细辛标准煮散剂的质量评价.pdf

基金项目：中国中医科学院科技创新工程项目（）作者简介：王梦蓝（），女，硕士研究生在读，研究方向：中药复杂作用解析，：通信作者：孙奕（），女，博士，研究员，研究方向：中药化学，：细辛标准煮散剂的质量评价王梦蓝张淑涵郭宁徐核王安琪李西文孙奕（中国中医科学院中药研究所，北京，）摘要目的：研究和建立细辛标准煮散剂的质量控制。方法：用中药饮片标准煮散剂的制备方法得到不同产地细辛饮片的标准煮散剂；运用高效液相色谱法，计算不同规格细辛煮散剂中细辛脂素的含量、出膏率、转移率等参数，建立指纹图谱，并通过方法学进行验证，对细辛饮片标准煮散剂进行质量评价。采用超高效液相色谱 四极杆飞行时间串联质谱法（）对主要色谱峰进行结构确认，明确细辛标准煮散剂的主要化学成分。结果：细辛脂素在线性范围内表现出良好的线性关系，方法学验证其稳定性、精密度、重复性试验的相对标准偏差（）均 。转移率范围 ，出膏率范围 ，细辛饮片标准煮散剂的指纹图谱相似度 。采用液质分析，共鉴定出了 种化学成分。细辛中仅含的马兜铃酸类成分是马兜铃酸 、马兜铃酸 和马兜铃内酰胺 。结论：建立了细辛标准煮散剂的质量评价方法。关键词细辛；质量评价方法；标准煮散剂；出膏率；转移率；细辛脂素；指纹图谱 ，（，）：，（），（）：，：；中图分类号：文献标识码：细辛为马兜铃科植物北细辛 （）、汉城细辛 或华细辛 的干燥根和根茎，在 神农本草经 中被初次记载，同时被列为上品，其味辛性温，归心、肺、肾经，具有行水通窍、温肺化饮、祛风散寒、止痛的功效，也可用于鼻塞鼻渊、风湿痹痛、风寒感冒、痰饮喘咳等症 。细辛根部的挥发油类成分主要包括甲基丁香酚和黄樟醚，其次为，二甲氧基甲苯、肉豆蔻醚、蒎烯、蒎烯、优葛缕酮、细辛醚、榄香素等 。从其根及根茎的去挥发油部分则鉴定出 ，异丁基 ，十二碳四烯酰胺、细辛脂素、芝麻脂素、山柰酚 葡萄糖苷、，二 吡喃葡萄糖基柚皮素、马兜铃酸（，）等多种非挥发性成分 。临床研究表明，细辛具有解热、镇痛、抗炎、免疫抑制、调节血压、抗过敏、抗衰老等药理作用 。“煮散”首次记载于唐代孙思邈的 备急千金要方，而在更早的汉朝 伤寒杂病论 中已经出现关于剂型的描述。中药煮散是将药物制成细粉或粗粉，加入水或引药煎煮，去掉药渣留下汤汁，最终制成的汤剂。目前，仍沿用至今的煮散剂包括银翘散、玉屏风散等。在当代，随着中药饮片的需求量逐年世界中医药 年 月第 卷第 期上升，煮散剂可以发挥简、便、廉、验的优势，能够大量节约药源，因此有必要重新考量其应用价值 。目前研究较多的一是煮散剂的临床研究并观察其疗效，二是将煮散剂与中西医其他疗法结合来进行临床试验，三是探讨影响煮散有效成分浸出的相关因素等，四是对比研究煮散剂与传统饮片煎出率的差异以及产生差异的因素 。本实验对细辛的精准煮散剂进行了出膏率、有效成分转移率、指纹图谱等方面的研究；与药材饮片中有效成分的含量进行比较，并分析不同规格煮散之间的成分及其含量的差别，确定了药材煮散的最佳粉碎粒径，同时评价煮散与原饮片的质量均一性，建立煮散剂的质量评价系统。仪器与试药 仪器高效液相色谱仪（公司，美国，型号：），超高效液相色谱仪（公司，美国，型号：），超高效液相系统（公司，美国，型号：），高分辨质谱仪（公司，美国，型号：），电子分析天平（北京赛多利斯科 学 仪 器 有 限 公 司，型 号：），电子天平（上海精密科学仪器有限公司，型号：），超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，型号：），台式高速离心机（上海洪纪仪器设备有限公司，型号：），高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司，型号：），试纸（上海三爱思试剂有限公司精密试纸，批号：）。试剂细辛脂素对照品（北京索莱宝科技有限公司，批号：，纯度 ），甲醇、乙腈均为色谱纯级别（，美国，批号：），其他分析试剂均为分析纯级别，实验用水均为娃哈哈纯净水或屈臣氏饮用水。分析样品批细辛饮片经中国中医科学院中药研究所李西文研究员鉴定，均由马兜铃科植物北细辛 （）的干燥根及根茎炮制加工而成，药材标本存放于中国中医研究院中药研究所整合中药学中心。见表 。表 细辛产地及批次样品编号生产批号产地 辽宁本溪 辽宁凤城 辽宁丹东 方法与结果 溶液的制备 细辛饮片标准汤剂供试品溶液的制备精密称取生产批号 的细辛 ，加 倍量水，采用标准汤剂的方法进行煎煮。首先浸泡 ，第 次加热回流 ，用 目的筛网趁热过滤，再加入 倍量水，第 次加热回流 ，趁热过滤，合并 次煎煮滤液，减压浓缩，使最终体积为 ，过 微孔滤膜，即得。不同规格煮散饮片水煎液供试品溶液的制备取细辛饮片均匀粉碎后过筛，分别过 目，目，目筛，可得到 种不同规格的煮散饮片。称取上述煮散饮片各 ，加 倍量水，采用标准汤剂方法进行煎煮。浸泡 ，第 次加热回流 ，用 目的筛网趁热过滤，接着加入倍量水，第 次加热回流 ，趁热过滤，合并 次煎煮滤液，减压浓缩，使最终体积为 ，过 微孔滤膜即得。细辛饮片供试品溶液的制备本品粉末过号筛后，精密称定约 ，置于具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇，密塞称重，超声处理（功率 ，频率 ），待冷却后再次称重，用甲醇补足减失的重量后，过 微孔滤膜，即得。对照品溶液的制备精密称定适量细辛脂素对照品，加入甲醇制成 的细辛脂素对照品溶液，保存，即得。细辛脂素含量测定 色谱条件 色谱柱（，）；乙酸水（）流动相乙腈（），梯度洗脱（，；，；，；，；，），流速为 ，柱温设置为 ，检测波长为 ，进样量为 。线性关系考察取细辛脂素对照品溶液，分别稀释 、倍，按 项色谱条件进行测定，横坐标（）为对照品质量（），纵坐标（）为峰面积，绘制标准曲线，得到回归方程 ，线性范围为 。精密度试验取煮散剂供试品溶液（），按 项色谱条件连续测定 次，结果显示供试品溶液中细辛脂素峰面积相对标准偏差（，）为 ，表明仪器精密度良好。，稳定性试验取煮散剂供试品溶液（），分别在 、时按照 项色谱条件进行分析，结果表明供试品中细辛脂素峰面积 为 ，表明标准煮散供试品溶液在 内稳定。重复性取相同批次的标准煮散剂样品（），按 项中的方法平行制备 份供试品溶液，分别按 项色谱条件进行检测分析，计算得出细辛脂素的平均质量分数分别为 ，为 ，表明该方法重复性良好。加样回收率试验精密吸取同一批次已知含量的供试品溶液适量（），按 的比例添加细辛脂素对照品，平行制备 份后按 项色谱方法对细辛脂素进行分析，计算出细辛脂素的平均回收率为 ，为 ，表明该实验方法准确可靠。细辛样品中细辛脂素含量测定依照 年版 中华人民共和国药典 方法，制备不同批次细辛饮片样品溶液，精密吸取 批次供试品溶液各 ，并在 项下的色谱条件进样分析，测定细辛脂素的峰面积，通过外标法计算细辛脂素含量。见表 。细辛饮片标准汤剂中细辛脂素含量测定精密吸取 项下细辛饮片标准汤剂供试品溶液 ，并在 项色谱条件下进样分析，测定细辛脂素的峰面积，根据外标法计算细辛脂素含量。见表 。细辛煮散饮片水煎液中细辛脂素量测定精密吸取 项下各个批次不同规格的供试品溶液各 ，并在 项的色谱条件下进样分析，测定细辛脂素的峰面积，接着通过外标法计算细辛脂素含量。见表 。细辛脂素转移率根据以上实验测得的细辛脂素含量得结果，按照转移率的公式计算细辛脂素转移率，转移率 标准汤剂或煮散剂中细辛脂素含量 相应饮片中细辛脂素含量 ，发现粉碎后的不同粒径煮散饮片水煎液细辛脂素的转移率均比原饮片有显著增加，其中以中等粒径细辛脂素转移率最高。见表 。出膏率精密量取 项下制得的细辛饮片标准汤剂和 项下制得不同规格煮散饮片水煎液 ，置于干燥的蒸发皿中，水浴加热蒸干，接着在 烘箱中干燥 ，取出后放置干燥器中冷却 ，称重，计算出膏率。见表 。指纹图谱的建立将 批细辛饮片标准煮散剂生成高效液相色谱指纹图谱，对照指纹图谱则由平均数生成。见图 。根据峰形、峰面积、保留时间等参数，最终选择出共有峰 个，以峰 作参照，来计算 个共有峰的相对保留时间、保留时间、相对峰面积以及峰面积。见表 。通过对比高效液相色谱色谱图信息可知，批细辛标准煮散剂所生成的指纹图谱的相似度均大于 。见表 。表 细辛标准煮散剂的理化特征参数与细辛脂素参数编号批号规格出膏率（）糊化程度细辛脂素（）转移率（）值 目 目 目 目 目 目 目 目 目 饮片 表 细辛标准煮散剂的主要共有指纹峰指标参数峰编号保留时间（）相对保留时间峰面积（）相对峰面积 世界中医药 年 月第 卷第 期图 细辛标准煮散剂的高压液相色谱图谱注：峰 为细辛脂素图 细辛标准煮散剂的高效液相色谱指纹谱表 细辛标准煮散剂的高效液相色谱指纹图谱的相似度编号 对照指纹图谱 对照指纹图谱 超高效液相色谱 串联质谱法（，）成分指认 检测条件色谱条件为 ，色谱柱（，）；流动相 甲酸水溶液（）乙腈（），梯度洗脱（，；，；，；，），流速 ，进样 ，柱温设置为 ，检测波长为 。质谱条件为电喷雾电离（，），正离子模式全扫描；离子源工作参数为毛细管电压 ，锥孔电压 ，锥孔反吹气流量（），脱溶剂气流量 ，离子源温度 ，脱溶剂气温度 ，每 秒采集 次谱图，扫描范围 ，采用 质谱分析软件进行数据采集和分析。色谱峰指认精密吸取 的细辛标准煮散供试品溶液注入超高效液相色谱 四极杆 飞行时间串联质谱法（，）仪器，在正离子模式下测定，利用 质谱分析软件进行数据处理，对比分析相对分子质量、特征离子碎片，并结合 确定化合物的分子式和相对分子质量等信息。最终鉴定出 个色谱峰。化合物及相关离子推断见表 ，图 。讨论本实验选取了不同产地的细辛制成煮散剂，分别测定了出膏率和 值。结果显示，粉碎成不同粒径的煮散饮片与原饮片 值无明显差异，而出膏率则比原饮片有所增加；然而最小粒径容易出现轻微糊化现象，故选用中等细度的颗粒制备煮散剂最为合适。表 正离子模式下细辛煮散剂溶液中的色谱峰鉴别序号保留时间（）成分分子式 理论值测量值误差 裂解碎片引用文献 （），（），世界中医药 年 月第 卷第 期图 细辛标准煮散剂 分析的基峰离子（，）色谱图中药生产中计算出膏率最重要的是要确保中药的提取程度够完全，并保证中药材能煮透，计算出膏率的基础上可以降低生产成本，使药品质量得到控制以实现良好的经济效益。并且出膏率和含量之间的关联密切；控制好药材的质量和工艺提取参数，有利于更好地保证产品的最终质量。采用高压液相色谱法 二极管面阵（，）色谱法进行分析，根据其高分辨数据以及分析结果，说明不同规格煮散剂与原饮片在主要成分上并没有明显差别，具有属性上的一致性；根据其相似度计算结果，不同规格煮散剂与原饮片批次之间相似度较好，说明粉碎后的煮散饮片与原药材饮片中的成分种类没有太大差别，是否粉碎及粉碎程度对其药物成分几乎没有影响。本实验制成了 个不同规格煮散剂，包括粗粒径（目）、中粒径（目）、细粒径（目），通过查阅 版 中华人民共和国药典，借鉴其中方法，对有效成分细辛脂素的含量及转移率进行了测定，与饮片制得的标准汤剂比较，粉碎后不同粒径煮散饮片水煎液中细辛脂素的含量均明显增加，其中中等粒径（目）细辛脂素含量及转移率均为最高，有效成分含量最高，且不易糊化。如果细辛药材制成 目粒径的颗粒再加工成煮散剂，则可以得到最高的药材提取率，从而更广泛地应用于生物医药行业。细辛在炮制入药时，饮片中的有效成分之一细辛脂素的转移率不高，但制成煮散后，可使其出膏率和转移率有所提高。研究发现，不同规格的煮散剂之间的出膏率也存在差异，其中以中等颗粒的细辛脂素的转移率最高，且具有良好的均一性。采用 进行检测，用 质谱分析软件分析，结合文献查阅，以及对照品质谱分析和保留时间等参数，最终鉴定出 个化合物，这对于细辛煮散剂的质量评价具有一定的研究意义。小结本实验按照制备中药饮片标准煮散剂的方法，建立细辛饮片标准煮散剂的质量标准，而煮散可以使得患者煎煮服药过程更简单、快捷；并且价格相对低廉，一定程度上减轻患者的经济负担；技术的改进可以大大提高效率，节约资源的同时能保护环境。传统汤剂由于长时间沸腾会导致挥发性有效成分的散失，煮散恰好避免这个问题。同时煮散可以减少药材使用、缩短煎煮时间、煎药出率高，有助于药效更好的发挥，方便携带以及服用。煮散虽好，但也存在一些缺点，比如无法清晰辨认原材料是何种药材，不易长久保存等问题。目前对于煮散剂的研究已比较深入且取得不小成就，但仍有缺陷需要系统地完善，这也将是煮散方向今后研究和讨论的热点。利益冲突声明：无。参考文献 国家药典委员会 中华人民共和国药典（一部）北京：中国医药科技出版社，：刘东吉，刘春生 不同产地栽培辽细辛的挥发油研究 中国实验方剂学杂志，（）：，：，（）：杨佳，付业佩，杜宝香，等 细辛多糖对流感病毒 型感染的 ，保护作用及对炎症因子表达水平的影响 中国中药杂志，（）：杜成智，陈玉萍，覃洁萍，等 不同产地细辛挥发油的 分析 中国实验方剂学杂志，（）：郭欣，林珊，吴丽明，等 灯盏细辛化学成分及药理作用研究进展 中成药，（）：张磊 辽细辛非挥发性化学成分、质量控制和抗菌活性研究 沈阳：沈阳药科大学，（）：李妍，何文媛，王康宇，等 基于 多指标成分测定及指纹图谱多模式识别方法的北细辛质量分析 中草药，（）：吴昊，温晓茵，颜鹏，等 细辛的化学成分及药理作用研究进展 中国实验方剂学杂志，（）：费可，胡瑕瑜，邹璐，等 细辛临床应用与药理作用研究进展 上海中医药大学学报，（）：鲍慧中，朱丽娟，刘雪枫，等 细辛通过上调 介导铁死亡致大鼠肝损伤的作用机制研究 中草药，（）：范佳佳，刘阳，刘旎，等 太平惠民和剂局方 中煮散剂的使用特点 中医杂志，（）：文谨，刘起华，仝小林 中药煮散剂的研究探讨 中华中医药杂志，（）：白雅黎，朱向东，兰雨泽，等 煮散剂的兴衰与现代研究进展 中医临床研究，（）：王飞旋，刘西常，金鲁微，等 以 圣济总录伤寒门 为例论宋代煮散剂的传承与应用 中国中医基础医学杂志，（）：，（）：孔德强，高慧媛，李辛，等 基于 技术快速测定马兜铃科五种植物中 种马兜铃酸类物质的含量 中国药学：英文版，（）：（收稿本文编辑：杨觉雄）关于开展金藤清痹颗粒征文的通知金藤清痹颗粒是由鲁南厚普制药有限公司生产的国家 类中药新药，该方由金银花、青风藤、白花蛇舌草、当归、蜈蚣等 味中药组方而成，具有清热解毒、活血消肿、通痹止痛的功效。用于类风湿性关节炎活动期，属于毒热内蕴、湿热阻络证，症见关节肿胀、疼痛拒按、晨僵、触之发热、或皮肤发红、身热、汗多、口渴、便干溲黄等。金藤清痹颗粒为中国中医科学院西苑医院房定亚教授数十年临床成果的结晶，可有效缓解关节压痛、肿胀等症状，疗效显著。为了进一步总结和评估金藤清痹颗粒在中国人群中的临床疗效，交流临床应用经验，更好地提高疾病的临床治疗水平，世界中医药 编辑部与鲁南制药集团股份有限公司联合举办金藤清痹颗粒征文活动。具体要求如下。征文内容）基础研究、机制研究等；）临床研究：产品疗效分析和临床应用经验总结等。征文要求）凡未在公开期刊上发表的论文均可投稿；）应征论文写作规范请参照 世界中医药 杂志投稿要求；）本次征文只接受 方式投稿，电子版本请使用 排版，：（投稿后请注意确认），邮件主题请注明“金藤清痹颗粒”；）来稿请注明作者姓名、性别、出生年月、单位、职称、通信地址、联系电话和电子邮箱。评选及奖励办法 世界中医药 编辑部将邀请国内知名专家及相关专业编委组成评审委员会，对所有征文进行评审。本次征文活动设特等奖名，奖金 元；一等奖名，奖金 元；二等奖名，奖金 元；三等奖论文 篇，奖金 元；参与奖 名，获精美礼品 份。对获奖论文只奖励第一作者，获奖优秀论文将择优发表，可推荐到各级期刊发表。征文截止日期 年 月 日。世界中医药 编辑部鲁南制药集团股份有限公司世界中医药 年 月第 卷第 期