肠内脂质吸收，促进脂质的排泄有关[7]。饮食治疗组除较正常组降低TC外，其余指标与模型组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，提示单纯改善饮食并不能在肝脂肪变早期有效治疗家兔脂肪肝。

结果还显示，疏肝导浊方低剂量组虽可降低TC、TG、ALT和肝脏组织的脂肪变程度，但对脂蛋白（HDL、LDL）、AST和炎症活动度影响无统计学意义，干预效果不理想。中剂量组可明显降低血脂、肝脏脂肪变性程度和炎症反应，保护肝脏，显示具有良好的干预作用。高剂量组降脂作用和对肝组织脂肪变性、炎症反应的控制更明显，但对ALT、AST作用不明显，其是否与调脂药对肝脏的毒性反应有关，如文献报道[8]，首乌具有一定的肝损害危险，尚待进一步研究观察。
【参考文献】
  [1]
范建高,曾民德,李继强,等.Bezafibrate对大鼠高脂血症和脂肪肝形成的影响[J].胃肠病学和肝病学杂志,1999,(8):100.

[2] 王威,江海涛,李玉红,等.论“疏肝导浊”法对脂肪肝的治疗[J].中医研究,2006,19(5):34.

[3] Diehl AM,Goodman Z,Ishak KG.Alcohollike liver disease in nonalcoholics.A clinical and histologic comparison with alcoholinduced liver injury[J].Gastroenterology,1998,95(4):10561062.

[4] 王泰龄,刘霞,周元平,等.慢性肝炎炎症活动度及纤维化程度计分方案[J].中华肝脏病杂志,1998,6(4):195197.

[5] Farrell GC,Larter CA.Nonalcoholic fatty liver disease:from steatosis to cirrhosis[J].Hepatology,2006,43(2 Suppl1):S99S112.

[6] 佟丽娟.高脂血证的病因病机及辨证分型治疗[J].中医药学刊,2002,20(2):244.

[7] 何高琴,周启新,钱元恕,等.首乌、决明子、大黄、虎杖、山楂抗动脉粥样硬化作用的实验研究[J].中药药理研究与临床,1987,(4):41.

[8] 赵敏,陈光亮.中药治疗非酒精性脂肪肝的实验研究进展[J].安徽医药,2007,11(3):257.
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