HPV分型在宫颈癌检测中的意义.ppt

HPVHPV分型在宫颈癌检测中的意义分型在宫颈癌检测中的意义 宫颈癌宫颈癌全球聚焦全球聚焦世界范围世界范围世界范围世界范围国际癌症研究所（国际癌症研究所（国际癌症研究所（国际癌症研究所（IARCIARCIARCIARC）统计）统计）统计）统计n全球每年有全球每年有5050万宫颈癌新发病例，万宫颈癌新发病例，28.828.8万死亡病例万死亡病例n其中其中83%83%发生于非洲、拉丁美洲和亚洲发生于非洲、拉丁美洲和亚洲等发展中国家等发展中国家n5050的病例发生在亚洲的病例发生在亚洲v宫颈癌成为宫颈癌成为发展中国家妇女健康和生命的发展中国家妇女健康和生命的“头号杀手头号杀手”v宫颈癌的发病趋于年轻化，发病年龄一般在宫颈癌的发病趋于年轻化，发病年龄一般在40-6040-60岁岁v20062006年世界卫生组织指出：如不采取措施，未来年世界卫生组织指出：如不采取措施，未来1010年内因子宫颈癌年内因子宫颈癌导致的死亡病例将上升导致的死亡病例将上升25%25%宫颈癌防治已成为全球关注的公共卫生问题！宫颈癌防治已成为全球关注的公共卫生问题！宫颈癌防治已成为全球关注的公共卫生问题！宫颈癌防治已成为全球关注的公共卫生问题！宫颈癌宫颈癌中国关注中国关注v宫颈癌预防已纳入国家医改、重大公共卫生项目和十一宫颈癌预防已纳入国家医改、重大公共卫生项目和十一五国家重大支撑计划五国家重大支撑计划vv2006200620062006年中央财政转移支付年中央财政转移支付年中央财政转移支付年中央财政转移支付6 6 6 6个省个省个省个省6 6 6 6个亿的宫颈癌筛查个亿的宫颈癌筛查个亿的宫颈癌筛查个亿的宫颈癌筛查vv2009200920092009年，卫生部启动两癌（宫颈癌和乳腺癌）筛查项目年，卫生部启动两癌（宫颈癌和乳腺癌）筛查项目年，卫生部启动两癌（宫颈癌和乳腺癌）筛查项目年，卫生部启动两癌（宫颈癌和乳腺癌）筛查项目计划：计划：计划：计划：2009-20112009-20112009-20112009-2011年在全国约年在全国约年在全国约年在全国约200200200200个县对个县对个县对个县对1000100010001000万名妇女进万名妇女进万名妇女进万名妇女进行宫颈癌检查行宫颈癌检查行宫颈癌检查行宫颈癌检查宫颈癌与宫颈癌与HPVHPV昨日回眸昨日回眸vv1977197719771977年，年，年，年，LavertyLavertyLavertyLavertyn在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在HPVHPV颗粒颗粒vv80808080年代，年代，年代，年代，Harald zur HausenHarald zur HausenHarald zur HausenHarald zur Hausenn首先报告首先报告HPVHPV与子宫颈癌间的相关性与子宫颈癌间的相关性vv随后，大量研究及流行病学资料显示随后，大量研究及流行病学资料显示随后，大量研究及流行病学资料显示随后，大量研究及流行病学资料显示n几乎几乎100%100%子宫颈癌和子宫颈癌和95%95%以上宫颈高度以上宫颈高度病变中病变中HPV DNAHPV DNA检测阳性检测阳性vv1995199519951995年，国际癌症研究机构年，国际癌症研究机构年，国际癌症研究机构年，国际癌症研究机构 (IARC)(IARC)(IARC)(IARC)专题讨论会专题讨论会专题讨论会专题讨论会nHPVHPV感染是宫颈癌的主要原因，即感染是宫颈癌的主要原因，即HPVHPV感感染是宫颈癌发生的必要条件染是宫颈癌发生的必要条件宫颈癌与宫颈癌与HPVHPV昨日回眸昨日回眸vv2008200820082008年，年，年，年，Harald zur HausenHarald zur HausenHarald zur HausenHarald zur Hausen获获获获诺贝尔生理学或医学奖诺贝尔生理学或医学奖诺贝尔生理学或医学奖诺贝尔生理学或医学奖nHPVHPV与宫颈癌的关系的明确与宫颈癌的关系的明确宫颈癌成为目前癌宫颈癌成为目前癌症中：症中：唯一病因明确唯一病因明确 唯一可以早期唯一可以早期预防和治疗预防和治疗 唯一可以彻底唯一可以彻底根除的癌症根除的癌症 HPV HPV病毒学病毒学HPVHPVHPVHPV是一组病毒的总称是一组病毒的总称是一组病毒的总称是一组病毒的总称n n小环状双链小环状双链小环状双链小环状双链DNADNADNADNA病毒，约病毒，约病毒，约病毒，约8kb8kb8kb8kbn n颗粒直径为颗粒直径为颗粒直径为颗粒直径为5050505055nm55nm55nm55nm，无包膜，无包膜，无包膜，无包膜n n在自然界中稳定性好在自然界中稳定性好在自然界中稳定性好在自然界中稳定性好n n在人和动物中分布广泛在人和动物中分布广泛在人和动物中分布广泛在人和动物中分布广泛n n有较高的种依赖性有较高的种依赖性有较高的种依赖性有较高的种依赖性n n具有嗜上皮性，在基底层细胞中潜伏具有嗜上皮性，在基底层细胞中潜伏具有嗜上皮性，在基底层细胞中潜伏具有嗜上皮性，在基底层细胞中潜伏n n在鳞状上皮细胞中复制、转录和翻译、增殖在鳞状上皮细胞中复制、转录和翻译、增殖在鳞状上皮细胞中复制、转录和翻译、增殖在鳞状上皮细胞中复制、转录和翻译、增殖 HPV HPV基因结构基因结构HPV16早期区（早期区（E E区）区）含含6 6个基个基因，因，是维持病是维持病毒复制、毒复制、编码病毒编码病毒蛋白、维蛋白、维持细胞内持细胞内病毒高拷病毒高拷贝数的基贝数的基因因晚期区（晚期区（L L区）区）含两个结构蛋白含两个结构蛋白最保守的区域最保守的区域长长 控控 制制 区区（L LC CR R）E6E6 通通过过抑抑制制p53p53而而阻断凋亡阻断凋亡E7E7 通通过过抑抑制制pRBpRB使使细胞细胞周期失控周期失控E2E2：负负性性调调节节E6E6和和E7E7，维维持持凋凋亡亡和和细细胞胞周周期的调控。期的调控。病病毒毒整整合合时时会会破破坏坏E2E2基基因因的的结结构构，导导致致失失活活E4E4：结结合合并并破破坏坏中中表表层层细细胞胞角角蛋蛋白白网网，形形成成中中表表层层细细胞胞的挖空外观的挖空外观L2:L2:次要衣次要衣壳蛋白壳蛋白抗体主要抗体主要识别位点识别位点L1:L1:主要衣主要衣壳蛋白，壳蛋白，疫苗研发的疫苗研发的主要成分主要成分 HPV HPV病毒分类病毒分类 以病毒基因组中以病毒基因组中L1L1区区DNADNA同源性作为分类依据：同源性作为分类依据：n属：属：L1L1区区DNADNA同源性在同源性在60%60%以下以下n n种：种：种：种：L1L1区区DNADNA同源性介于同源性介于60%70%60%70%n n型：型：型：型：L1L1区区DNADNA同源性介于同源性介于7171%89%89%n n亚型：亚型：亚型：亚型：L1L1区区DNADNA同源性介于同源性介于9090%98%98%n n变异株：变异株：变异株：变异株：L1L1区区DNADNA同源性大于同源性大于98%98%HPV HPVHPV分型分型vv目前，已发现超过目前，已发现超过目前，已发现超过目前，已发现超过200200200200种人乳头瘤病毒（种人乳头瘤病毒（种人乳头瘤病毒（种人乳头瘤病毒（HPVHPVHPVHPV）vv依据与生殖道肿瘤相关性，将依据与生殖道肿瘤相关性，将依据与生殖道肿瘤相关性，将依据与生殖道肿瘤相关性，将HPVHPVHPVHPV分为：分为：分为：分为：n n高危型高危型高危型高危型 与宫颈癌及宫颈病变密切相关，如与宫颈癌及宫颈病变密切相关，如与宫颈癌及宫颈病变密切相关，如与宫颈癌及宫颈病变密切相关，如16161616、18181818、31313131、33333333、35353535、39393939、45454545、51515151、52525252、56565656、58585858、59595959、68686868、73737373、82828282等等等等n n疑似高危型疑似高危型疑似高危型疑似高危型 与宫颈癌有一定的相关性，但由于在人群中的分布频与宫颈癌有一定的相关性，但由于在人群中的分布频与宫颈癌有一定的相关性，但由于在人群中的分布频与宫颈癌有一定的相关性，但由于在人群中的分布频率较低或相关研究数据较少，需进一步研究确认，如率较低或相关研究数据较少，需进一步研究确认，如率较低或相关研究数据较少，需进一步研究确认，如率较低或相关研究数据较少，需进一步研究确认，如26262626、53535353、66666666等等等等n n低危型低危型低危型低危型 常引起外生殖道湿疣等良性病变，比如常引起外生殖道湿疣等良性病变，比如常引起外生殖道湿疣等良性病变，比如常引起外生殖道湿疣等良性病变，比如6 6 6 6、11111111、40404040、42424242、43434343、44444444、54545454、61616161、70707070、72727272、81818181、candHPV89candHPV89candHPV89candHPV89等等等等 HPV HPV型别分布型别分布vv2009-2012.52009-2012.52009-2012.52009-2012.5，全国，全国，全国，全国35353535万数据（凯普万数据（凯普万数据（凯普万数据（凯普21212121分型）分型）分型）分型）n n阳性率：阳性率：阳性率：阳性率：24.6%24.6%24.6%24.6%（门诊）（门诊）（门诊）（门诊）HPV HPV型别分布型别分布vv2009-2012.52009-2012.52009-2012.52009-2012.5，广东省妇幼保健院，广东省妇幼保健院，广东省妇幼保健院，广东省妇幼保健院9.79.79.79.7万数据（凯普万数据（凯普万数据（凯普万数据（凯普21212121分型）分型）分型）分型）n n阳性率：阳性率：阳性率：阳性率：23.6%23.6%23.6%23.6%（门诊）（门诊）（门诊）（门诊）HPV引发的癌症引发的癌症 HPV HPVHPVHPV与宫颈癌与宫颈癌感染途径感染途径vv性接触传播性接触传播性接触传播性接触传播n n丈夫阴茎丈夫阴茎丈夫阴茎丈夫阴茎HPVHPVHPVHPV的存在可使妻子宫颈受染的危险增加的存在可使妻子宫颈受染的危险增加的存在可使妻子宫颈受染的危险增加的存在可使妻子宫颈受染的危险增加9 9 9 9倍，相同的倍，相同的倍，相同的倍，相同的HPVHPVHPVHPV型别可以在性伴侣中检出，与此相反，处女通常是检测不到型别可以在性伴侣中检出，与此相反，处女通常是检测不到型别可以在性伴侣中检出，与此相反，处女通常是检测不到型别可以在性伴侣中检出，与此相反，处女通常是检测不到HPVHPVHPVHPV感染感染感染感染vv直接皮肤接触直接皮肤接触直接皮肤接触直接皮肤接触n n这也是主要的传播途径这也是主要的传播途径这也是主要的传播途径这也是主要的传播途径vv母婴传播母婴传播母婴传播母婴传播n n母亲生殖道母亲生殖道母亲生殖道母亲生殖道HPVHPVHPVHPV感染也可以传播至她们的婴儿口腔中感染也可以传播至她们的婴儿口腔中感染也可以传播至她们的婴儿口腔中感染也可以传播至她们的婴儿口腔中HPVHPV与宫颈癌与宫颈癌HPV的入侵的入侵病毒通病毒通过皮肤或粘膜的微皮肤或粘膜的微创口口进入表入表层，然后感染基底，然后感染基底层或副基底或副基底层细胞，并以附加胞，并以附加体的形式在宿主体的形式在宿主细胞核内复制。胞核内复制。病毒的复制依病毒的复制依赖于上皮于上皮细胞的分化，在基底胞的分化，在基底层上上层细胞中开始复制，在表皮胞中开始复制，在表皮细胞中装胞中装配，当配，当这些表皮些表皮细胞脱落胞脱落时，在皮肤表面可，在皮肤表面可发现病毒病毒颗粒。粒。HPVHPV与宫颈癌与宫颈癌细胞、组织的改变细胞、组织的改变一过性一过性HPV感染感染持续性持续性HPV感染感染正常正常宫颈宫颈感染感染清除清除HPV 感染感染演进演进消退消退癌癌前前病病变变癌癌浸浸润润 HPVHPV与宫颈癌与宫颈癌影响因子影响因子vv树木的成长（宫颈癌的发生）树木的成长（宫颈癌的发生）树木的成长（宫颈癌的发生）树木的成长（宫颈癌的发生）=种子种子种子种子(高危高危高危高危HPV)+HPV)+HPV)+HPV)+土壤土壤土壤土壤(未成熟的宫颈转化区化生上皮未成熟的宫颈转化区化生上皮未成熟的宫颈转化区化生上皮未成熟的宫颈转化区化生上皮)+)+)+)+cofactorscofactorscofactorscofactorsn多个性伴侣多个性伴侣n口服避孕药口服避孕药nHIVHIV、STISTI感染感染n免疫缺陷免疫缺陷n多产、密产多产、密产n吸烟等吸烟等宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查筛查现状筛查现状宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查筛查对象筛查对象v所有女性应在有性生活所有女性应在有性生活3 3年开始做宫颈癌筛查年开始做宫颈癌筛查 （最晚不超过（最晚不超过2121岁）岁）2009.1 NCCN2009.1 NCCN子宫颈癌筛查临床实践指南子宫颈癌筛查临床实践指南 20032003卫生部卫生部宫颈癌筛查及早诊早治指南宫颈癌筛查及早诊早治指南v高危妇女人群：多个性伴侣、性生活过早、高危妇女人群：多个性伴侣、性生活过早、HIV/HPVHIV/HPV感染、感染、免疫功能低下、卫生条件差免疫功能低下、卫生条件差/性保健知识缺乏的妇女性保健知识缺乏的妇女v决定妊娠的妇女决定妊娠的妇女宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查技术的发展技术的发展1943年巴氏涂片应用于宫颈癌的筛查年巴氏涂片应用于宫颈癌的筛查1988年年TCT应用于宫颈癌的筛查应用于宫颈癌的筛查2003年高危年高危HPV(HC2)应用于宫颈癌的筛查应用于宫颈癌的筛查(辅助辅助)2004年中国指南年中国指南HPV+TCT为最佳宫颈癌筛查手段为最佳宫颈癌筛查手段2007年欧洲年欧洲EUROGIN 推荐推荐HPV作为宫颈癌筛查首选手作为宫颈癌筛查首选手段段2011年年HPV分型检测是国际公认最重要的宫颈癌筛查手分型检测是国际公认最重要的宫颈癌筛查手段段2005年年IARC/WHO推荐推荐HPV检测可以用于宫颈癌筛检测可以用于宫颈癌筛查查2006年年HPV分型检测（凯普）应用于宫颈癌筛查分型检测（凯普）应用于宫颈癌筛查宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查巴氏涂片的应用巴氏涂片的应用v对妇女健康作出很大贡献对妇女健康作出很大贡献v局限性局限性:取样误差取样误差 /制片误差制片误差 /读片误差读片误差v敏感性差、假阴性率高（敏感性差、假阴性率高（2%50%2%50%）、假阳性率高、漏诊多）、假阳性率高、漏诊多v可重复性差，受阅片人主观影响可重复性差，受阅片人主观影响正常正常高度病变高度病变HSIL低度病变低度病变LSIL癌变癌变Cancer宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查TCT的应用的应用v准确性准确性97%97%v敏感度低，敏感度低，尤其是腺体病变尤其是腺体病变v重复性差，没有改变传统的重复性差，没有改变传统的阅片方式，与人为主观因素阅片方式，与人为主观因素相关相关vv无法预测患病的风险性无法预测患病的风险性无法预测患病的风险性无法预测患病的风险性宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查HPV DNA检测检测细胞学胞学检测HPV DNAHPV DNA检测对细胞形态改变的检查手段对病原体检查手段针对结果，评估临床阶段针对病因，评估发病风险敏感性相对稍低敏感性高方法不易质控方法易于质控宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查有充足的证据表明：有充足的证据表明：HPV DNAHPV DNA检测可作为检测可作为子宫颈癌的初筛手段，子宫颈癌的初筛手段，并可以降低子宫颈癌并可以降低子宫颈癌的发病率和死亡率。的发病率和死亡率。-IARC/WHO-IARC/WHO，20052005HPV检测为首选检测为首选宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查HPV+TCT的应用的应用欧洲生殖道感染和肿瘤组织（欧洲生殖道感染和肿瘤组织（EUROGIN)2007EUROGIN)2007年提出的宫颈癌筛查方案年提出的宫颈癌筛查方案宫颈癌的筛查宫颈癌的筛查HPV分型的应用分型的应用HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于区分一过性感染或持续性感染区分一过性感染或持续性感染n n只有两次检测属于同一基因型才能确认为只有两次检测属于同一基因型才能确认为只有两次检测属于同一基因型才能确认为只有两次检测属于同一基因型才能确认为HPVHPVHPVHPV持续性持续性持续性持续性感染感染感染感染n n只有高危型持续性感染才是宫颈癌发生的必要条件只有高危型持续性感染才是宫颈癌发生的必要条件只有高危型持续性感染才是宫颈癌发生的必要条件只有高危型持续性感染才是宫颈癌发生的必要条件HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于区分单一感染或多重感染区分单一感染或多重感染n早期的文献报道，早期的文献报道，HPVHPV的多重感染与宫颈癌直接相关的多重感染与宫颈癌直接相关n现在越来越多的报道发现，现在越来越多的报道发现，HPVHPV的多重感染与宫颈癌之的多重感染与宫颈癌之间，不存在显著性的关系间，不存在显著性的关系n不同型别的致癌风险不同不同型别的致癌风险不同不同的高危型促进不同的高危型促进LSILLSIL向向SCCSCC转变的转变的能力有差异。能力有差异。HPV16HPV16，18 18 的致宫颈的致宫颈癌风险性大于其他高危型癌风险性大于其他高危型HPVHPV。HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于阴道镜适应征阴道镜适应征HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于阴道镜适应征阴道镜适应征n20092009年，美国阴道镜和宫颈病理学会（年，美国阴道镜和宫颈病理学会（ASCCPASCCP）发布了）发布了HPV HPV 基因分型检测指南，明确指出基因分型检测指南，明确指出:30:30妇女，细胞学未见上皮妇女，细胞学未见上皮内病变和恶性细胞，内病变和恶性细胞，HPV16HPV16HPV16HPV16，18181818建议阴道镜建议阴道镜建议阴道镜建议阴道镜;其他其他HPVHPV高危型，高危型，则在则在1212个月后重复个月后重复HPV DNAHPV DNA检测和细胞学检查。检测和细胞学检查。（American American Society for Colposcopy and Cervical Pathology,2009Society for Colposcopy and Cervical Pathology,2009）n20102010年，杨英捷、赵健、毕蕙等人的研究数据表明，年，杨英捷、赵健、毕蕙等人的研究数据表明，HPV31HPV31、3333的的致癌风险也很高，建议致癌风险也很高，建议HPV31HPV31、3333直接行阴道镜检测直接行阴道镜检测HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于ASCUSASCUS分层管理分层管理 NCCN NCCN 子宫颈癌筛查临床实践指南子宫颈癌筛查临床实践指南(源自英文版源自英文版V1V12009)2009)指出：指出：对发生在成年人的对发生在成年人的ASC-US&LSILASC-US&LSIL有有3 3个可供选择的方案，可选择个可供选择的方案，可选择HPV-HPV-DNADNA检测将患者分流、检测将患者分流、6 6个月复查细胞学或立即阴道镜检查。个月复查细胞学或立即阴道镜检查。n直接阴道镜检查或多点病理活检，引起直接阴道镜检查或多点病理活检，引起创伤和过度诊治（创伤和过度诊治（40-60%40-60%）n重复细胞学检查，有重复细胞学检查，有25%25%失访率，此外复失访率，此外复检会增加病人经济及精神负担检会增加病人经济及精神负担nHPVHPV检测：为检测：为目前的最优方法目前的最优方法。HPVHPV检测检测阴性，可列入常规筛查人群；如阴性，可列入常规筛查人群；如HPVHPV检测检测阳性，则考虑配合阴道镜检查阳性，则考虑配合阴道镜检查HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于宫颈病变的随访宫颈病变的随访 宫颈病变治疗后失败的主要原因是同一基因型宫颈病变治疗后失败的主要原因是同一基因型HPVHPV的持续性感染的持续性感染n社会因素：家族性遗传社会因素：家族性遗传n特性：宫颈解剖结构特性：宫颈解剖结构HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于宫颈病变的随访宫颈病变的随访HPVHPV分型检测分型检测临床应用临床应用vHPVHPV分型检测用于分型检测用于指导疫苗的开发指导疫苗的开发n针对针对衣壳蛋白（衣壳蛋白（L1L1）的的IgGIgG和和IgAIgA中和抗体在病毒感染的早期较为中和抗体在病毒感染的早期较为重要重要-预防性疫苗预防性疫苗n针对针对早期基因（早期基因（E6/E7E6/E7）的细胞免疫反应对最终清除病毒可能更为的细胞免疫反应对最终清除病毒可能更为重要重要-治疗性疫苗治疗性疫苗n根据不同地区根据不同地区HPVHPV型别的流行情况，开发有针对性的疫苗型别的流行情况，开发有针对性的疫苗34检测原理检测原理凯普凯普HPV21HPV21分型分型vPCRPCR，Polymerase Chain ReactionPolymerase Chain Reaction（聚合酶链式反应）（聚合酶链式反应）v导流杂交技术（凯普自主创新技术）导流杂交技术（凯普自主创新技术）高效、快速、灵敏、准确高效、快速、灵敏、准确35实验过程实验过程凯普凯普HPV21HPV21分型分型36产品优势产品优势凯普凯普HPV21HPV21分型分型一次可同时得一次可同时得到单一感染或到单一感染或多重感染的丰多重感染的丰富信息富信息在一张基因芯在一张基因芯片上同时完成片上同时完成对杂交和扩增对杂交和扩增过程的全面监过程的全面监控控独特的导流杂独特的导流杂交原理使得操交原理使得操作更便捷，节作更便捷，节约时间约时间在一张基因芯在一张基因芯片上可检出片上可检出1515种高危型和种高危型和6 6种低危型种低危型分型分型检测省省时省力省力双重双重对照照信息信息丰富丰富创新专业创新专业追求卓越追求卓越