去亚甲基小檗碱对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体caspase依赖性凋亡的影响.pdf

目的 探讨去亚甲基小檗碱(DMB)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MP P+)诱导的S H-S Y 5 Y细胞线粒体c a s p a s e依赖性凋亡通路的影响。方法 培养S H-S Y 5 Y细胞,将其分为对照组、MP P+组、小檗碱(B B R,DMB的前体)+MP P+组、司莱吉兰(s e l e g i l i n e,与DMB同为单胺氧化酶B抑制剂)+MP P+组、DMB+MP P+组。应用免疫印迹法检测各组b c l-2/b a x比值以及c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白的表达。结果 与对照组相比,MP P+组b c l-2/b a x比值明显降低(F=4 2.5 8,q=1 7.8 9,P0.0 0 1),DMB、B B R、s e l e g i l i n e处理均可以抑制MP P+诱导的b c l-2/b a x比值降低(q=6.7 11 0.6 3,P0.0 0 1),且s e l e g i l i n e处理效果强于B B R和DMB(q=3.9 3、3.5 9,P0.0 5)。与对照组相比,MP P+组c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达明显上调(F=1 1 1.6 0,q=2 9.4 4,P0.0 0 1),DMB、B B R、s e l e g i l i n e处理可以降低MP P+诱导的c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达上调(q=1 0.7 41 3.5 3,P0.0 0 1),且3种药物处理效果差异无显著性。结论 对于MP P+诱导的S H-S Y 5 Y细胞,DMB可以升高b c l-2/b a x比值,降低c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白的表达。关键词 小檗碱;S H-S Y 5 Y细胞;线粒体;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3;细胞凋亡 中图分类号 R 3 3 8.2 文献标志码 A 文章编号 2 0 9 6-5 5 3 2(2 0 2 3)0 3-0 3 7 5-0 4d o i:1 0.1 1 7 1 2/j m s.2 0 9 6-5 5 3 2.2 0 2 3.5 9.0 9 5 开放科学(资源服务)标识码(O S I D)网络出版 h t t p s:/l i n k.c n k i.n e t/u r l i d/3 7.1 5 1 7.R.2 0 2 3 0 8 0 4.1 5 2 2.0 0 5;2 0 2 3-0 8-0 4 1 7:3 8:5 2E F F E C T SO FD EME T H Y L E N E B E R B E R I N EO NM I T O C H O N D R I A LC A S P A S E-D E P E N D E N TA P O P T O S I S I NS H-S Y 5 YC E L L S I N-D U C E DB YMP P+ZHUT i a n l i,S UNL i n,WANGB i n g c h a o,MAZ e g a n g(D e p a r t m e n to fP h y s i o l o g y,S c h o o l o fB a s i cM e-d i c i n e,Q i n g d a oU n i v e r s i t y,Q i n g d a o2 6 6 0 7 1,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f d e m e t h y l e n e b e r b e r i n e(DMB)o n t h em i t o c h o n d r i a l c a s p a s e-d e p e n d e n ta p o p t o s i sp a t h w a y i nS H-S Y 5 Yc e l l st r e a t e dw i t h1-m e t h y l-4-p h e n y l p y r i d i n i u m(MP P+).M e t h o d s S H-S Y 5 Yc e l l sw e r ec u l-t u r e da n dd i v i d e d i n t oc o n t r o l g r o u p,MP P+g r o u p,b e r b e r i n e(B B R,t h ep r e c u r s o ro fDMB)+MP P+g r o u p,s e l e g i l i n e(am o n o-a m i n eo x i d a s eBi n h i b i t o r s i m i l a r t oDMB)+MP P+g r o u p,a n dDMB+MP P+g r o u p.T h e r a t i oo fb c l-2/b a xa n dt h ee x p r e s s i o no fc l e a v e dc a s p a s e-3p r o t e i nw e r ed e t e r m i n e db yW e s t e r nb l o t f o re a c hg r o u p.R e s u l t s C o m p a r e dw i t ht h a t i nt h ec o n t r o lg r o u p,t h eb c l-2/b a x r a t i o i n t h eMP P+g r o u pw a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r(F=4 2.5 8,q=1 7.8 9,P0.0 0 1).DMB,B B R,a n d s e l e g i l i n e a l l s i g-n i f i c a n t l y i n h i b i t e dt h eMP P+-i n d u c e dd e c r e a s e i nt h eb c l-2/b a xr a t i o(q=6.7 1-1 0.6 3,P0.0 0 1),a n dt h ee f f e c tw i t hs e l e g i l i n ew a ss i g n i f i c a n t l yg r e a t e r t h a n t h a tw i t hB B R(q=3.9 3,P0.0 5)a n d t h a tw i t hDMB(q=3.5 9,P0.0 5).C o m p a r e dw i t h t h e c o n-t r o l g r o u p,t h eMP P+g r o u ps h o w e ds i g n i f i c a n t l yh i g h e re x p r e s s i o no fc l e a v e dc a s p a s e-3p r o t e i n(F=1 1 1.6 0,q=2 9.4 4,P0.0 0 1).DMB,B B R,a n ds e l e g i l i n es i g n i f i c a n t l yr e d u c e d MP P+-i n d u c e du p r e g u l a t i o no fc l e a v e dc a s p a s e-3p r o t e i n(q=1 0.7 4-1 3.5 3,P0.0 5).C o n c l u s i o n F o rS H-S Y 5 Yc e l l s i n d u c e db yMP P+,DMBc a n i n c r e a s e t h er a t i oo fb c l-2/b a xa n dd e c r e a s e t h ee x p r e s s i o no f c l e a v e dc a s p a s e-3p r o t e i n.K E Y WO R D S b e r b e r i n e;S H-S Y 5 Yc e l l s;m i t o c h o n d r i a;c a s p a s e3;a p o p t o s i s 帕金森病(P D)是一种神经退行性疾病,常见于老年人,其主要特征为黑质致密部多巴胺能神经元的选择性丧失1-2。导致P D的原因有很多,例如神经炎症、氧化应激、单胺氧化酶B(MAO-B)活性异常等。临床治疗P D的方式多为药物治疗3。去亚甲基小檗碱(DMB)是小檗碱(B B R)的主要代谢产物之一,被认为是B B R生物发生途径的中心中间体4。有研究表明,DMB具有抗氧化、抗炎、抗纤维化以及可逆抑制MAO-B活性的特性,提示DMB可能在神经退行性疾病中具有治疗潜力5-7。众所周知,线粒体相关的b c l-2/b a x/c a s p a s e-3凋亡途径是一条非常典型的c a s p a s e依赖性凋亡途径。有研 3 7 6青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷究结果表明,b c l-2、b a x蛋白表达水平的变化,会激活c a s p a s e-3,启动c a s p a s e-3级联反应8-1 1。本研究用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MP P+)处理S H-S Y 5 Y细胞建立体外P D模型,观察DMB以及已经被证明具有保护作用的DMB前体B B R、同样为MAO-B抑制剂的司来吉兰(s e l e g i l i n e)对MP P+诱导的S H-S Y 5 Y细胞b c l-2/b a x比值以及c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达水平的影响。1 材料和方法1.1 实验材料S H-S Y 5 Y细胞购于中国科学院上海细胞库;DMEM高糖培养液、胎牛血清、胰蛋白酶、青霉素/链霉素溶液购自以色列B i o l o g i c a l I n d u s t r i e s公司;MP P+、B B R、s e l e g i l i n e和DMB购自美国G L P-B I O公司;兔抗b c l-2、兔抗b a x、兔抗c l e a v e dc a s p a s e-3和兔抗GA P DH抗体购自美国C e l l S i g n a l i n g公司;HR P标记山羊抗兔I g G购自中国A b c l o n a l公司;E C L发光液购于中国雅酶公司。1.2 细胞培养及分组S H-S Y 5 Y细胞置于温度为3 7、含体积分数0.0 5C O2的培养箱中,用DMEM高糖培养液培养,该培养液中含有体积分数0.1 0的胎牛血清和体积分数0.0 1的青霉素/链霉素。细胞培养23d后进行传代,将状态良好的细胞接种于6孔板中,进行下一步实验。将细胞分为对照组(A组)、MP P+组(B组)、B B R+MP P+组(C组)、s e l e g i l i n e+MP P+组(D组)、DMB+MP P+组(E组)。A组不做任何处理;B组使用1mm o l/L的MP P+处理S H-S Y 5 Y细胞2 4h;C组使用0.1m o l/L的B B R和1mm o l/L的MP P+共同处理S H-S Y 5 Y细胞2 4h;D组使用1 0 0m o l/L的s e l e g i l i n e和1mm o l/L的MP P+共处理S H-S Y 5 Y细胞2 4h;E组使用1n m o l/L的DMB和1mm o l/L的MP P+共处理S H-S Y 5 Y细胞2 4h。1.3 免疫印迹法检测b c l-2、b a x、c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白的表达各组S H-S Y 5 Y细胞经过药物处理2 4h后,用P B S洗涤3次,每孔加入1 0 0LR I P A裂解缓冲液在冰上裂解3 0 m i n。用刮板将细胞刮下,经离心(1 20 0 0r/m i n,3 0m i n,4)提取细胞蛋白。使用B C A试剂盒测定蛋白质浓度。将含有2 0g蛋白质的样品通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离,随后转移到聚偏二氟乙烯(P V D F)膜上。将膜置于5 0g/L的脱脂牛奶中,室温封闭2h,然后分别加入b c l-2(110 0 0)、b a x(110 0 0)、c l e a v e dc a s p a s e-3(110 0 0)和GA P DH(11 00 0 0)一抗4孵育过夜。用T B S T洗3次,每次1 0m i n,加山羊抗兔I g G(11 00 0 0)二抗室温孵育1h。用E C L发光液显影,然后使用I m a g eJ软件分析b c l-2、b a x和c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达。1.4 统计学分析应用G r a p h p a dP r i s m7.0软件进行统计学分析。实验数据以xs表示,多组比较采用单因素方差分析(O n e-w a yANOVA),然后采用T u r k e y法进行组间两两比较,P0.0 5表示差异具有统计学意义。2 结 果2.1 DMB对MP P+处理的S H-S Y 5 Y细胞b c l-2/b a x比值的影响各组细胞b c l-2/b a x比值比较差异具有统计学意义(F=4 2.5 8,P0.0 0 1)。与对照组相比,MP P+组细胞的b c l-2/b a x比值显著降低(q=1 7.8 9,P0.0 0 1);与MP P+组相比,DMB+MP P+组、B B R+MP P+组和s e l e g i l i n e+MP P+组的b c l-2/b a x比值明显升高,差异有统计学意义(q=6.7 11 0.6 3,P0.0 0 1);与B B R+MP P+组和DMB+MP P+组相比较,s e l e g i l i n e+MP P+组b c l-2/b a x比值更高(q=3.5 9、3.9 3,P0.0 5);DMB+MP P+组与B B R+MP P+组相比,b c l-2/b a x比值差异无统计学意义。见图1、表1。2.2 DMB对MP P+处理的S H-S Y 5 Y细胞c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白的影响各组细胞c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白水平比较差异具有统计学意义(F=1 1 1.6 0,P0.0 0 1)。与对照组相比,MP P+组的c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达水平显著上调(q=2 9.4 4,P0.0 0 1);与MP P+组相比,DMB+MP P+组、B B R+MP P+组、s e l e g i l i n e+MP P+组的c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达降低,差异具有统计学意义(q=1 0.7 41 3.5 3,P0.0 0 1);3种药物处理组之间相比,c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达水平差异无显著性。见图1、表1。3 讨 论P D是一种常见于老年人的神经退行性疾病1 2,3期朱天立,等.去亚甲基小檗碱对MP P+诱导的S H-S Y 5 Y细胞线粒体c a s p a s e依赖性凋亡的影响3 7 7图1 各组细胞b c l-2、b a x、c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达测定电泳图表1 各组细胞b c l-2/b a x比值和c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达比较(n=7,xs)组别b c l-2/b a xc l e a v e dc a s p a s e-3A组1.0 0 00.0 5 81.0 0 00.0 5 0B组 0.5 2 30.0 4 7*2.9 0 30.2 0 2*C组 0.7 0 20.0 8 4#2.0 2 80.2 0 1#D组 0.8 0 70.0 7 2#2.2 0 80.1 6 4#E组 0.7 1 10.0 8 4#2.1 5 00.1 8 8#各组细胞b c l-2/b a x比值和c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达比较,F=4 2.5 8、1 1 1.6 0,P0.0 0 1。与A组比较,*q=1 7.8 9、2 9.4 4,P0.0 0 1;与B组比较,#q=6.7 11 3.5 3,P0.0 0 1;与D组比较,q=3.5 9、3.9 3,P0.0 5。其主要病理特征为黑质致密部多巴胺能神经元的选择性丧失、路易小体(主要成分为-突触核蛋白)形成1 3。P D的临床表现主要包括静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍,同时病人可伴有抑郁、便秘和睡眠障碍等非运动症状1 4。临床治疗方式主要为药物治疗,包括多巴胺类似物、多巴胺受体激动剂、神经保护剂等。手术治疗是药物治疗的一种有效补充;康复治疗、心理治疗及良好的护理也能在一定程度上改善症状1 5-1 6。有效的治疗能显著提高P D病人的生活质量,P D病人的预期寿命与普通人群并无显著差异1 7。DMB存在于天然药用植物芸香科植物黄柏中,亦可由盐酸小檗碱经过肝脏的首过效应代谢生成。DMB是B B R的主要代谢产物之一,是B B R生物合成的关键中间体,并且DMB在通过血-脑脊液屏障和发挥治疗作用方面比B B R更加有效。DMB具有抗氧化、抗炎、抗纤维化的特性。许多研究表明,DMB能抑制丝裂原活化蛋白激酶信号1 8,参与抑制核因子 B,因此认为DMB可以作为一种神经保护药物用于治疗P D1 9。而且,由于DMB可促进AMP依赖的蛋白激酶(AMP K)信号传导,推测它可能通过调节AMP K的信号传导而有助于P D的神经保护2 0。有大量证据表明,多巴胺是MAO-B的底物,MAO-B抑制剂可以通过增加多巴胺含量治疗P D2 1。而有研究表明,DMB可以可逆地抑制MAO-B活性2 2。良好的生物活性使得DMB成为一个有吸引力的合成靶点,DMB可能在神经退行性疾病中具有治疗潜力2 3。已知MP P+是1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MP T P)的有毒代谢产物2 4,其结构接近多巴胺,会通过中脑多巴胺转运蛋白被选择性地转运进入神经元,选择性地毒害多巴胺能神经元,从而导致P D的症状2 5。本研究应用MP P+制备体外P D模型,探究DMB对MP P+诱导的S H-S Y 5 Y细胞线粒体c a s p a s e依赖性凋亡通路的影响。本实验结果显示,经MP P+处理的S H-S Y 5 Y细胞b c l-2/b a x比值降低,c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达明显增加。这表明细胞在受到损伤后b c l-2/b a x比值会降低,并且伴随着c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白含量的增加。有研究表明,B B R对MP T P诱导的P D模型小鼠多巴胺能神经元损伤具有保护作用2 6。另有研究表明,s e l e-g i l i n e作为一种MAO-B抑制剂,对神经元的损伤具有保护作用2 7-2 8。为了检测DMB是否具有细胞保护作用,本研究使用DMB的前体B B R以及同为MAO-B抑制剂的s e l e g i l i n e与DMB进行对照,而这两种药物均已被证实具有细胞保护作用。有研究表明,b c l-2具有抗凋亡作用2 9。b a x接收到凋亡信号刺激被激活后会破坏线粒体膜的完整性,释放c y t-c,进一步将c a s p a s e-3剪切为具有凋亡活性的c l e a v e dc a s p a s e-33 0。本实验结果显示,DMB处理能够有效抑制MP P+诱导引起的b c l-2/b a x比值的降低,而且,MP P+诱导引起的c l e a v e dc a s p a s e-3表达的升高在经DMB处理之后也会被抑制。B B R、s e l e g i l i n e、DMB虽然都有明显的抑制MP P+诱导引起的b c l-2/b a x比值降低的作用,但s e l e g i l i n e的效果要略强于B B R和DMB,而DMB与B B R之间并无明显差别。B B R、s e l e g i l i n e、DMB均具有明显的抑制MP P+诱导引起的c l e a v e dc a s p a s e-3表达升高的作用,且3种药物作用效果无明显差异。推测这种现象产生的原因可能为:DMB与B B R同为小檗属植物的天然产物,在特性上具有一定的相同之处,而s e l e g i l i n e并非天然植物产物,在作用方式上可能会与小檗属植物天然产物有所不同,从而在作用效果上产生差异。但其具体机制仍需进一步研究。综上所述,本实验初步证明,DMB能够通过升高b c l-2/b a x比值、降低c l e a v e dc a s p a s e-3蛋白表达,抑制线粒体c a s p a s e依赖性的凋亡途径,从而对MP P+诱导的S H-S Y 5 Y细胞起到保护作用。本研究为DMB作为神经保护药物治疗P D提供了新的 3 7 8青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷方案,但DMB起保护作用的深层机制还有待继续研究。参考文献1C ONNO L L YBS,L AN G AE.P h a r m a c o l o g i c a l t r e a t m e n to fP a r k i n s o nd i s e a s e:ar e v i e wJ.J AMA,2 0 1 4,3 1 1(1 6):1 6 7 0-1 6 8 3.2C A C A B E L O SR.P a r k i n s o nsd i s e a s e:f r o m p a t h o g e n e s i st op h a r m a c o g e n o m i c sJ.I n t e r n a t i o n a lJ o u r n a lo f M o l e c u l a rS c i e n c e s,2 0 1 7,1 8(3):5 5 1.3B U C HANANB,ME N GQF,P OU L I N M M,e t a l.C o m p a-r a t i v ep h a r m a c o k i n e t i c sa n ds a f e t ya s s e s s m e n to ft r a n s d e r m a lb e r b e r i n ea n dd i h y d r o b e r b e r i n eJ.P L o SO n e,2 0 1 8,1 3(3):e 0 1 9 4 9 7 9.4WAN GK,F E N GXC,C HA ILW,e t a l.T h em e t a b o l i s mo fb e r b e r i n ea n di t sc o n t r i b u t i o nt ot h ep h a r m a c o l o g i c a le f f e c t sJ.D r u gM e t a b o l i s mR e v i e w s,2 0 1 7,4 9(2):1 3 9-1 5 7.5GU P T AS,KHANA,V I S HWA SS,e ta l.D e m e t h y l e n e b e r-b e r i n e:ap o s s i b l et r e a t m e n tf o r H u n t i n g t o nsd i s e a s eJ.M e d i c a lH y p o t h e s e s,2 0 2 1,1 5 3:1 1 0 6 3 9.6KONGLD,C HE N GCH,T ANRX.M o n o a m i n e o x i d a s e i n-h i b i t o r s f r o mr h i z o m ao fC o p t i sc h i n e n s i sJ.P l a n t aM e d i c a,2 0 0 1,6 7(1):7 4-7 6.7S AK L AN IP,KHAN H,S I N GH T G,e ta l.D e m e t h y l e-n e b e r b e r i n e,ap o t e n t i a l t h e r a p e u t i c a g e n t i nn e u r o d e g e n e r a t i v ed i s o r d e r s:ap r o p o s e dm e c h a n i s t i c i n s i g h tJ.M o l e c u l a rB i o l o-g yR e p o r t s,2 0 2 2,4 9(1 0):1 0 1 0 1-1 0 1 1 3.8L IXY,WAN GJ,GON GX,e t a l.U p r e g u l a t i o no fB C L-2b ya c r i d o n ed e r i v a t i v et h r o u g hg e n ep r o m o t e r i-m o t i ff o ra l l e v i a-t i n g l i v e rd a m a g eo fNA F L D/NA S HJ.N u c l e i cA c i d sR e-s e a r c h,2 0 2 0,4 8(1 5):8 2 5 5-8 2 6 8.9K I R K L AN D R A,F R ANK L I NJL.B a x,r e a c t i v eo x y g e n,a n dc y t o c h r o m ecr e l e a s ei nn e u r o n a la p o p t o s i sJ.A n t i o x i-d a n t s&R e d o xS i g n a l i n g,2 0 0 3,5(5):5 8 9-5 9 6.1 0P E A-B L AN C O A,GA R C A-S E ZAJ.B a x,b a ka n db e-y o n dm i t o c h o n d r i a l p e r f o r m a n c e i na p o p t o s i sJ.T h eF E B SJ o u r n a l,2 0 1 8,2 8 5(3):4 1 6-4 3 1.1 1C HOUDHA R YGS,A L-HA R B IS,A LMA S ANA.C a s p a s e-3a c t i v a t i o n i s a c r i t i c a l d e t e r m i n a n t o f g e n o t o x i c s t r e s s-i n d u c e da p o p t o s i sJ.M e t h o d s i nM o l e c u l a rB i o l o g y,2 0 1 5,1 2 1 9:1-9.1 2L E E SA,HA R D YJ,R E V E S ZT.P a r k i n s o nsd i s e a s eJ.T h eL a n c e t,2 0 0 9,3 7 3(9 6 8 0):2 0 5 5-2 0 6 6.1 3WAKA B AYA S H IK,T AN J IK,O D A G I R IS,e ta l.T h el e w yb o d y i nP a r k i n s o nsd i s e a s ea n dr e l a t e dn e u r o d e g e n e r a-t i v ed i s o r d e r sJ.M o l e c u l a rN e u r o b i o l o g y,2 0 1 3,4 7(2):4 9 5-5 0 8.1 4J ANKOV I CJ.P a r k i n s o nsd i s e a s e:c l i n i c a l f e a t u r e sa n dd i a g-n o s i sJ.J o u r n a lo fN e u r o l o g y,N e u r o s u r g e r y,a n dP s y c h i a-t r y,2 0 0 8,7 9(4):3 6 8-3 7 6.1 5C A B R E I R A V,MA S S ANOJ.P a r k i n s o nsd i s e a s e:c l i n i c a lr e v i e wa n du p d a t eJ.A c t aM e d i c aP o r t u g u e s a,2 0 1 9,3 2(1 0):6 6 1-6 7 0.1 6G I T L E RA D,DH I L L ONP,S HO R T E RJ.N e u r o d e g e n e r a-t i v ed i s e a s e:m o d e l s,m e c h a n i s m s,a n dan e w h o p eJ.D i-s e a s eM o d e l s&M e c h a n i s m s,2 0 1 7,1 0(5):4 9 9-5 0 2.1 7GO L B ELI,L E Y T ONCE.L i f ee x p e c t a n c yi nP a r k i n s o nd i-s e a s eJ.N e u r o l o g y,2 0 1 8,9 1(2 2):9 9 1-9 9 2.1 8Z HAN G M,L IQ X,Z HOU CS,e ta l.D e m e t h y l e n e b e r b e-r i n ea t t e n u a t e sc o n c a n a v a l i n A-i n d u c e da u t o i mm u n eh e p a t i t i si nm i c e t h r o u g h i n h i b i t i o no fN F-Ba n dMA P Ks i g n a l i n gJ.I n t e r n a t i o n a l I mm u n o p h a r m a c o l o g y,2 0 2 0,8 0:1 0 6 1 3 7.1 9WAN GYC,Z HAOZ,YANY,e t a l.D e m e t h y l e n e b e r b e r i n ep r o t e c t sa g a i n s th e p a t i c f i b r o s i s i nm i c eb ym o d u l a t i n gN F-Bs i g n a l i n gJ.I n t e r n a t i o n a lJ o u r n a lo f M o l e c u l a rS c i e n c e s,2 0 1 6,1 7(7):1 0 3 6.2 0Q I AN GX Y,XU LL,Z HAN G M,e ta l.D e m e t h y l e n e b e r-b e r i n ea t t e n u a t e sn o n-a l c o h o l i cf a t t yl i v e rd i s e a s ew i t ha c t i v a-t i o no fAMP Ka n d i n h i b i t i o no fo x i d a t i v es t r e s sJ.B i o c h e m i-c a l a n dB i o p h y s i c a lR e s e a r c hC o mm u n i c a t i o n s,2 0 1 6,4 7 2(4):6 0 3-6 0 9.2 1C A R R A D O R IS,D A S C E N Z I O M,CH I ME N T IP,e ta l.S e-l e c t i v eMAO-Bi n h i b i t o r s:a l e s s o nf r o mn a t u r a lp r o d u c t sJ.M o l e c u l a rD i v e r s i t y,2 0 1 4,1 8(1):2 1 9-2 4 3.2 2T AOC,HUSQ,C HE NJ,e ta l.H i g h l ye f f i c i e n ts y n t h e s i sa n dm o n o a m i n e o x i d a s eB i n h i b i t o r yp r o f i l e o f d e m e t h y l e n e b e r-b e r i n e,c o l u m b a m i n e a n dp a l m a t i n eJ.N e u r o c h e m i s t r y I n t e r-n a t i o n a l,2 0 2 0,1 3 9:1 0 4 8 0 7.2 3WAN GZH,WAN GLX,S H IBY,e ta l.D e m e t h y l e n e b e r-b e r i n ep r o m o t e sa p o p t o s i sa n ds u p p r e s s e sT G F-/S m a d si n-d u c e dEMTi nt h ec o l o nc a n c e rc e l l sHC T-1 1 6J.C e l lB i o-c h e m i s t r ya n dF u n c t i o n,2 0 2 1,3 9(6):7 6 3-7 7 0.2 4N I C K L A S W J,YOUN G S T E RS K,K I N D T M V,e ta l.MP T P,MP P+a n dm i t o c h o n d r i a l f u n c t i o nJ.L i f eS c i e n