牛蒡子杀小瓜虫活性成分研究.pdf
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1、病害防治栏目编辑宋迁红牛募子杀小瓜虫活性成分研究胡少军(杭州市富阳区农业技术推广中心,浙江杭州3 1 1 4 0 0)牛子是菊科植物牛的一种干果,它被广泛应用于驱散致病风热、促疹、止疮咽喉、排毒、消肿。牛子的主要活性成分是木质素类化合物,被证实具有抗氧化、抗炎和抗菌作用,此外,其也被证实具有抗肿瘤活性。在水产动物上,王高学等报道其具有较好的杀指环虫的作用,同时利用活性追踪试验发现其主要杀虫活性成分为牛劳子苷和牛劳子苷元。在笔者之前的研究中,发现牛劳子正丁醇提取物具有较好的体外杀小瓜虫的作用,因此本研究通过构建体外杀小瓜虫药物筛选模型,利用活性追踪方法分离牛劳子抗小瓜虫活性成分,并利用波谱分析活
2、性单体的化学结构,评价其体内的杀虫药效,为研发新型杀小瓜虫药物提供技术基础和理论依据。一、材料与方法1.供试虫体多子小瓜虫采自浙江开化某草鱼养殖场。2.天然植物牛劳子采自浙江莫干山,由中国药科大学中药学院鉴定。3.试验鱼草鱼体重为2 0 克/尾左右,购自萧山某苗种繁育场,随机取鳃显微观察,并未感染小瓜虫,同时观察鱼体表面未发现白点。鱼体健康,游动自由。草鱼在实验室适应性养殖1 周后,进行模型构建。4.活性追踪试验(1)虫体的收集。将严重感染小瓜虫的草鱼用MS-222麻醉后,迅速取鳃组织(尽量不携带血块)放置到经盛有灭菌水的平皿中,待放置1 小时后,用吸管吸取水体中游动的小瓜虫滋养体。将收集的滋
3、养体一部分放置于2 2 的培养箱中用于掠食体的培养,另一部分放置于1 2 孔细胞培养板中用于制备包囊。(2)体外杀掠食体药效试验。精确吸取上述制备的小瓜虫掠食体1 毫升,放入2 4 孔细胞培养板中,同时加入1 毫升不同浓度梯度的药液,并用吸54科学养鱼2023.6管吹匀,吹匀后放到2 2 培养箱中。之后,于用药后5 分钟和1、2、3、4 小时拿出培养板在显微镜上进行观察,并记录掠食体的死亡情况。小瓜虫纤毛不运动、虫体破裂等均视为虫体死亡,最高浓度组药物的DMSO量为对照组(该浓度的DMSO被证实对小瓜虫掠食体无毒),活性追踪试验以幼虫1 0 0%杀灭作为评价指标。(3)体外杀包囊药效试验。精确
4、吸取上述制备的小瓜虫包囊1 毫升(约含包囊3 0 个),放入到24孔细胞培养板中,同时加入1 毫升不同浓度梯度的药液,并用吸管吹匀,吹匀后放置到2 2 的培养箱中6 小时,小心倒掉药液,并重新加入新的灭菌的蒸馏水继续培养2 0 3 6 小时,显微观察包囊的死亡情况,并统计每个细胞孔中的掠食体的数量,每组试验设置3 个重复。包囊破裂或包囊未分裂(胞质不运动)视为死亡,活性追踪试验以包囊100%杀灭作为评价指标。(4)牛劳子杀虫活性成分追踪分离。前期研究表明牛劳子的杀虫活性部位为其正丁醇提取部分,故而继续对其进行杀虫活性追踪。取3 5 0.0 克牛子正丁醇提取浓缩物,湿法上柱,利用硅胶柱层析进行分
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