vitek使用培训.ppt
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1、CONTROL YOUR ENVIRONMENTVITEK新 一 代n n全自动化的微生物分析仪n n独特试卡设计n n简单、标准化方法n n可靠结果n n完整的统计功能新新 一一 代代 VITEKn简单的操作流程n操作人員重复性好n不同实验室可获重复性高的结果n符合质量保证体系VITEK检测流程检测流程开机程序开机程序1、顺序打开稳压器、不间断电源、打印机、显示器电源开关2、打开VITEK主机顶上的小门,启动箱内大开关(POWER),启动大开关旁的小开关(Battery)3、启动电脑主机开关,屏幕会出现“LOGIN:”画面,这时输入:“supv”,回车(supv四字母为小写),屏幕出现“Pa
2、ssword”,键入“supv”,回车(supv四字母为小写,且输入的supv四个英文字母不会显示在屏幕上。)4、稍候出现主菜单,接着出现一红色警告视窗,点击红色视窗左下方的OK键将该视窗关闭。5、鼠标左键点击左上角主菜单的VITEK键,进入VITEK视窗,点击READER键,选择Status菜单,点击PROCERSSON6、鉴定仪状态由“NOTPROCESSING”变为“PROCESSING,NEXTREADAATXX:XX”,表明开机成功。VITEKVITEK 开机程序关机程序关机程序1、检查卡片状态:在VITEKSTATUS窗,查看A、B、C、D架的所有位置卡片的状况,确定所有卡片的鉴定
3、实验已完成,并已打印出结果。2、终止检测程序:在VITEKSTATUS视窗点击READER,选择Status,点击PROCESSOFF,留意检测仪状态由“Processing”变为“NotProcessing”,表示已停止鉴定程序。切记:一定先执行PROCESSOFF程序,才可以执行关机程序!3、执行关机程序:退出到MainMenu(主菜单),点击SYSTEM,选择“SYSTEMMAINTENANCE”,选择“STOPTHESYSTEM”,点击左下方的EXECUTE键,系统完成关机程序后,关闭电脑主机开关(白色)。4、按下列顺序关闭外围设备:1)VITEK孵育/检测箱(打开检测器顶上的小门,关
4、闭Battery开关,关闭POWER开关)2)显示器;3)打印机;4)不间断电源(有圆圈标记的小按钮);5)稳压器VITEKVITEK 关机程序n nGNI+卡片l l肠道杆菌肠道杆菌l l非发酵菌非发酵菌n nNFC 卡片l l非发酵菌非发酵菌n nANI 卡片l l梭菌属梭菌属l l拟杆菌属拟杆菌属试试 卡卡 种种 类类nYBC 卡片酵母菌(念珠菌)nBAC 卡片芽胞杆菌nGPI 卡片葡萄球菌链球菌李斯特菌、棒状杆菌VITEKn nBIO 卡片l l液体內的细菌计数液体內的细菌计数 VITEK其其 他他 试试 卡卡定向试验定向试验革兰氏染色接触酶试验氧化酶试验革兰氏染色革兰氏染色原理原理:
5、检查细菌细胞壁的渗透性检查细菌细胞壁的渗透性单层厚钛聚糖细胞壁单层厚钛聚糖细胞壁不紧密外壁层不紧密外壁层(透乙醇透乙醇)+薄内壁层钛聚糖薄内壁层钛聚糖 革兰氏阳性革兰氏阴性-在细菌学里最普遍的染色方法革兰氏染色液革兰氏染色液步骤G()G()-染色前,所有细胞是透明的-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫-用番红液复染,革兰氏阴性菌呈粉红色,革兰氏阳性菌呈兰紫色COLOR GRAM 2 革兰氏染色剂革兰氏染色剂革兰氏阳性 紫色细菌紫色细菌革兰氏阴性 粉红色细菌粉红色细菌Color Gram 2 革兰氏染色剂革兰氏染色剂即可用试剂-R1=草酸盐-结晶紫溶液-R2=稳定化卢
6、哥氏-PVP液-R3=脱色剂-R4=番红液技术要点-使用新鲜培养细菌(24-48小时)Color Gram 2 染色剂染色剂试剂组成 R1=240 ml x 1 R2=240 ml x 1 R3=240 ml x 1 R4=240 ml x 1所有试剂带喷咀於18-25C储存革兰氏染色液革兰氏染色液 2(Color Gram 2)-特性m稳定化的碘液PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因碘挥发而变质,同时也增强了媒染效果。更容易分别G()及G(-)菌m高质量的结晶紫和番红,无沉淀。接触酶试验接触酶试验接触酶试验接触酶试验用于分辨葡萄球菌及链球菌用于分辨葡萄球菌及链球菌葡萄球菌革兰氏阳性球菌链球菌
7、接触酶接触酶-+接触酶H2O2 H2O +O2接触酶试验接触酶试验传统方法传统方法:=接触酶+=接触酶+原理原理:不得用于血平板的菌落上(红血菌反应)试管法玻片法H2O2O2菌落接触酶显色剂接触酶显色剂玻片法试管法ID Color Catalase 接触酶试剂接触酶试剂容许於平板容许於平板(包括血平板包括血平板)上作直接检测上作直接检测组成:-增稠剂:高粘度集中所产生的气泡,防止试剂扩散-Evans兰:兰色使结果更容易阅读-玻片法-直接在平板上测试ID COLOR CATALASE 接触酶试剂 玻片法玻片法:将待检菌落乳化於一滴试剂中 直接平板测试直接平板测试 :将一滴试剂直接滴於平板上的菌落
8、步骤步骤:或或即时产生气泡(5 秒内)代表阳性结果。鉴定用接触酶显色剂鉴定用接触酶显色剂接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱阳性结果,这个试验没有得到充分应用。ID Color Catalase产品规格氧化酶试验氧化酶试验氧化酶试验用于分辨肠道杆菌及非发酶菌用于分辨肠道杆菌及非发酶菌非发酵菌革兰氏阴性杆菌阳道杆菌氧化酶氧化酶-+氧化酶试验氧化酶试验-原 理:TMPD氧化 TMPD氧 化 酶(TMPD=2甲基一对一苯撑二胺)货号:55922纸片:浸泡饱和TMPD储存:2-8C於暗处有效期:1年组成:2x30片小瓶装 纸片货号:70460储存:2-30C於暗处组成:1个小瓶 液体
9、试剂(深紫色)(透明)氧化酶试验氧化酶试验2 2 个方法个方法:纸片法纸片法 液体试剂液体试剂 氧化酶纸片法氧化酶纸片法VITEK 方法方法 菌 种接种物的混浊度鉴 定 卡培 养 条 件革兰氏阴性杆菌1McF革兰氏阴性菌(GNI+)标记:氧化酶Vitek35.50 C葡萄球菌0.5 McF革兰氏阳性菌(GPI)标记:接触酶、凝固酶Vitek35.50 C链球菌0.5 McF革兰氏阳性菌(GPI)标记:溶血Vitek35.50 C酵母菌2 McF(YBC)注:48h培养其它培养箱30 0C,24-48h非发酵杆菌1 McF非发酵菌(NFC)Vitek35.50 C厌氧菌3 McF厌氧菌(ANI)
10、其它培养箱370 C,24-48h芽孢杆菌0.5 McF芽孢杆菌(BAC)注:550 C培养Vitek:35.50 C其它培养箱:550 C24 h样本操作步骤及注意部分 选取纯菌落 选取纯的菌落,若不纯需二次分纯 不可用含抑制剂的培养基,取菌落时不要取到培养基 培养时间不要太长,以免菌落老化,18hr至24hr 用0.45%盐水稀释 盐水用完后2-8C冷藏 盐水不可重复杀菌超过二次以上(121 C,15分钟)盐水及工具最好每隔二至三日杀菌一次 比浊测浓度 试管保持透明度从冷藏取出试卡,要先放在室温一段 活菌浓度准确,尽量缩短活菌停留在盐水的时间时间,直到温度平衡才将包装拆开填号码时要清晰,不
11、要填出界限 充填 吸管要弄紧 吸管接触样品部分尽量不要触及其他东西,防止污染 查看样本是否已经充填 封口 封口后,查看各个小池内是否有气泡 检查所有要填在试卡上的资料是否完整 放入培养箱/读数箱内放入前,查看培养/读数箱是否正在工作之中 将试卡放入最快被读数的架子内 箱门不要开启太久,以免箱内之温度降低培养箱后的风扇及下面之隔尘网需经常清理以防影响其散温效果,使读数箱温度过高革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌鉴定鉴定革兰氏阴性杆菌氧化酶+非发酵菌鉴NFC革兰氏阴性杆菌鉴定GNI+氧化酶-GNI+鉴定卡鉴定不了GNI+卡预期应用卡预期应用 n n革兰氏阴性杆菌鉴定(肠杆菌科Enterobacteria
12、ceae)n n非发酵革兰氏阴性杆菌鉴定氧化酶阳性(假单胞菌属Pseudomonas)n n发酵革兰氏阴性杆菌鉴定氧化酶阳性(弧菌科Vibrionaceae)GNI+试剂卡说明试剂卡说明资料分析资料分析n n GNI+卡放入读数器/孵育器后,在212小时可产生最后鉴定报告。n n在报告上提供每一生化反应结果,并列出二个最有可能的鉴定结果以及与之相应的标准化百分概率。n n在某些情况下系统不能正常地作出最后鉴定,这时在报告上会打印出一条解释或说明这一情况的信息。n n在在GNIGNI+卡中每一小时就测得一次读数并储存在卡中每一小时就测得一次读数并储存在VITEKVITEK计算计算机中直到最后报告
13、产生。机中直到最后报告产生。n n每一孔的百分变化值与其相应的阈值相比较,等于高于阈每一孔的百分变化值与其相应的阈值相比较,等于高于阈值为阳性反应值为阳性反应(+)(+)。反之,低于阈值,则为阴性反应。反之,低于阈值,则为阴性反应(-)(-)。到下一次读数后百分变化值再一次进行计算,并与阈值相到下一次读数后百分变化值再一次进行计算,并与阈值相比较。比较。n n对于脱羧酶孔试验结果必须将测定孔变化百分率减去阴性对于脱羧酶孔试验结果必须将测定孔变化百分率减去阴性对照孔变化百分率后才能确定。如果待测菌是一个不发酵对照孔变化百分率后才能确定。如果待测菌是一个不发酵葡萄的革兰氏阴性杆菌,乳糖反应孔要与两
14、个临界值相比葡萄的革兰氏阴性杆菌,乳糖反应孔要与两个临界值相比较,较低值用于确定较,较低值用于确定1%1%乳糖反应乳糖反应(LAC)LAC),较高值用于确定较高值用于确定10%10%乳糖反应乳糖反应(TLA)TLA)。氧化酶反应作为一个独立试验孔。氧化酶反应作为一个独立试验孔。GNI+试剂卡说明试剂卡说明阳性阳性/阴性阴性反应确定反应确定 n n确定细菌最后鉴定可能在28h后(葡萄糖发酵菌)或412h后(葡萄糖不发酵菌)作出。不管怎样,如果葡萄糖孔在8h后变为阳性,均即可作出鉴定。GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴
15、定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定n n有些葡萄糖发酵菌要在6h后才能作出鉴定。这些菌是:嗜水气单胞、豚鼠气单胞、维罗纳气单胞温和生物变种、克吕沃尔氏菌属、美人鱼发光杆菌、痢疾志贺氏菌、解藻朊酸弧菌、河流弧菌、创伤弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌和中间耶尔森氏菌。n n有些葡萄糖非发酵菌要在12h后才能作出鉴定。这些菌是:推测为鲁氏/琼氏不动杆菌、木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种、支气管炎博德氏菌、鼻疽伯克霍尔德氏菌、假鼻疽伯克霍尔德氏菌、产吲哚黄杆菌(吲哚+)/泡囊短波单胞菌(吲哚)、脑膜脓毒性金黄杆菌(吲哚+)、气味黄杆菌、非发酵革兰氏阴性杆菌(不分解糖的和分解糖
16、的)、人苍白杆菌、门多萨假单胞菌、施氏假单胞菌、多食鞘氨醇杆菌和解藻朊酸弧菌(注意:有些解藻朊酸弧菌的菌株在GNI+卡中不发酵葡萄糖)。GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定n n一旦首选细菌通过相似筛选,标准化百分概率需经检查是一旦首选细菌通过相似筛选,标准化百分概率需经检查是否大于或等于否大于或等于90%90%,如果小于,如果小于90%90%,卡片应继续培养和鉴定。,卡片应继续培养和鉴定。n n只有当首选细菌既通过相似值筛选,也通过了标准百分概只有当首选细菌既通过相似值筛选,也
17、通过了标准百分概率的检查,最后鉴定报告才可能产生。率的检查,最后鉴定报告才可能产生。n n如果首选菌相似绝对值仍小于相似筛选值,则在报告单上如果首选菌相似绝对值仍小于相似筛选值,则在报告单上会出现会出现“unidentified organism”unidentified organism”(不能鉴定的细菌)。当不能鉴定的细菌)。当首选菌的绝对相似值通过筛选,首选和次选菌菌名以及相首选菌的绝对相似值通过筛选,首选和次选菌菌名以及相应的标准化概率就会打印出来。应的标准化概率就会打印出来。GNI+试剂卡说明试剂卡说明特殊信息特殊信息特殊信息特殊信息 几种典型的特殊信息可能会出现在GNI+卡的最后鉴
18、定报告单上。这些特殊信息解释为什么鉴定不成功,或阐述合格鉴定的标准。GNI+试剂卡说明试剂卡说明特殊信息特殊信息特殊信息特殊信息 由信息代替一个由信息代替一个鉴鉴定定结结果,包括下面二条:果,包括下面二条:1 1 Non-viable organismNon-viable organism(没有活的细菌)(没有活的细菌)。在在GNIGNI+卡中全部生化卡中全部生化试验是阴性。可按如下步骤从卡第三孔中(试验是阴性。可按如下步骤从卡第三孔中(#3#3)吸出样本转种)吸出样本转种在血液琼脂平皿检查细菌的活性。在血液琼脂平皿检查细菌的活性。a)a)异丙酵或异丙酵或70%70%酒清消毒卡片复盖膜酒清消毒
19、卡片复盖膜,并使其自然干燥。并使其自然干燥。b)b)用无菌加样头安装在加样器上用无菌加样头安装在加样器上,或或Im1Im1无菌注射器,穿过无菌注射器,穿过膜吸出膜吸出0.1-0.20.1-0.2mlml样品。样品。c c)样品加于血琼脂上划线,置样品加于血琼脂上划线,置35-372435-3724小时培养。小时培养。GNI+试剂卡说明试剂卡说明特殊信息特殊信息特殊信息特殊信息2 2 UnidentifiedUnidentifiedOrganismOrganism(不不能能鉴鉴定定的的细细菌菌):在在GNIGNI+卡卡中中试试验验结结果果不不能能充充分分相相似似数数据据库库中中任任何何一一个个种
20、种或或属属,因因此此不不能得到最后鉴定结果。在以下几种情况能产生这一信息:能得到最后鉴定结果。在以下几种情况能产生这一信息:a)a)太太多多的的阳阳性性结结果果。通通常常出出现现在在接接种种物物是是混混合合菌菌株株或或 在在试试验验孔孔中中有有气气泡泡。可可从从卡卡片片第第3 3孔孔吸吸出出样样品品于于5%5%绵绵羊羊血血液液琼琼脂脂平皿或其他合适的培养基。平皿或其他合适的培养基。b)b)太太少少阳阳性性结结果果。这这常常常常由由于于所所配配制制菌菌悬悬液液浓浓度度低低于于接接种种所所要要求求的的浓浓度度(不不在在VITEKVITEK比比浊浊计计的的适适当当色色区区内内)或或由由于于培培养物过
21、于陈旧菌龄超过养物过于陈旧菌龄超过2424小时而使降低或失去代谢活力。小时而使降低或失去代谢活力。c)c)待检菌是罕见特殊生物型或种,不包括在现有数据库中。待检菌是罕见特殊生物型或种,不包括在现有数据库中。GNI+试剂卡说明试剂卡说明限定信息限定信息限定信息限定信息n nGoodConfidence,MarginalSeparation(好的可信性但难于区分):生化反应结果同时相似于数据库中两个菌,并且产生可接受的绝对相似值。但二者间难于区分,要外加一些试验进一步确定其最后鉴定(技术手册GNI+表4)n nQuestionable 可疑的生物型(Biopattern):GNI+卡的生化试验结果
22、不典型,勉强相似于数据库中两个种或属。分离鉴定结果可能是GNI+鉴定报告上未列出的第三种菌(taxon)。GNI+试剂卡说明试剂卡说明限定信息限定信息限定信息限定信息n nSerology Confirmation Required(需要用血清学方法证实)。生化鉴定结果需要血清学方法确认。当生化鉴定结果需要血清学方法确认。当GNIGNI+卡鉴定报告的首选菌(或次选菌概率百分值大于卡鉴定报告的首选菌(或次选菌概率百分值大于10%10%)是下列细菌时,在最终报告中会出现这一信息:)是下列细菌时,在最终报告中会出现这一信息:亚利桑那沙门氏菌(亚利桑那沙门氏菌(Salmonella aerizonae
23、Salmonella aerizonae)沙门氏菌某种(沙门氏菌某种(Salmonella speciesSalmonella species)伤寒沙门氏菌(伤寒沙门氏菌(Salmonella typhiSalmonella typhi)痢疾志贺氏菌(痢疾志贺氏菌(Shigella dysensteriaeShigella dysensteriae)宋内氏痢疾杆菌(宋内氏痢疾杆菌(Shigella sonneiShigella sonnei)志贺氏菌属某种志贺氏菌属某种(Shigella species)Shigella species)霍乱弧菌霍乱弧菌(Vibrio cholerae)Vib
24、rio cholerae)GNI+试剂卡说明试剂卡说明限定信息限定信息限定信息限定信息n nConfirm with 6.5%NaCl(6.5%NaCl证实试验)。当GNI+卡中最后鉴定报告首选菌是河流弧菌(或次选菌标准化百分概率大于10%时)报告上会出现这条信息。某些气单胞菌属的菌种会被误鉴定为河流弧菌肯定的鉴别试验是用6.5%NaCl生长,河流弧菌6.5%NaCl生长阳性,而气单胞菌6.5%NaCl生长阴性。GNI+试剂卡说明试剂卡说明补充信息补充信息补充信息补充信息n n在技术手册GNI+卡片资料的表4中,列出了出现GoodConfidence,MarginalSeparation信息该
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