Agilent-1260LC液相色谱仪使用、维护保养规程.doc

Agilent 1260-LC液相色谱仪使用、维护操作规程

目 录
一、 目的 1
二、 适用范围 1
三、 内容 1
四、 附件 17
五、 变更历史 17

一、 目的
明确Agilent 1260 LC型液相色谱仪硬件使用、维护保养操作方法，使质量部检验人员有章可循。
二、 适用范围
本规程适用于公司Agilent 1260-LC型液相色谱仪使用、维护保养操作。
三、 内容
1. 制定依据
《Agilent 1260 LC system Operating Manual》
《Agilent OpenLAB Control Operating Manual》
2. 工作原理：
2.1. 高效液相色谱法是用高压输液泵，将具有不同特性的单一溶液或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，用泵压入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入色谱柱内，在色谱柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由色谱工作站进行记录处理。利用色谱图色谱峰面积或峰高大小可对待测样品进行定性定量分析。
Agilent 1260 LC型液相色谱仪主要由G1329B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G1316柱温箱、G4212B二极管阵列检测器和Open LAB色谱工作站等部件组成。
3. 基本操作步骤
3.1. 开机准备
3.1.1. 启动计算机：打开计算机电源，登陆windows操作系统。
3.1.2. 启动工作站：打开Agilent 1260LC各模块电源。待Agilent 1260LC各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击屏幕左下角“开始”，选择“所有程序”，选择”Agilent Technologies”选择“Open LAB”，选择OpenLAB Control,或单击桌面图标则会进入到上图的界面。上面步骤如果已经配置过，则不需要操作。
3.2. 仪器配置：
3.2.1. 通过点击菜单左上方的，可以分别创建位置和仪器，得到如下的界面：

3.2.2. 输入相关信息，注意仪器类型一栏要选择 Agilent LC System，输入完后点击确定。出现如下界面：

3.2.3. 选定刚刚创建的仪器名称，点击“配置仪器”，

3.2.4. 选择“配置模块”，注意不要选择“使用经典驱动程序”。如果仪器中包括 DAD、FLD，则需要选择“3D光谱评估”。点击确定。
3.2.5. 选择“是”，来配置仪器；
3.2.6. 选择IP地址，输入仪器IP，默认地址为 192.168.254.11。点击确定。

3.2.7. 系统会根据指定的 IP 地址来找到所配置的模块及其相关信息，点击确定。

3.2.8. 再次点击确定，使配置生效。

3.2.9. 点击“启动”或者“离线启动”来打开在线或离线工作站，也可点击“创建快捷方式”来生成。
3.3. 开启工作站：
3.3.1. 双击桌面图标，工作站打开，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选 择“方法和运行控制”。打开仪器控制视图：选择“视图>系统视图”，即可显示仪器控制视图，选择“视图>样品视图”，即可显示样品信息视图。

颜色说明：
颜色
位置
无色
黄色
绿色
红色
蓝色
灰色
模块右上角状态灯
未开电源或者模块准备就绪。
模块未准备就绪。
正在进样分析。
模块出错；所有模块红色，仪器有漏液。
—
—
工作站图形颜色
—
模块未准备就绪。
模块准备就绪。
出错或者不能联机。
正在进样分析。
此模块没启用。
3.3.2. 可将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏 ，系统会自动显示未就绪或出错的原因。
3.3.3. 配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中。设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形单击鼠标左键，出现图形如右图所示：点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积，也可设定低体积关泵。
3.3.4. 冲洗流动相管路：反时针旋开泵模块上的溶液排空阀（注：旋动半圈即可）。右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为3ml/min，四元泵应分别将A,B,C,D四个通道设置“溶剂”为 100%(点击右图中各个通道后面的方框，即可开启“%”设置框，输入需要设置的数值百分比后，单击右侧的空白框，A 相即可自动配置为100%-(%B+%C+%D)的百分比)，冲洗，冲洗时间为2～5min为宜。
3.3.5. 开启模块：鼠标右键点击每个模块的空白处都会弹出提示框，选择“控制” 即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模块。也可在仪器视图中选择“打开”， 监视基线：点击“视图>在线信号”打开“在线图谱”点击“改变”按钮，选择“可选信号”中需要监视的信号，“添加”到“选定信号中”。调整“窗口”中“X轴范围”，如需要画“0”点基线，请选择“画零线”。调整Y轴“Y轴范围”与“偏移量”或者选择“Y 轴自动调整”来选择合适的监视图形平衡色谱柱、进样分析：关闭溶液排空阀（确认泵流量：1ml/min），监视压力和信号基线等待平稳后，可以进样采集分析。
3.4. 建立全新完整方法向导：
3.4.1. 新建完整方法：选择“方法>新建方法”后，点击“方法>编辑完整方法”编辑新方法。
3.4.2. 选择“方法信息”、“仪器/采集”、“数据分析”,“数据分析”也可以在“数据采集后”后再加入方法中。
3.4.3. 写入方法注释，而后按照数据采集方法编 辑与数据分析方法编辑中所述内容，根据具体的仪器配置完成所有模块参数的设置。
3.4.4. 数据采集方法编辑：
a. 泵设置：设置泵右键点击泵模块视图空白处，选择“方法”或者点击进入泵的参数设置界面（如右图）。
在“压力限-上限”＞200 时，流速设置范围为：0～5.00ml/min；在“压力限-上限”≤200 时，流速设置范围为：0～10.00ml/min
Ø 停止时间—设置泵停止分析的时间，时间范围为：0.0～99999.00min或“无限制”
Ø 后运行时间—泵在后运行时间保持后运行状态，从而延迟下一个分析的开始。在溶剂成分改变后(如，在梯度洗脱后)，可以使用“后运行 时间”是色谱柱达到平衡，时间范围为：0.0～99999.00min或“无限制”。
Ø 压力限—“上/下限”是最大/小压力限制，达到“上限”或者“下限”值时，泵将自动关闭，从而防止分析系统压力超限（压力上限低于实际值时，设备会出现错误信息。）。
Ø 溶剂—溶剂B、C和D的百分比可以设置为 0 到 100%之间的任何值。“溶 剂 A”通常输送剩余的量：100%-(%B+%C+%D)。
Ø
Ø 时间表—通过在“时间”字段中输入时间并在时间表的以下字段中输入适当的值，可以使用时间表对分析过程中参数进行设置。泵时间表中的值随时间从初始值到时间表中定义的时间所对应的值发生线性变化（如，流速和压力最大限值）。
b. 泵的运行控制
右键点击泵模块视图空白处，选择“控制”进入泵的控制界面。（如右图）
Ø 泵—控制泵的“启动”，“关闭”或者“待机”状态。
Ø 泵密封垫清洗组件（Seal-Wash）—控制泵密封垫清洗蠕动泵的开关以及定期开关的程序。（运行周期一定要设置，不能长期运行，防止部件损坏。）
c. 设置自动进样器
右键点击进样器模块视图的空白处，选择“方法”后进入进样器的参数设置界面。（如右图）
Ø 标准进样—简单的进样，在“进样量”字段中制定进样量。进样量取决于自动进样器的配置设置（进样量为1～100μl）。
Ø 洗针进样—可以指定进样包括在抽取样品后，将针移动到针座之前进行针清洗，在“针清洗”字段中指定装有清洗溶剂的位置（瓶），清洗瓶应不加密封盖。
Ø 使用进样器程序—可以使用当前的进样器程序，将显示当前进样器程 序中的行数。选择“编辑”可以显示“进样器程序”，以进行编辑。
Ø 最优化—启用重叠进样，可适当减少运行时间。
d. 柱温箱设置：
右键点击柱温箱模块视图空白处，选择“方法”进入柱温箱的参数设置界面（如右图）
Ø 温度—控制柱温箱温度。限值：-5.0到80.0度。柱温箱只能冷却到比环境温度低 10度的温度。
Ø 停止时间—设置柱温箱停止分析的时间。一般设置为“与泵一致”即可。
Ø 时间表—此处可以变化的参数包括左右加热模块的温度。
e. 设置DAD参数：
右键点击DAD模块视图的空白处，选择“方法”进入 DAD 的参数设置界面（如右图）
Ø 信号—样品：检测到的样品吸光度所对应的波长。参比波长对应的吸光度将从样品波长对应的吸光度中扣除；带宽：样品波长的带宽。带宽决定了检测吸光度的波长范围通常小于20nm，如，样品波长为254nm，样品带宽为20nm，则从244～264nm的波长范围检测吸光度；参比：参 比吸光度对应的波长。参比波长可以补偿由于基线吸光度中的变化(如，由于梯度洗脱中溶剂组成的变化)而引起的波动；带宽：参比波长的带宽通常设定为小于100nm。二极管阵列检测器可以存储8个信号
Ø 停止时间—设置DAD停止分析时间。一般设置为“与泵一致”即可。
Ø 光谱—存储：定义了在信号A上提取并保存光谱的点。“无”，未提取光谱；“顶点+基线”，在风的顶点和基线处提取光谱；“顶点+斜率+基线”，在峰的顶点、基线、上升斜率和下降斜率提取光谱；“峰中的全部”，提取峰内的所有光谱；“每个一条光谱”，选择“全部”，将连续提取光谱，但是只每个一条光谱存储一条光谱，其他光谱将被弃用，这样可以减少必要的数据存储量；“全部”，根据“峰宽”设置连续提取光谱。每个峰宽采集八条光谱，一条光谱的采集时间略少于峰宽除以8，即大于或者等于0.01s且小于或等于2.55s
Ø 范围—定义光谱存储的波长范围。从190nm到950nm
Ø 步长—定于光谱存储的波长分离度。从0.10nm到100.00nm
Ø 阈值—预期的最小峰高度。峰检测器忽略低于阈值的所有峰且不保存光谱。限值：0.001到1000.00mAU，步长为 0.001mAU
Ø 狭缝—设置检测器的光学带宽；狭缝越窄，仪器的光学带宽就越小，但其灵敏度也越低。光学带宽越小，光谱的分离度就越高。
Ø 温度控制—二极管阵列检测器的光学设备的温度控制。保持光学设备在一个恒定的温度可以提高不稳定高温环境下的基线稳定性。
Ø 时间表—DAD中可改变的参数包括自动平衡、更改信号、更改阈值、更 改峰宽、更改光谱采集模式。
3.5. 方法的保存与调用
3.5.1. 保存方法：选择“方法>保存方法/方法另存为”
3.5.2. 保存即时改变的方法：通过在线改变数据采集或者在线/离线改变数据分析参数而变更方法，可以通过选择“方法>保存方法/方法另存为”或者保 存新的参数到现在的方法中或者另存为新方法
3.5.3. 调用方法：通过选择“方法->调用方法”或者 调用已有的方法。方法调用后便立即生效。
3.6. 进样设置 ：
3.6.1. 单针进样：选择“运行控制>样品信息”。查看单针，点击。
Ø 路径—选择数据文件存储路径；
Ø 选择手动或者前缀/计数器—命名数据文件名；
Ø 样品位置—设置样品位置，直接填写数字即可，不需要写“样品瓶”；
Ø 运行方法—保存样品信息并运行方法；
Ø 确定—保存样品信息，后“运行控制->运行方法”；
3.6.2. 序列进样：
Ø 利用自动进样器自动批量进样。查看序列，点击
Ø 选择“序列>序列参数”
设置数据路径如右图：
Ø 在调用新方法后等待—序列进样时更改某个样品方法后平衡色谱柱时间。
Ø 后序列命令/宏—在运行序列后运行命令：
LAMPALL OFF—关闭检测器灯；PUMPALL OFF—关闭泵;
STANDBY—系统待机; SHUTDOWN.MAC—关闭系统
Ø 选择“序列>序列表”

² 样品瓶—填写样品瓶位置；
² 样品名称—填写样品名称；
² 方法名称—点击，出现下拉框，选择方法
² 进样次数/瓶—填写每个样品瓶进样次数；
² 样品类型—选择样品类型：样品，标准样品、控制样品(一般选样品)
² 校正级别—在选择标准样品后，填写此瓶标准样品的校正级别；
² 进样量—如空缺则为自动进样器设置进样量；
² 确定—保存样品信息，后“运行控制->运行序列”；
² 保存序列模板：选择“序列->保存序列模板/序列模板另存”或者
² 调用序列模板：选择“序列->调用序列模板“或者
Ø 序列运行—选择“序列>运行序列”，按设定的仪器、序列参数进行分析。
3.7. 数据分析方法编辑：
3.7.1. 从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面或双击桌面进行“数据分析”界面。从“文件”菜单 中选择“调用信号”选项，选中您的数据文件名，点击确定，数据被调出。
3.7.2. 谱图优化：
·从“图形”菜单中选择“信号选项”，如右图所示：从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的显示时间或选择“自定义量程”手动输入X、Y坐标范围进行调整，点击“确定”。反复进行，直到图的显示比例合适为止。选中化合物的名称前的空白框，选择“图形>新建标注”或者点击即可在工作站窗口右边打开图形。
编辑菜单如右图所示，可以在色图谱中任意位置添加文字、图形等内容选择“图形>信号选项”中选择“化合物名称”即可将命名的化合物名 称添加到当前的色谱图中
3.7.3. 积分参数优化:
自动积分方法，从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的 “斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。点击左边图标，将积分参数存入方法，点击 为不保存退出。点击 进行积分，点击 则 由工作站自动查找适合当前谱图的积分参数积分。最后，选择“方法>保存方法/方法另存为”或者按下 保存数据分析方法
手动积分方法，选择“积分->积分事件”或点击 >，选择“手动积分事件”，如需更改，更改自动积分方法后，按保存并关闭“积分事件”。按 删除指定峰，选择(手动积分：绘制峰基线并积分；手动积分：绘制负峰的基线并积分；手动积分：切线撇去一个峰并积分；手动积分：手动分裂已积分的峰)对峰进行手动积分。手动积分完成后可以点击 撤销上一步操作或者点击撤销所有操作，修改完成后，按保存。
3.7.4. 校正：为“标准样品”建立校正曲线(工作曲线/标准曲线)
注意：在色谱图正确积分后才可进行校正。
a. 设置校正设置：从“文件”菜单中选择“调用信号”选项，选中您的标样数据文件名，点击确定，数据被调出。选择“校正>校正设置”或者点击>设置校正参数。
Ø 参考峰/其他峰—分钟栏留空，修改“%”以改变确认保留时间范围内 的峰都被认为是参考/其他峰。
Ø 含量单位—填写样品含量单位 选择缺省校正曲线方法，“确定”退出。
b. 建立校正表：选择“校正>新建校正表”或者点击。出现“新建校正表”菜单，“确定”即可。出现“校正表”表格，在图谱中选择需要校正的色谱峰，后在表格中“化合物”中填写化合物名称，“含量”中填写色谱峰对应物质含量。右侧“校正曲线”即可实时更新校正曲线图，并标注RSD和相关系数。“确定”保存退出。最后，选择“方法>保存方法/方法另存为”或者按下保存数据分析方法。

Ø 添加校正级别：调用新的标样数据文件后，选择“校正->添加级别”或者点击 ，如上述方法添加新的校正级别。
Ø 添加校正峰：调用新的标样数据文件选择需要添加的峰后，选择“校正>添加峰”或者点击 ，在“添加峰”的菜单中填写需要添加到校正 表中那个级别，含量即可将峰添加到校正表中，保存方法即可 通过“添加峰”可以将不同色谱图中需要校正的峰添加到同一个校正表中，保存在同一个方法文件里。
Ø 打印带校正表的报告：选择“报告>设定报告”，在“定量设置”中的 计算模式一栏选定“外标法”，“报告设置”为“完整报告”后，打印 报告即可在“视图>信号选项”中选择“化合物名称”即可将命名的化合物名称添加到打印的色谱图中。

3.8. 打印报告:
·选择“报告>设定报告”选项，进入如下画面。点击“定量结果”框中 “定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变。选择“类型”，点击“确定”

从“报告”菜单中选择“打印”或者点击 ，则报告结果将打印到屏幕上。如想输出到打印机上，则在上图中左下角“目标”处，将打印机选上。若要生成其他格式的报告，则选定“文件”，然后选择相应的格式即可。
·在方法菜单中，选择“运行时选项表”，确认“数据分析选项”也被选中，点击“确定”。点击“保存”按钮，存储修改的方法。此方法包含校准表，建立完毕。
3.9. 光谱：
3.9.1. 查看光谱：从“文件”菜单中选择“调用信号”选项，选中您的数据文件名，点击确定，数据被调出。选择“光谱->”“选择光谱”：通过游标定位到信号中的任何位置，显示一个光谱；“选择峰顶点光谱”( )： 选择峰顶点强度最高的光谱；

3.9.2. 选择平均光谱”()：得到峰中许多光谱的平均光谱；“选择峰光谱”： 选择并显示峰光谱的峰组中所有光谱或者点击 。
选择“光谱->选择参比光谱 1/2”或点击：可以补偿流动相和基质化合物光谱吸收所带来的影响。可以选择两个参比光谱，在每个选 定光谱的这些时间段内内插参考光谱。
3.9.3. 查看等吸收图：选择“光谱->等吸收线图”可以查看当前色谱图的2D吸收等高谱图。
3.9.4. 查看3D图：选择“光谱->3D 图”可以查看当前色谱图的3D吸收全扫描图。
3.9.5. 峰纯度检查：选择“光谱->选择峰纯度”或点击 后，在选择待考察 峰，显示峰纯度图形报告。

Ø 如果峰的纯度值大于设定的纯度阈值，则色谱图中会用绿色框标记此峰，否则为红色框。
Ø 查看峰的峰纯度信息：在色谱图中选中要查看峰纯度的峰，点击 按 钮，弹出峰的峰纯度信息。在“峰光谱”中可以查看“差异”、“比较”、 “参比”等光谱图
Ø 查看选定峰的光谱图：点击 按钮，可以查看选定峰的等吸收线图或者3D图。

3.9.6. 使用谱库搜索：
Ø 建立谱库 选择“光谱>谱库>新建谱库”，保存谱库在任意文件夹(默认为：c:\chem32\speclibs)。填写“谱库表头”信息 ，后选择“光谱->保存谱库/谱库另存为”或者添加条目 选择需要添加的色谱峰，出现此峰光谱图， 选择“光谱->添加条目”或者 ，编辑相应物质名称等信息内容。选择“编辑波表”，打开“波表编辑器”，选择“自动”。如需要添加或者替换、删除请选择相应按钮编辑，“确定”保存退出。点击“添加” 将此条目添加到库中，“确定”保存退出。
Ø 管理条目 选择“光谱>谱库>管理条目”或者 。选择需要编辑的 物质信息条目进行编辑。
Ø 打开谱库 选择“光谱>谱库>打开谱库”或者 打开需要的谱库。
Ø 编辑检索模板 选择“光谱>谱库>编辑检索模板”或者 。在“左 窗口”与“右窗口”设置认定峰保留时间范围，“阈值”设置一下的峰 将被忽略，“确定”保存退出。
Ø 库检索 打开需要检索的色谱图数据，打开谱库。选择色谱图中需要检 索的峰，选择“光谱->谱库->检索光谱”或者 ，将出现“光谱偏差”图和“谱库检索结果”报告。匹配度范围从0到1000。
3.10. 关机
3.10.1. 关闭检测器的灯：分析完成后，可先关闭检测器的灯后再冲洗系统，可以延长检测器灯的寿命。
3.10.2. 冲洗系统：没有盐缓冲溶液的流动相，(反相系统)用85%～90%有机相+15%～10%水相冲洗系统和反相色谱柱或者适宜的流动相冲洗系统和反相色谱柱。有盐缓冲溶液的流动相，（反相系统）用85%～90%水相+15%～10%有机相 冲洗系统和反相色谱柱（反相系统），除去反相色谱柱与系统中的盐溶液。然后用85%~90%有机相+15%~10%水相冲洗系统和反相色谱柱。
3.10.3. 封存色谱柱：（反相系统）用 90%～95%有机相+10%～5%水相封存反相色谱柱，两端封死。（如长时间存放可将柱子完全浸泡有机相中，以防用纯有机相封存反相色谱柱，如果长期保存有机相会挥发）。
3.10.4. 关闭电脑：将泵流速逐步降至0ml/min，单击“关闭”按钮关闭所有模块，退出 化学工作站，关闭电脑。
3.10.5. 关闭模块：关闭所有模块电源开关
4. Agilent 1260 常见问题解决方法
4.1. 工作站无法联机：
确认打开 Agilent 1260 LC所有模块电源查看Agilent 1260网卡地址，如果使用bootp程序，请查看仪器配置中IP设 置，如果未使用bootp程序，通常仪器默认地址为：192.168.254.11
.查看电脑网卡地址，"开始->控制面板->网络连接"，双击"本地连接"，单击 “属性”，双击"Internet协议4(TCP/IP) "，选择“使用下面得IP地址”， 填入"IP地址"如：192.168.254.10，"子网掩码"：255.255.255.0。请将IP 地址与Agilent 1260的IP地址前9个数字设为一样，后一位设为1~254之间， 但不与Agilent 1260网卡地址相重复即可。
4.2. 改变数据、序列和方法存储路径：
选择“视图->首选项”或者 ，打开“首选项”设置。点击“添加”，将 已建好的新的存储路径添加到“序列路径”、“数据路径”和“方法路径” 中，“确定”保存。在“运行控制->样品信息”或者“序列->序列参数”中 即可出现新的路径选项
4.3. 菜单显示不完全：
选择“视图->全部菜单
4.4. 2D等吸收线/3D 光谱图无法显示全部分析时间：
选择“光谱>等吸收线/3D图选项”，删除“显示”中“时间”中的数值。
4.5. 调整峰纯度报告样式：
选择“光谱->光谱选项”，打开“光谱选项”菜单，选择“纯度->高级”，在“纯 度计算”里面根据需要选择“类似曲线显示为”：Ln(相似性和阈值)；相似性/ 阈值；纯度比率，将显示不同的纯度报告样式
如何将“峰纯度”和“库检索”结果自动生成报告：选择“视图>报告版面设计”或右图进入报告版面设计界面。选择“文件>打开模板”或者，打开“LIBRARY_CHS”模板，选择“文件>添加到报告模式中”，输入报告格式名称后，将“库检索”和“峰纯度”模板添 加到“数据分析>报告>设定报告”中。选择“报告>自动检索谱库”，设定需要检索的谱库以及检索参数以及峰纯度阈值后“确定”保存退出。选择需要的色 谱数据，选择报告类型为刚添加入“报告格式”中的名字，打印报告即可。
5. Agilent 1260 LC维护知识
5.1. 溶剂和样品注意事项：溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内 的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
5.2. 在线Seal-wash注意事项：HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲 盐结晶。缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项. 清洗液配制:90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力，不能干涸。注意：Seal-wash不能长期运行，应设置运行周期（如2min,运行0.2min），防止电机损坏。
5.3. 溶剂过滤器注意事项： 溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液 或磷酸盐缓冲液（PH=4-7）。以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。
请严格A:执行溶剂过滤。B：请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液 C：如果应用许可，可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠. D:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气。 E：避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐 缓冲液。
5.4. Agilent 1260LC泵维护：日常使用中至少应作到以下几点：A:流动相使用前请必须脱气、过滤。B：使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash选项。C：关机前，用相应的溶剂充分冲洗系统。D：及时更换Purge Valve内的过滤芯。（当打开Purge Valve时，压力高于10bar，表明过滤芯有堵塞）。
5.5. 使用梯度比例阀时注意事项：当盐溶液与有机溶剂溶液混合时，盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶，而不会出现沉淀。但是在比例阀的混合点，重力作用使盐颗粒沉淀下来，通常，阀A接水相/盐溶液，D接有机溶剂，此法连接可有效使盐回落到盐溶液中，并被溶解。若颠倒过来，盐可能落在有机溶剂中，出现问题。强烈建议：当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时，推荐将缓冲盐通道接在A通道上，有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水冲洗所有的通道，以除去阀口上可能出现的盐沉淀。
5.6. 更换色谱柱注意事项：在使用HPLC时，应特别注意柱外效应对分析结果的影响，由于样品分子在液体流 动相中的扩散系数比在气体中小4～5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，仪器的流动相管路连接非常重要，当接不同的柱子时，要注意柱子接头处的形状和长度，否则会产生一个非常大的死体积
四、 附件
无
五、 变更历史
变更前版本号
变更后版本号
变更原因
变更批准日期
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