肿瘤的基因诊断.ppt

肿瘤的基因诊断1 1.肿肿瘤是瘤是细细胞的异常增生胞的异常增生 有有结结构、功能和代构、功能和代谢谢的异常的异常 具有超具有超过过正常正常细细胞增生能力胞增生能力肿瘤概念2 2.在在细细胞内核酸代胞内核酸代谢谢的异常的异常:肿肿瘤瘤细细胞和正常胞和正常细细胞的核酸代胞的核酸代谢谢有有显显著的不同；著的不同；不同不同类类型型肿肿瘤瘤细细胞的核酸代胞的核酸代谢谢也有也有较较大的差异；大的差异；相同相同恶恶性程度性程度肿肿瘤瘤细细胞的核酸代胞的核酸代谢谢也有所不同。也有所不同。肿瘤是一种分子病3 3.癌基因的激活癌基因的激活癌基因的激活癌基因的激活 抑癌基因的失活（或缺失）抑癌基因的失活（或缺失）抑癌基因的失活（或缺失）抑癌基因的失活（或缺失）肿瘤发生机理4 4.原癌基因原癌基因癌基因癌基因病毒癌基因病毒癌基因 肿瘤抑制基因瘤抑制基因 肿瘤瘤转移相关基因移相关基因 肿瘤耐瘤耐药基因等基因等肿瘤相关基因5 5.细胞基因胞基因组中具有能中具有能够使正常使正常细胞胞发生生恶性性转化的基因化的基因 癌基因在正常癌基因在正常细胞的基因胞的基因组中中 存在存在 不表达状不表达状态 表达水平不足以引起表达水平不足以引起细胞的胞的恶性性转化化癌基因：6 6.定位定位功能功能癌基因，癌基因，产产物物分泌蛋白分泌蛋白生生长长因子因子sisPDGFsisPDGF链链跨膜蛋白跨膜蛋白受体型酪氨酸激受体型酪氨酸激酶酶erbB,EGFerbB,EGF受体受体 erbB2,EGFerbB2,EGF样样受体受体(neu)(neu)fms,CSF-1fms,CSF-1受体受体 膜膜结结合蛋白合蛋白G-G-蛋白蛋白 非受体型酪氨酸激非受体型酪氨酸激酶酶 rasp21rasrasp21rassrcpp60srcsrcpp60src胞胞浆浆可溶性蛋白可溶性蛋白非受体型酪氨酸激非受体型酪氨酸激酶酶 丝丝氨酸氨酸/苏苏氨酸激氨酸激酶酶信号信号转导连转导连接蛋白接蛋白 ab1ab1rafrafcrk,SH2/SH3crk,SH2/SH3调节调节蛋白蛋白vav,SH2vav,SH2调节调节蛋白蛋白 胞核蛋白胞核蛋白转录转录因子因子mycmycmybmybfosfosjunjunerbA,T3erbA,T3受体受体 表表1 1细细胞癌基因按其胞癌基因按其产产物定位和功能分物定位和功能分类类7 7.抑癌基因8 8.基因基因染色体定位染色体定位相关相关肿肿瘤瘤基因基因产产物及功能物及功能RBRB13q1413q14RBRB、成骨肉瘤、胃癌、成骨肉瘤、胃癌、SCLCSCLC、乳癌、乳癌、结肠结肠癌癌p105p105，控制生，控制生长长WTWT11p1311p13WTWT、横横纹纹肌肌肉肉瘤瘤、肺肺癌癌、膀膀胱胱癌癌、乳乳癌癌、肝肝母母细细胞瘤胞瘤WT-ZFPWT-ZFP，负调负调控控转录转录因子因子NF-1NF-117p1217p12神神经经纤纤维维瘤瘤、嗜嗜铬铬细细胞胞瘤瘤、雪雪旺旺氏氏细细胞胞瘤瘤、神神经纤维经纤维肉瘤肉瘤GAPGAP，拮抗，拮抗p21rasBp21rasBDCCDCC18q21.318q21.3结肠结肠瘤瘤P192,P192,细细胞粘附分子胞粘附分子p53p5317p1317p13星星状状细细胞胞瘤瘤、胶胶质质母母细细胞胞瘤瘤、结结肠肠癌癌、乳乳癌癌、成骨肉瘤、成骨肉瘤、SCLCSCLC、胃癌、磷状、胃癌、磷状细细胞肺癌胞肺癌P53 P53 控制控制肿肿瘤生瘤生长长erb Aerb A17q2117q21ANLLANLLT3T3受受体体，含含锌锌指指结结构构的的转转录录因子因子表2 已确定的几种抑癌基因9 9.野生型P53生物学活性当DNA损伤的时候,P53基因就明显表达使细胞在G1期生长阻滞，促使细胞凋亡。抑制肿瘤细胞生长保持DNA完整性1010.肿瘤转移相关基因1111.其表达使其表达使肿瘤瘤细胞胞对药物物产生耐生耐药的的基因。基因。肿瘤耐药基因1212.血小板衍生生长因子（PDGF）表皮生长因子（EGF）VGF基因等 肿瘤生长因子 1313.肿瘤的基因诊断肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面：肿瘤转移标志物肿瘤抗药基因突变的癌基因肿瘤相关的病毒基因1414.标标志分志分类类机制机制分子分子标标志志应应用于癌症用于癌症诊诊断断分子分子遗传遗传性性染色体易位染色体易位t(9t(9；22)22)，t t（1414；1818），t(11t(11；12)12)等等白血病、淋巴瘤等白血病、淋巴瘤等点突点突变变p53,ER rasp53,ER ras等等胃胃癌癌、膀膀胱胱癌癌、乳乳腺腺癌癌、前前列列腺腺癌癌、结结肠肠癌癌、胰胰腺腺癌、肺癌等癌、肺癌等缺失缺失BRCA1BRCA1，BRCA2BRCA2，DCCDCC等等乳腺癌、乳腺癌、结肠结肠癌癌改改变变拼接拼接CD44CD44，muc-1,VLA-4muc-1,VLA-4等等结结肠肠癌癌、肾肾癌癌、乳乳腺腺癌癌、脑脑瘤等瘤等扩扩增增erb-B2,EGFR,N-myc,raserb-B2,EGFR,N-myc,ras乳乳腺腺癌癌、脑脑瘤瘤、神神经经母母细细胞瘤胞瘤比例改比例改变变明胶明胶酶酶A/TIMP2A/TIMP2乳腺癌乳腺癌转转移等移等病毒性病毒性病毒病毒转转化化HPV,HCV,HBVHPV,HCV,HBV，EBVEBV宫颈宫颈癌、肝癌、鼻咽癌等癌、肝癌、鼻咽癌等组织组织性性组织组织分化分化PSA,PSMAPSA,PSMA前列腺癌前列腺癌muc-18,muc-18,酪氨酸酸酪氨酸酸酶酶，Mage-3Mage-3黑素瘤黑素瘤AFP,AFP,白蛋白白蛋白肝癌肝癌甲状腺球蛋白甲状腺球蛋白甲状腺癌甲状腺癌NPGP9.5NPGP9.5，酪酪氨氨酸酸羟羟化化酶酶表表面面活活性性物物质质等等神神经经母母细细胞瘤胞瘤肿肿瘤性瘤性肿肿瘤瘤细细胞特征胞特征CEACEA肺肺癌癌、结结肠肠癌癌、胃胃癌癌、乳乳腺癌腺癌-HCG-HCG黑素瘤等黑素瘤等CK-19CK-19肺肺鳞鳞癌癌端粒端粒酶酶结结肠肠癌癌、乳乳腺腺癌癌、头头颈颈部部癌等癌等微微卫卫星体等星体等结结肠肠癌癌、乳乳腺腺癌癌、头头颈颈部部癌等癌等表3 肿瘤基因诊断的分子标志及其应用1515.可分可分可分可分为为四大四大四大四大类类 I.I.组织组织特异性基因特异性基因特异性基因特异性基因标标志志志志 II.II.肿肿瘤特异性基因瘤特异性基因瘤特异性基因瘤特异性基因标标志志志志 III.III.血管生成因子血管生成因子血管生成因子血管生成因子 IV.IV.其它与其它与其它与其它与肿肿瘤瘤瘤瘤转转移相关的分子及基移相关的分子及基移相关的分子及基移相关的分子及基质质蛋白蛋白蛋白蛋白酶酶及其抑制及其抑制及其抑制及其抑制剂剂 肿瘤转移基因标志物1616.组织特异性基因标志物指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋巴组织和血细胞中不存在的。如角质蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生长因子受体（EGFR）mRNA等。.1717.肿瘤特异性基因标志物存在于存在于肿瘤及其起源的正常瘤及其起源的正常细胞中，胞中，不存在于其他不存在于其他细胞。胞。如如CEA mRNACEA mRNA、AFP mRNAAFP mRNA、PSA mRNAPSA mRNA等。等。1818.血管生成因子如血管内皮如血管内皮细胞生胞生长因子（因子（VEGFVEGF）等。）等。1919.肿瘤抗药基因对对于于肿肿瘤化瘤化疗疗效果及效果及预预后后进进行推行推测测；还还可以将可以将肿肿瘤抗瘤抗药药基因基因导导人骨髓人骨髓细细胞，特胞，特别别是骨髓干是骨髓干细细胞中，提高机体胞中，提高机体对对于抗于抗肿肿瘤化瘤化疗疗药药物的耐受程度，如此可以加大抗物的耐受程度，如此可以加大抗肿肿瘤化瘤化疗疗药药物的使用物的使用剂剂量，提高抗量，提高抗肿肿瘤化瘤化疗疗的治的治疗疗效效果。果。2020.肿瘤抗药基因2121.突变的癌基因2222.肿瘤相关的病毒基因EBEB病毒（病毒（EBVEBV）人乳人乳头头瘤病毒（瘤病毒（HPVHPV）乙型肝炎病毒（乙型肝炎病毒（HBVHBV）、丙型肝炎病毒（）、丙型肝炎病毒（HCVHCV）感染）感染对对于于这这些些肿肿瘤瘤组织细组织细胞中相关病毒基因及其胞中相关病毒基因及其编编 码产码产物的物的检测检测，可以作，可以作为这为这些些类类型的型的肿肿瘤瘤诊诊断的断的标标志。志。致瘤病毒引起的致瘤病毒引起的恶恶性性转转化作用引起了人化作用引起了人们们极大的关注极大的关注2323.肿瘤基因诊断的常用方法PCR、RT-PCRSouthern blot杂交技术、Northern blot杂交技术基因芯片基因测序。2424.肿瘤基因的分子瘤基因的分子诊断意断意义 1.1.肿瘤的早期瘤的早期诊断和断和筛选2.2.肿瘤瘤疗效效监测 3.3.肿瘤的瘤的预后判断后判断 4.4.肿瘤微瘤微转移移检测2525.肿瘤基因瘤基因检测在在肿瘤微瘤微转移移检测中中应用用举例例2626.2727.前列腺癌特异性基因前列腺癌特异性基因DD3PCA3DD3PCA3是一种非编码RNA的基因，定位于9q2122染色体。它为前列腺癌特异性基因之一，DD3PCA3 mRNA仅在前列腺癌细胞中表达，而在其它正常组织和癌组织以及细胞系中均不表达。2828.DD3 mRNA 14外显子扩增结果M M：50bp 50bp DNA DNA LadderLadder；1 1：LNCaPLNCaP阳阳性性对对照照；2 2 3 3：PCaPCa；4 4：PINPIN；5 5 6 6：BPHBPH；7 7：直直肠肠癌癌；8 8：直直肠肠癌癌癌癌旁旁；9 9：结结肠肠癌癌；1010：结结肠肠癌癌癌癌旁旁；1111：乳乳腺腺癌癌；1212：甲甲状状腺腺癌癌；1313：胃胃癌癌；1414：胃胃癌癌癌癌旁旁；1515：膀膀胱胱癌癌；1616：软软组组织织纤纤维维肉肉瘤瘤；1717：转转移移性性腺腺癌癌；1818：淋淋巴巴结结转转移移性性黑黑色色素素瘤瘤；1919：卵卵巢巢成成熟熟性性畸胎瘤；畸胎瘤；2020：正常肝：正常肝脏脏；2121：胆囊；：胆囊；2222：胎：胎盘盘；2323：试剂试剂空白。空白。2929.DD3 mRNA 13外显子扩增结果M M：50bp 50bp DNA DNA LadderLadder；1 1：LNCaPLNCaP阳阳性性对对照照；2 2 3 3：PCaPCa；4 4：PINPIN；5 5 6 6：BPHBPH；7 7：直直肠肠癌癌；8 8：直直肠肠癌癌癌癌旁旁；9 9：结结肠肠癌癌；1010：结结肠肠癌癌癌癌旁旁；1111：乳乳腺腺癌癌；1212：甲甲状状腺腺癌癌；1313：胃胃癌癌；1414：胃胃癌癌癌癌旁旁；1515：膀膀胱胱癌癌；1616：软软组组织织纤纤维维肉肉瘤瘤；1717：转转移移性性腺腺癌癌；1818：淋淋巴巴结结转转移移性性黑黑色色素素瘤瘤；1919：卵卵巢巢成成熟熟性性畸胎瘤；畸胎瘤；2020：正常肝：正常肝脏脏；2121：胆囊；：胆囊；2222：胎：胎盘盘；2323：试剂试剂空白。空白。3030.DD3 mRNA 34外显子扩增结果M M：50bp 50bp DNA DNA LadderLadder；1 1：LNCaPLNCaP阳阳性性对对照照；2 2 3 3：PCaPCa；4 4：PINPIN；5 5 6 6：BPHBPH；7 7：直直肠肠癌癌；8 8：直直肠肠癌癌癌癌旁旁；9 9：结结肠肠癌癌；1010：结结肠肠癌癌癌癌旁旁；1111：乳乳腺腺癌癌；1212：甲甲状状腺腺癌癌；1313：胃胃癌癌；1414：胃胃癌癌癌癌旁旁；1515：膀膀胱胱癌癌；1616：软软组组织织纤纤维维肉肉瘤瘤；1717：转转移移性性腺腺癌癌；1818：淋淋巴巴结结转转移移性性黑黑色色素素瘤瘤；1919：卵卵巢巢成成熟熟性性畸胎瘤；畸胎瘤；2020：正常肝：正常肝脏脏；2121：胆囊；：胆囊；2222：胎：胎盘盘；2323：试剂试剂空白。空白。3131.前列腺前列腺组织组织和其他和其他肿肿瘤瘤组织组织及癌旁及癌旁组织组织DD3 mRNADD3 mRNA检测结检测结果果3232.M M：50bp DNA50bp DNA标标准；准；1 1：LNCaPLNCaP阳性阳性对对照；照；2 2：BPHBPH；3 3：健康男性志愿者；：健康男性志愿者；4 41010为为PCaPCa；1111为试剂为试剂空白。空白。外周血DD3 mRNA的RT-PCR扩增电泳图 3333.RT-PCR检测结果 v4444例例PCaPCa组组中中1313例可例可见见DD3 mRNADD3 mRNA阳性阳性结结果果(其中其中B B期、期、C C期及期及D D期分期分别别有有为为0 0例、例、2 2例，例，1111例例)。v3030例例BPHBPH患者和患者和1818名健康男性志愿者名健康男性志愿者标标本中均未本中均未检检出出DD3 mRNADD3 mRNA。3434.外周血外周血DD3 mRNADD3 mRNA的巢式的巢式RT-PCRRT-PCR扩扩增增电电泳泳图图 M M：50bp DNA50bp DNA分子量分子量标标准；准；1 1：LNCaPLNCaP阳性阳性对对照；照；2 2：阴性：阴性对对照照(女性女性)；3 3：BPHBPH患者；患者；4 4：健康男性志愿者；：健康男性志愿者；5 58 8：未治：未治疗疗的的PCaPCa；9 9：试剂试剂空白空白 3535.巢式RT-PCR检测结果v4444例例PCaPCa组组中中2121例可例可见见DD3 mRNADD3 mRNA阳性阳性结结果果(其中其中B B期、期、C C期、期、D D期分期分别别有有1 1例、例、5 5例、例、1515例例)v3030例例BPHBPH患者和患者和1818名健康男性志愿者均未名健康男性志愿者均未见见阳性阳性结结果果 3636.两种方法两种方法对对PCaPCa患者外周血患者外周血DD3 mRNADD3 mRNA检检出率比出率比较较RT-PCR巢式巢式RT-PCR+-+130-823注：注：2 2=20.2=20.2，P P0.0010.001；KappaKappa0.6290.629，P P0.0010.001 3737.外周血DD3 mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度 M:50bp DNAM:50bp DNA分子量分子量标标准；准；1 16:6:依次依次为为10105 5、10104 4、10103 3、10102 2、10101 1、1 1个个LNCaPLNCaP细细胞胞/ml/ml全血；全血；7:7:阴性阴性对对照；照；8:8:试剂试剂空白空白 3838.组别 DD3 mRNADD3 mRNA检出率出率(%(%，例数，例数)PCaPCa（未治（未治疗）100%100%（11/1111/11）BPHBPH 0%0%（0/300/30）健康男性志愿者健康男性志愿者（对照）照）0%0%（0/180/18）注：注：经卡方卡方检验，2 259.0 59.0 P P0.010.01不同前列腺疾病患者其外周血不同前列腺疾病患者其外周血DD3 mRNADD3 mRNA检检出率比出率比较较 巢式巢式RT-PCRRT-PCR3939.PCaPCa不同不同临临床分期未治床分期未治疗组疗组和治和治疗组疗组DD3 mRNADD3 mRNA阳性率比阳性率比较较(%,(%,例数例数)临床分期床分期 DD3 mRNADD3 mRNA未治未治疗组 内分泌治内分泌治疗组 B B期期 100.0(1/1)100.0(1/1)0.00.0（0/20/2）C C期期 100.0(3/3)100.0(3/3)25.025.0（2/82/8）*D D期期 100.0(7/7)100.0(7/7)34.8(8/23)*34.8(8/23)*合合计 100.0(11/11)100.0(11/11)30.3(10/33)*30.3(10/33)*注：内分泌治注：内分泌治疗组与未治与未治疗组比比较，*P P0.050.05，*P P0.010.01巢式巢式RT-PCRRT-PCR4040.谢 谢!4141.资料可以编辑修改使用学习愉快！课件仅供参考哦，实际情况要实际分析哈！感感谢您的您的观看看