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CONTROL YOUR ENVIRONMENTVITEK新 一 代n n全自动化的微生物分析仪n n独特试卡设计n n简单、标准化方法n n可靠结果n n完整的统计功能新新 一一 代代 VITEKn简单的操作流程n操作人員重复性好n不同实验室可获重复性高的结果n符合质量保证体系VITEK检测流程检测流程开机程序开机程序1、顺序打开稳压器、不间断电源、打印机、显示器电源开关2、打开VITEK主机顶上的小门，启动箱内大开关（POWER），启动大开关旁的小开关（Battery）3、启动电脑主机开关，屏幕会出现“LOGIN:”画面，这时输入：“supv”，回车（supv四字母为小写），屏幕出现“Password”，键入“supv”，回车（supv四字母为小写，且输入的supv四个英文字母不会显示在屏幕上。）4、稍候出现主菜单，接着出现一红色警告视窗，点击红色视窗左下方的OK键将该视窗关闭。5、鼠标左键点击左上角主菜单的VITEK键，进入VITEK视窗，点击READER键，选择Status菜单，点击PROCERSSON6、鉴定仪状态由“NOTPROCESSING”变为“PROCESSING，NEXTREADAATXX：XX”，表明开机成功。VITEKVITEK 开机程序关机程序关机程序1、检查卡片状态：在VITEKSTATUS窗，查看A、B、C、D架的所有位置卡片的状况，确定所有卡片的鉴定实验已完成，并已打印出结果。2、终止检测程序：在VITEKSTATUS视窗点击READER，选择Status，点击PROCESSOFF，留意检测仪状态由“Processing”变为“NotProcessing”，表示已停止鉴定程序。切记：一定先执行PROCESSOFF程序，才可以执行关机程序！3、执行关机程序：退出到MainMenu(主菜单)，点击SYSTEM，选择“SYSTEMMAINTENANCE”，选择“STOPTHESYSTEM”，点击左下方的EXECUTE键，系统完成关机程序后，关闭电脑主机开关（白色）。4、按下列顺序关闭外围设备：1）VITEK孵育/检测箱(打开检测器顶上的小门,关闭Battery开关,关闭POWER开关)2）显示器；3)打印机；4)不间断电源（有圆圈标记的小按钮）；5)稳压器VITEKVITEK 关机程序n nGNI+卡片l l肠道杆菌肠道杆菌l l非发酵菌非发酵菌n nNFC 卡片l l非发酵菌非发酵菌n nANI 卡片l l梭菌属梭菌属l l拟杆菌属拟杆菌属试试 卡卡 种种 类类nYBC 卡片酵母菌（念珠菌）nBAC 卡片芽胞杆菌nGPI 卡片葡萄球菌链球菌李斯特菌、棒状杆菌VITEKn nBIO 卡片l l液体內的细菌计数液体內的细菌计数 VITEK其其 他他 试试 卡卡定向试验定向试验革兰氏染色接触酶试验氧化酶试验革兰氏染色革兰氏染色原理原理:检查细菌细胞壁的渗透性检查细菌细胞壁的渗透性单层厚钛聚糖细胞壁单层厚钛聚糖细胞壁不紧密外壁层不紧密外壁层(透乙醇透乙醇)+薄内壁层钛聚糖薄内壁层钛聚糖 革兰氏阳性革兰氏阴性-在细菌学里最普遍的染色方法革兰氏染色液革兰氏染色液步骤G()G()-染色前，所有细胞是透明的-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫-用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色COLOR GRAM 2 革兰氏染色剂革兰氏染色剂革兰氏阳性 紫色细菌紫色细菌革兰氏阴性 粉红色细菌粉红色细菌Color Gram 2 革兰氏染色剂革兰氏染色剂即可用试剂-R1=草酸盐-结晶紫溶液-R2=稳定化卢哥氏-PVP液-R3=脱色剂-R4=番红液技术要点-使用新鲜培养细菌(24-48小时)Color Gram 2 染色剂染色剂试剂组成 R1=240 ml x 1 R2=240 ml x 1 R3=240 ml x 1 R4=240 ml x 1所有试剂带喷咀於18-25C储存革兰氏染色液革兰氏染色液 2(Color Gram 2)-特性m稳定化的碘液PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因碘挥发而变质，同时也增强了媒染效果。更容易分别G()及G(-)菌m高质量的结晶紫和番红，无沉淀。接触酶试验接触酶试验接触酶试验接触酶试验用于分辨葡萄球菌及链球菌用于分辨葡萄球菌及链球菌葡萄球菌革兰氏阳性球菌链球菌接触酶接触酶-+接触酶H2O2 H2O +O2接触酶试验接触酶试验传统方法传统方法:=接触酶+=接触酶+原理原理:不得用于血平板的菌落上(红血菌反应)试管法玻片法H2O2O2菌落接触酶显色剂接触酶显色剂玻片法试管法ID Color Catalase 接触酶试剂接触酶试剂容许於平板容许於平板(包括血平板包括血平板)上作直接检测上作直接检测组成:-增稠剂:高粘度集中所产生的气泡,防止试剂扩散-Evans兰:兰色使结果更容易阅读-玻片法-直接在平板上测试ID COLOR CATALASE 接触酶试剂 玻片法玻片法:将待检菌落乳化於一滴试剂中 直接平板测试直接平板测试 :将一滴试剂直接滴於平板上的菌落步骤步骤:或或即时产生气泡(5 秒内)代表阳性结果。鉴定用接触酶显色剂鉴定用接触酶显色剂接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱阳性结果，这个试验没有得到充分应用。ID Color Catalase产品规格氧化酶试验氧化酶试验氧化酶试验用于分辨肠道杆菌及非发酶菌用于分辨肠道杆菌及非发酶菌非发酵菌革兰氏阴性杆菌阳道杆菌氧化酶氧化酶-+氧化酶试验氧化酶试验-原 理:TMPD氧化 TMPD氧 化 酶(TMPD=2甲基一对一苯撑二胺)货号:55922纸片:浸泡饱和TMPD储存:2-8C於暗处有效期:1年组成:2x30片小瓶装 纸片货号:70460储存:2-30C於暗处组成:1个小瓶 液体试剂(深紫色)(透明)氧化酶试验氧化酶试验2 2 个方法个方法:纸片法纸片法 液体试剂液体试剂 氧化酶纸片法氧化酶纸片法VITEK 方法方法 菌 种接种物的混浊度鉴 定 卡培 养 条 件革兰氏阴性杆菌1McF革兰氏阴性菌(GNI+)标记：氧化酶Vitek35.50 C葡萄球菌0.5 McF革兰氏阳性菌(GPI)标记：接触酶、凝固酶Vitek35.50 C链球菌0.5 McF革兰氏阳性菌(GPI)标记：溶血Vitek35.50 C酵母菌2 McF(YBC)注：48h培养其它培养箱30 0C，24-48h非发酵杆菌1 McF非发酵菌(NFC)Vitek35.50 C厌氧菌3 McF厌氧菌(ANI)其它培养箱370 C，24-48h芽孢杆菌0.5 McF芽孢杆菌(BAC)注：550 C培养Vitek：35.50 C其它培养箱：550 C24 h样本操作步骤及注意部分 选取纯菌落 选取纯的菌落，若不纯需二次分纯 不可用含抑制剂的培养基，取菌落时不要取到培养基 培养时间不要太长，以免菌落老化，18hr至24hr 用0.45%盐水稀释 盐水用完后2-8C冷藏 盐水不可重复杀菌超过二次以上（121 C，15分钟）盐水及工具最好每隔二至三日杀菌一次 比浊测浓度 试管保持透明度从冷藏取出试卡，要先放在室温一段 活菌浓度准确，尽量缩短活菌停留在盐水的时间时间，直到温度平衡才将包装拆开填号码时要清晰，不要填出界限 充填 吸管要弄紧 吸管接触样品部分尽量不要触及其他东西，防止污染 查看样本是否已经充填 封口 封口后，查看各个小池内是否有气泡 检查所有要填在试卡上的资料是否完整 放入培养箱/读数箱内放入前，查看培养/读数箱是否正在工作之中 将试卡放入最快被读数的架子内 箱门不要开启太久，以免箱内之温度降低培养箱后的风扇及下面之隔尘网需经常清理以防影响其散温效果，使读数箱温度过高革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌鉴定鉴定革兰氏阴性杆菌氧化酶+非发酵菌鉴NFC革兰氏阴性杆菌鉴定GNI+氧化酶-GNI+鉴定卡鉴定不了GNI+卡预期应用卡预期应用 n n革兰氏阴性杆菌鉴定(肠杆菌科Enterobacteriaceae)n n非发酵革兰氏阴性杆菌鉴定氧化酶阳性(假单胞菌属Pseudomonas)n n发酵革兰氏阴性杆菌鉴定氧化酶阳性(弧菌科Vibrionaceae)GNI+试剂卡说明试剂卡说明资料分析资料分析n n GNI+卡放入读数器/孵育器后，在212小时可产生最后鉴定报告。n n在报告上提供每一生化反应结果，并列出二个最有可能的鉴定结果以及与之相应的标准化百分概率。n n在某些情况下系统不能正常地作出最后鉴定，这时在报告上会打印出一条解释或说明这一情况的信息。n n在在GNIGNI+卡中每一小时就测得一次读数并储存在卡中每一小时就测得一次读数并储存在VITEKVITEK计算计算机中直到最后报告产生。机中直到最后报告产生。n n每一孔的百分变化值与其相应的阈值相比较，等于高于阈每一孔的百分变化值与其相应的阈值相比较，等于高于阈值为阳性反应值为阳性反应(+)(+)。反之，低于阈值，则为阴性反应。反之，低于阈值，则为阴性反应(-)(-)。到下一次读数后百分变化值再一次进行计算，并与阈值相到下一次读数后百分变化值再一次进行计算，并与阈值相比较。比较。n n对于脱羧酶孔试验结果必须将测定孔变化百分率减去阴性对于脱羧酶孔试验结果必须将测定孔变化百分率减去阴性对照孔变化百分率后才能确定。如果待测菌是一个不发酵对照孔变化百分率后才能确定。如果待测菌是一个不发酵葡萄的革兰氏阴性杆菌，乳糖反应孔要与两个临界值相比葡萄的革兰氏阴性杆菌，乳糖反应孔要与两个临界值相比较，较低值用于确定较，较低值用于确定1%1%乳糖反应乳糖反应(LAC)LAC)，较高值用于确定较高值用于确定10%10%乳糖反应乳糖反应(TLA)TLA)。氧化酶反应作为一个独立试验孔。氧化酶反应作为一个独立试验孔。GNI+试剂卡说明试剂卡说明阳性阳性/阴性阴性反应确定反应确定 n n确定细菌最后鉴定可能在28h后（葡萄糖发酵菌）或412h后（葡萄糖不发酵菌）作出。不管怎样，如果葡萄糖孔在8h后变为阳性，均即可作出鉴定。GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定n n有些葡萄糖发酵菌要在6h后才能作出鉴定。这些菌是：嗜水气单胞、豚鼠气单胞、维罗纳气单胞温和生物变种、克吕沃尔氏菌属、美人鱼发光杆菌、痢疾志贺氏菌、解藻朊酸弧菌、河流弧菌、创伤弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌和中间耶尔森氏菌。n n有些葡萄糖非发酵菌要在12h后才能作出鉴定。这些菌是：推测为鲁氏/琼氏不动杆菌、木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种、支气管炎博德氏菌、鼻疽伯克霍尔德氏菌、假鼻疽伯克霍尔德氏菌、产吲哚黄杆菌（吲哚+）/泡囊短波单胞菌（吲哚）、脑膜脓毒性金黄杆菌（吲哚+）、气味黄杆菌、非发酵革兰氏阴性杆菌（不分解糖的和分解糖的）、人苍白杆菌、门多萨假单胞菌、施氏假单胞菌、多食鞘氨醇杆菌和解藻朊酸弧菌（注意：有些解藻朊酸弧菌的菌株在GNI+卡中不发酵葡萄糖）。GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定GNI+试剂卡说明试剂卡说明确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定确定细菌鉴定n n一旦首选细菌通过相似筛选，标准化百分概率需经检查是一旦首选细菌通过相似筛选，标准化百分概率需经检查是否大于或等于否大于或等于90%90%，如果小于，如果小于90%90%，卡片应继续培养和鉴定。，卡片应继续培养和鉴定。n n只有当首选细菌既通过相似值筛选，也通过了标准百分概只有当首选细菌既通过相似值筛选，也通过了标准百分概率的检查，最后鉴定报告才可能产生。率的检查，最后鉴定报告才可能产生。n n如果首选菌相似绝对值仍小于相似筛选值，则在报告单上如果首选菌相似绝对值仍小于相似筛选值，则在报告单上会出现会出现“unidentified organism”unidentified organism”（不能鉴定的细菌）。当不能鉴定的细菌）。当首选菌的绝对相似值通过筛选，首选和次选菌菌名以及相首选菌的绝对相似值通过筛选，首选和次选菌菌名以及相应的标准化概率就会打印出来。应的标准化概率就会打印出来。GNI+试剂卡说明试剂卡说明特殊信息特殊信息特殊信息特殊信息 几种典型的特殊信息可能会出现在GNI+卡的最后鉴定报告单上。这些特殊信息解释为什么鉴定不成功，或阐述合格鉴定的标准。GNI+试剂卡说明试剂卡说明特殊信息特殊信息特殊信息特殊信息 由信息代替一个由信息代替一个鉴鉴定定结结果，包括下面二条：果，包括下面二条：1 1 Non-viable organismNon-viable organism（没有活的细菌）（没有活的细菌）。在在GNIGNI+卡中全部生化卡中全部生化试验是阴性。可按如下步骤从卡第三孔中（试验是阴性。可按如下步骤从卡第三孔中（#3#3）吸出样本转种）吸出样本转种在血液琼脂平皿检查细菌的活性。在血液琼脂平皿检查细菌的活性。a)a)异丙酵或异丙酵或70%70%酒清消毒卡片复盖膜酒清消毒卡片复盖膜,并使其自然干燥。并使其自然干燥。b)b)用无菌加样头安装在加样器上用无菌加样头安装在加样器上,或或Im1Im1无菌注射器，穿过无菌注射器，穿过膜吸出膜吸出0.1-0.20.1-0.2mlml样品。样品。c c）样品加于血琼脂上划线，置样品加于血琼脂上划线，置35-372435-3724小时培养。小时培养。GNI+试剂卡说明试剂卡说明特殊信息特殊信息特殊信息特殊信息2 2 UnidentifiedUnidentifiedOrganismOrganism（不不能能鉴鉴定定的的细细菌菌）：在在GNIGNI+卡卡中中试试验验结结果果不不能能充充分分相相似似数数据据库库中中任任何何一一个个种种或或属属，因因此此不不能得到最后鉴定结果。在以下几种情况能产生这一信息：能得到最后鉴定结果。在以下几种情况能产生这一信息：a)a)太太多多的的阳阳性性结结果果。通通常常出出现现在在接接种种物物是是混混合合菌菌株株或或 在在试试验验孔孔中中有有气气泡泡。可可从从卡卡片片第第3 3孔孔吸吸出出样样品品于于5%5%绵绵羊羊血血液液琼琼脂脂平皿或其他合适的培养基。平皿或其他合适的培养基。b)b)太太少少阳阳性性结结果果。这这常常常常由由于于所所配配制制菌菌悬悬液液浓浓度度低低于于接接种种所所要要求求的的浓浓度度（不不在在VITEKVITEK比比浊浊计计的的适适当当色色区区内内）或或由由于于培培养物过于陈旧菌龄超过养物过于陈旧菌龄超过2424小时而使降低或失去代谢活力。小时而使降低或失去代谢活力。c)c)待检菌是罕见特殊生物型或种，不包括在现有数据库中。待检菌是罕见特殊生物型或种，不包括在现有数据库中。GNI+试剂卡说明试剂卡说明限定信息限定信息限定信息限定信息n nGoodConfidence,MarginalSeparation（好的可信性但难于区分）:生化反应结果同时相似于数据库中两个菌，并且产生可接受的绝对相似值。但二者间难于区分，要外加一些试验进一步确定其最后鉴定（技术手册GNI+表4）n nQuestionable 可疑的生物型(Biopattern):GNI+卡的生化试验结果不典型，勉强相似于数据库中两个种或属。分离鉴定结果可能是GNI+鉴定报告上未列出的第三种菌（taxon)。GNI+试剂卡说明试剂卡说明限定信息限定信息限定信息限定信息n nSerology Confirmation Required(需要用血清学方法证实)。生化鉴定结果需要血清学方法确认。当生化鉴定结果需要血清学方法确认。当GNIGNI+卡鉴定报告的首选菌（或次选菌概率百分值大于卡鉴定报告的首选菌（或次选菌概率百分值大于10%10%）是下列细菌时，在最终报告中会出现这一信息：）是下列细菌时，在最终报告中会出现这一信息：亚利桑那沙门氏菌（亚利桑那沙门氏菌（Salmonella aerizonaeSalmonella aerizonae）沙门氏菌某种（沙门氏菌某种（Salmonella speciesSalmonella species）伤寒沙门氏菌（伤寒沙门氏菌（Salmonella typhiSalmonella typhi）痢疾志贺氏菌（痢疾志贺氏菌（Shigella dysensteriaeShigella dysensteriae）宋内氏痢疾杆菌（宋内氏痢疾杆菌（Shigella sonneiShigella sonnei）志贺氏菌属某种志贺氏菌属某种(Shigella species)Shigella species)霍乱弧菌霍乱弧菌(Vibrio cholerae)Vibrio cholerae)GNI+试剂卡说明试剂卡说明限定信息限定信息限定信息限定信息n nConfirm with 6.5%NaCl(6.5%NaCl证实试验)。当GNI+卡中最后鉴定报告首选菌是河流弧菌（或次选菌标准化百分概率大于10%时）报告上会出现这条信息。某些气单胞菌属的菌种会被误鉴定为河流弧菌肯定的鉴别试验是用6.5%NaCl生长，河流弧菌6.5%NaCl生长阳性，而气单胞菌6.5%NaCl生长阴性。GNI+试剂卡说明试剂卡说明补充信息补充信息补充信息补充信息n n在技术手册GNI+卡片资料的表4中，列出了出现GoodConfidence,MarginalSeparation信息该部分中需要进行外加试验的名称和相应的结果（表中的数字为各菌种该生化试验的阳性百分率）。GNI+试剂卡说明试剂卡说明补充信息补充信息补充信息补充信息n n出现下列信息需参阅技术手册，按照手册提供的补充试验将它们区分开：Enterobacter cloacae(motility+)/asburiae(motility-)Enterobacter cloacae(motility+)/asburiae(motility-)Klebsiella Pneumoniae(indole-)/osytoca(indole+)Klebsiella Pneumoniae(indole-)/osytoca(indole+)Proteus vulgaris(indole+)/penneri(indole-)Proteus vulgaris(indole+)/penneri(indole-)Chryseobacterium indologenes(indole+)/Brevundimonas vesicularis Chryseobacterium indologenes(indole+)/Brevundimonas vesicularis(indole-)(indole-)GNI+试剂卡说明试剂卡说明补充信息补充信息补充信息补充信息n nGNI+鉴定报告中偶尔会出现如下的带有编号的注释（共18项）：Note 1 Aeromonas hydrophila/caviae 出现这些信息时，请参阅技术手册如何处理如何处理GNI鉴定报告中的鉴定报告中的“Unidentified Organism”n n什么情况下系统会打印出“unidentifiedorganism”n n造成“unidentifiedorganism”的原因 n n细菌分类原理 n n表现形式和处理方式 n nGNI卡所能鉴定的主要属种双岐检索表 n nGNI卡双岐检索表使用方法：什么情况下系统会打印出什么情况下系统会打印出“unidentified organism”n nVITEK系统分类原理是采用数值分类法，其“相似性”，即当待检细菌在鉴定卡上的反应结果所得出和生物数码与数据库内现存已知的资料无一相似的时候，系统就会打印出“unidentifiedorganism”。造成造成“unidentified organism”的原因的原因 n n待检细菌不是单一菌株。n n反应卡生化小孔有气泡严重干扰比色。n n菌液浓度太淡或菌令太老。n n菌悬液不均匀。n n可能某些生化反应孔的阈值过高或过低。n n某些菌株在现有的30项生化试验用数值分类不能成功。n n罕见生物新种或不典型菌株，数据库缺乏资料 细菌分类原理细菌分类原理 n n目目前前广广泛泛采采用用的的细细菌菌分分类类方方法法有有二二种种，即即传传统统分分类类法法和和数数值分类法。值分类法。n n传传统统分分类类法法是是按按生生物物的的共共性性和和特特性性进进行行分分门门别别类类。该该法法的的基基本本原原理理是是将将生生物物的的基基本本性性质质分分为为主主要要的的和和次次要要的的，然然后后按按主主次次顺顺序序一一级级一一级级地地分分下下去去直直到到最最小小区区分分。双双岐岐检检索索图图表表就就是是根根据据这这一一原原理理制制成成的的。由由于于采采用用偏偏重重性性鉴鉴定定原原则则，因因此此在在传传统统分分类类时时所所需需的的生生化化试试验验相相对对较较少少，但但各各项项试试验验的鉴别力强。的鉴别力强。n n数数值值分分类类法法以以“等等重重要要原原则则”为为理理论论基基础础，认认为为细细菌菌的的基基本本特特征征要要同同等等对对待待，全全面面分分析析，不不分分主主次次地地做做总总体体比比较较，进进而而判判断断各各种种间间的的亲亲远远程程度度。应应用用数数值值分分类类时时为为了了充充分分反反映映出出细细菌菌的的基基本本特特征征，要要研研究究多多方方面面的的生生物物学学性性质质。一一般般需需选选择择100100200200项项生生理理生生化化指指标标，逐逐一一进进行行比比较较才才有有分分类类学意义。学意义。细菌分类原理细菌分类原理n nVITEK系统采用数值分类原理，选用30项生化试验，所以在某些情况下不能得到分类结果是可以理解的。在排除一切操作因素以外，在原有生化特征的基础上，根据传统分类原则选择主要生化特征进行传统分类是可行的。造成造成“unidentified organism”的的表现形式和处理方式表现形式和处理方式 n n鉴定卡生化反应模式呈现太多的阳性反应或不规则的反应模式。这种情况常常由于待检菌株不纯或有严重气泡而造成。n n从第三孔生长对照中吸出菌悬液接种于血琼脂平皿上，分区划线分离出单个菌落后，待第二天再作鉴定。当气泡不严重时，但菌株是单一的情况下可采用目测的方法判断反应结果，然后根据TechnicalBulletins中生化鉴定表得出最后鉴定结果。造成造成“unidentified organism”的的表现形式和处理方式表现形式和处理方式n n鉴定卡内30项生化反应呈现太少的阳性结果。n n菌悬液太淡或菌令太老是造成这种状况的基本原因。遇此情况，首先从生长对照孔吸出菌悬液分离在血琼脂或中国兰培养基上，3516-24小时再配制合适菌悬液重作鉴定。对葡萄糖氧化的或不分解的G阴性杆菌应配制2个麦氏单位菌悬液。造成造成“unidentified organism”的的表现形式和处理方式表现形式和处理方式n n菌悬液不均匀，常发生于待检菌为不易乳化的粗糙型细菌。对于这种类型细菌可配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1-2分钟1000转/分，然后取上清液比浊调节到所需的浓度。造成造成“unidentified organism”的的表现形式和处理方式表现形式和处理方式n n待检菌菌落形态特殊，涂片染色反应不定，在保证菌株单一，操作合格的前提下应考虑是一种新的生物型或一种不典型菌株，取新鲜分离菌落，常规手段加做必要生化试验用传统分类法作出分类。造成造成“unidentified organism”的的表现形式和处理方式表现形式和处理方式n n某些菌株反应模式非常典型的同某一分类单位相似，但是，系统仍会在报告中打出“unidentifiedorganism”。遇此情况可不必增加任何生化试验，用传统分类法，参照双岐检索表作出分类。造成造成“unidentified organism”的的表现形式和处理方式表现形式和处理方式n n当同一种重复多次由于相同的某几项生化反应不符而导致“unidentifiedorganism”应考虑这几项生化试验的值是否偏高或偏低现象。应立即打印出raw和rpcts资料进行分析并提供给厂家作为改阈值的依据。GNI卡所能鉴定的主要属种双岐卡所能鉴定的主要属种双岐检索表检索表 n n表I.氧化酶-，葡萄糖发酵的革兰氏阴性杆菌双岐检索表。此表主要用于肠杆菌科的细菌。n n表II.氧化酶+，葡萄糖发酵的革兰氏阴性杆菌双岐检索表。此表主要用于弧菌科各属细菌鉴定。n n表III.氧化酶+或-，葡萄糖氧化或不分解革兰氏阴性杆菌双岐检索表。此表主要用于非发酵的革兰氏阴性杆菌的鉴定GNI卡双岐检索表使用方法：卡双岐检索表使用方法：n n首先从反应模式中OXI（氧化酶），OFG及GLU（葡萄糖O/F），三孔反应确定应查哪一双岐检索表。n n根据原有生化反应表中找出检索表中箭头标出的生化反应，并按照符合的路线继续往下查阅直到分离最小区分单位。n n遇到同时用二项生化反应来鉴别的地方，如有一项不符合，可暂以一项为依据再往下进行。n n多处不能相符的细菌应查阅“raw”资料并用常规法重复该试验后再作决定，避免计算机读数错误。GNI GNI 卡卡接种方法接种方法培养基=TSA+5%羊血MacConkey琼脂-EMB1.8mlVitek溶液1、比浊：1 MacF(仪器兰色范围内)2、接种GNI+鉴定卡3、记录：氧化酶试验（涂黑小圆圈）Vitek培养箱在2-8h内出结果(非发酵革兰氏阴性菌4-12h)GNI 及 GNS 卡的操作步骤 样本 样本作划线培养分纯 培养时间18-24hr，不要超过，以防老化 分纯菌落 革兰氏染色实验确定是革兰氏阴性菌 氧化酶试验 稀释比浊 菌落放入1.8ml盐水内均匀，调浓度1McFarland(蓝色)最好用电子比浊仪量度 鉴定试验 药敏试验 从菌液抽取50 l放入使馆内 如氧化酶试验阳性，将卡片上圆圈涂黑 加入1.8ml盐水均匀 氧化酶试验阴性，则不用涂黑 卡片如GNI卡片一样涂黑 充填 封口 放入培养箱/读数箱内 放入最快被读数的架子上 GNI及GNS要放在同一个架子上l l接种前：接种前：如果测定菌类似非发酵杆菌如果测定菌类似非发酵杆菌(即生长缓慢，通常氧即生长缓慢，通常氧化酶阳性成极小菌落或需要化酶阳性成极小菌落或需要4848h h才能得到可用菌落的话则才能得到可用菌落的话则接种量应增加至接种量应增加至2 2McFMcF。l l接种后：接种后：在接种和培养之间的时间不要超过在接种和培养之间的时间不要超过2020分钟。分钟。GNI GNI 卡注意事项卡注意事项n n非发酵革兰氏阴性芽孢杆菌不能产生足够的阳性结果(未定位杆菌)。其鉴定可用非发酵菌鉴卡（NFC）或用不发酵葡萄糖的革兰氏阴性杆菌所用的其它常规的生化测定。n n对于不能鉴定的菌，可查阅技术手册中的双歧检索表GNI GNI 卡结果解释卡结果解释NFC卡预期应用卡预期应用 n n鉴定非发酵革兰氏阴性杆菌鉴定非发酵革兰氏阴性杆菌根据对某些化学底物作为唯一碳源的的同化作用根据对某些化学底物作为唯一碳源的的同化作用n n对对GNIGNI鉴定卡的主要补充测定鉴定卡的主要补充测定可鉴定没有合适鉴定卡的菌或用可鉴定没有合适鉴定卡的菌或用GNI+GNI+鉴定卡鉴定不了的菌鉴定卡鉴定不了的菌n n专门用于工业微生物的新产品专门用于工业微生物的新产品包括环境菌株的数据库包括环境菌株的数据库不只适用于临床不只适用于临床有补充实验资料有补充实验资料(SRF)SRF)NFC NFC 卡卡接种方法接种方法培养基=TSA+5%羊血1.8mlVitek溶液1、比浊：1 MacF(仪兰色范围内)2、接种NFC鉴定卡Vitek培养箱在6-8h内出结果革兰氏阴性/氧化酶阳性的杆菌革兰氏阳性革兰氏阳性菌（非芽孢杆菌）菌（非芽孢杆菌）鉴定鉴定GPIGPIn n革兰氏阳性球菌接触酶阳性：葡萄球菌接触酶阴性：链球菌n n李斯特氏菌属(Listeria)和棒状杆菌(Corynebacterium)一些种GPI GPI 卡卡接种方法接种方法培养基=TSA+5%羊血1.8mlVitek溶液1、比浊：0.5MacF(红色范围内)2、记录：接触酶、凝固酶/溶血3、接种GPI鉴定卡Vitek培养箱在2-15h内出结果GPI 及 GPS 卡的操作步骤 样本 样本作划线培养分纯 培养时间18-24hr 分纯菌落 革兰氏染色确定是革兰氏阳性菌 接触酶试验 接触酶阳性，作凝固酶试验，接触酶阴性，作溶血酶试验 稀释比浊 挑纯菌落放入1.8ml盐水，调浓度0.5McFarland(红色)最好用电子比色器量度 鉴定试验 药敏试验从菌液取200 l放入试管内如接触酶试验是阳性，将卡片上圆圈涂黑 加入1.8ml盐水均匀如凝固酶阳性或溶血酶阳性，将卡片上椭圆涂黑 卡片与GPI卡一样涂黑 充填 封口 放入培养/读数箱内 放入最快被读数的架子上 GPI及GPS要放在同一个架子上GPI 卡注意事项卡注意事项n n接种前：接种前：1.1.对特别粘的菌、极小菌落或需对特别粘的菌、极小菌落或需4848h h才能用的菌，接种量应调至才能用的菌，接种量应调至1 1McFMcF。2.2.鉴鉴定定卡卡正正确确操操作作的的关关键键是是，所所有有外外加加试试验验必必需需在在接接种种鉴鉴定定卡卡之之前前纪纪录录在在卡卡片片上上。通通过过键键盘盘输输入入三三个个外外加加试试验验中中的的任任何何一一个个时时，必必须在已接种的鉴定卡开始读数后二个小时内输入。须在已接种的鉴定卡开始读数后二个小时内输入。3.3.金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Staphylococcus aureus)、猪葡萄球菌猪葡萄球菌 (S.hyicus)S.hyicus)和中间葡萄球菌和中间葡萄球菌(S.intermedius)S.intermedius)的凝固酶是阳性。凝的凝固酶是阳性。凝固酶试验应利用葡萄球菌凝固酶检测试剂盒（编号固酶试验应利用葡萄球菌凝固酶检测试剂盒（编号7311273112）进行）进行,在试剂质量可疑的情况下，推荐以兔血浆试剂（编号在试剂质量可疑的情况下，推荐以兔血浆试剂（编号55181/5518255181/55182）予以确认。）予以确认。n n接种后：接种后：鉴定卡的接种后到上机培养之间的时间不能超过鉴定卡的接种后到上机培养之间的时间不能超过2020分钟。分钟。n n如果凝固酶记录不正确，则鉴定结果也不会正确(例溶血葡萄球菌就变成了金黄色葡萄球菌)。n n 如果微球菌接种于GPI鉴定卡上，将会给予不能鉴定或耳 葡萄球菌的结果(个别细菌的反应)。用原始数据，应以杆菌素2#杯对照生长。如果与PB 1#杯相比，菌不生长；氧化酶阳性；革兰氏染色观察时为四联形态，则应证明为微球菌。GPI 卡结果的解释卡结果的解释 芽孢杆菌鉴定卡芽孢杆菌鉴定卡BAC的预期应用的预期应用 革兰氏阳性杆菌的鉴定中温和高温芽孢菌专门对工业微生物新发展的产品(有补充实验资料)BACBAC卡卡接种方法接种方法培养基=TSA1.8mlVitek溶液1、比浊：0.5MacF(红色范围内)2、记录嗜温试验：（1）嗜高温：在55的额外培养箱培养，涂黑圆圈；（2）嗜中温：在VITEK中培养，无须涂黑圆圈。3、接种BAC鉴定卡1.Vitek培养箱培养：在6-15h内出结果2.其它培养箱：在18-24h内出结果革兰氏阳性杆菌（氧化酶阳性）n n接种前：1.1.在TSA琼脂上，需要二次转管2.2.保证均匀的菌悬液：如果不均匀，在调0.5McF之前，让悬液沉淀，将均匀悬液倒入另一管内。3.3.如果需要不密闭的培养器，则应将鉴定卡放在不透气、保湿的容器中，以避免鉴定卡在550C损失水份。n n接种后：在按种和培养之间的时间不要超过30分钟。BACBAC卡卡注意事项注意事项酵母菌鉴定卡酵母菌鉴定卡YBC的预期应用的预期应用 基于碳水化合物同化作用的酵母菌鉴定YBCYBC卡卡接种方法接种方法培养基=沙保弱(Sabouraud)琼脂1.8mlVitek溶液1、比浊：2MacF(绿色范围内)2、接种YBC鉴定卡，水平放置30在其它培养箱中培养。1、30的其它培养箱培养24h后放入VITEK自动判读结果2、培养24h后如果葡萄糖孔仍是阴性，再培养24h，然后自动判读酵母菌YBCYBC卡卡注意事项注意事项n n接种后：接种后：为避免在杯底有酵母的沉淀，应将鉴定卡水平放置。为避免在杯底有酵母的沉淀，应将鉴定卡水平放置。n n 结果解释：结果解释：11、2424h h后后,如果葡萄糖如果葡萄糖#24#24杯还是阴性的话，则在报杯还是阴性的话，则在报 告单上纪告单上纪录录：30300 0C C继续培养继续培养2424h h。22、48h48h后，如果葡萄糖后，如果葡萄糖#24#24杯仍是阴性的话，分离物可能不是酵杯仍是阴性的话，分离物可能不是酵母菌。绝大多数酵母菌是同化葡萄糖的，然而也有极少菌株在母菌。绝大多数酵母菌是同化葡萄糖的，然而也有极少菌株在YBCYBC葡萄糖培养基不能很好生长，但能在葡萄糖培养基不能很好生长，但能在SabouSabouraud raud 葡萄糖琼脂葡萄糖琼脂上生长，这些菌则被称之为不能鉴定的菌。上生长，这些菌则被称之为不能鉴定的菌。厌氧菌鉴定卡厌氧菌鉴定卡ANI预期应用预期应用厌氧和微好氧细菌(革兰氏阳性和阴性)鉴定乳酸菌鉴定有补充实验资料(SRF)，可用于微球菌的鉴定ANIANI卡卡接种方法接种方法培养基=哥伦比亚/TSA+5%羊血1.8mlVitek溶液1、比浊：3-4MacF(比浊仪黄色范围)2、接种ANI鉴定卡，竖置放置37在厌氧培养箱（盒）中。培养4小时，用手持观察器以肉眼读结果按说明书进行(生物分析)厌氧菌/微球菌ANIANI卡卡注意事项注意事项n n接种后：1.1.鉴定卡接种和培养之间的时间不应超过20分钟。2.2.当读21#杯结果时，为避免混淆，应竖置鉴定卡。杯壁有少量沉淀，应作为阴性结果。n n结果介释：以没有碳水化合物的#29杯作为阴性对照，与测定杯#24-28相比较，得到利用与否的结果。微生物计数微生物计数BIO卡的预期应用卡的预期应用应用：1.清亮和无色素溶液的计数2.控制VITEK悬浮液的微生物污染情况范围：1.5-80个细胞/ml的计数2.运动性强的菌3.含有一个菌以上样品的生长量的测定4.不透明的液体、在样品中有抑菌剂则阴性结果不能解释为无菌，但可解释为 1.2细胞/ml 微生物计数微生物计数BIO卡的接种方法卡的接种方法如果需要稀释,可用0.45-0.50%NaCl1.8ml样品于VITEK试管中接种BIO卡，放入VITEK培养箱中。2448小时内自动出结果标本充分混匀BIOBIO卡卡注意事项注意事项n n当检测的样品十分混浊或是有色素的液体和高污染的样品时，必需稀释，但无菌技术必须跟上。样品必须充分混和。n n合适的稀释液应该用0.45-0.50%的无菌NaCl溶液，不要用VITEK稀释液。n n检查灌满度：在鉴定卡中无气泡。n n在灌满30分钟之内，置鉴定卡于读数/培养器中