血液样品的处置和组织样品的制备.pptx

目标要求目标要求了解血液生化样品制备原理；掌握血液生了解血液生化样品制备原理；掌握血液生化样品制备方法。化样品制备方法。掌握离心机使用方法和注意事项掌握离心机使用方法和注意事项血液样品的处置和组织样品的制备第1页一、血液生化样品制备一、血液生化样品制备采血采血测定用血液，多由静脉采集。普测定用血液，多由静脉采集。普通在饲喂前空腹采取，所以时血液中化学通在饲喂前空腹采取，所以时血液中化学成份含量比较稳定。采血时所用针头、注成份含量比较稳定。采血时所用针头、注射器、盛血容器要清洁干燥；接血时应让射器、盛血容器要清洁干燥；接血时应让血液沿着容器壁慢慢注入，以防溶血和产血液沿着容器壁慢慢注入，以防溶血和产生泡沫。生泡沫。血液样品的处置和组织样品的制备第2页血清制备血清制备血清：全血不加抗凝剂自然凝固后析出淡黄色液血清：全血不加抗凝剂自然凝固后析出淡黄色液体。体。血清制备：由静脉采集血液，注入清洁干燥试管血清制备：由静脉采集血液，注入清洁干燥试管或离心管中。将试管放成斜面，让其自然凝固，或离心管中。将试管放成斜面，让其自然凝固，普通经普通经3h血块自然收缩而析出血清；也可将血样血块自然收缩而析出血清；也可将血样放入放入37恒温箱内，促使血块收缩，能较快析出恒温箱内，促使血块收缩，能较快析出血清。为了缩短时间，也可用离心机分离血清。为了缩短时间，也可用离心机分离(未凝或未凝或凝固后均可离心凝固后均可离心)，分离出血清，用滴管移人另一，分离出血清，用滴管移人另一试管中供测定用，如不及时使用，应贮于冰箱中。试管中供测定用，如不及时使用，应贮于冰箱中。分离出血清不应溶血。分离出血清不应溶血。血液样品的处置和组织样品的制备第3页全血及血浆制备全血及血浆制备全血：采血前加入抗凝剂，包含了血浆和全血：采血前加入抗凝剂，包含了血浆和 血纤蛋白。血纤蛋白。血浆：全血离心后除去血纤蛋白液体。血浆：全血离心后除去血纤蛋白液体。抗凝剂：凡是能抑制血液凝固反应化合抗凝剂：凡是能抑制血液凝固反应化合 物称为抗凝剂。物称为抗凝剂。血液样品的处置和组织样品的制备第4页惯用抗凝剂使用方法惯用抗凝剂使用方法1、草酸钾、草酸钾(钠钠)。其优点是溶解度大，与血液混合后，快速与血中钙离其优点是溶解度大，与血液混合后，快速与血中钙离子结合，形成不溶草酸钙，使血液不再凝固。子结合，形成不溶草酸钙，使血液不再凝固。配制方法：通常先配成配制方法：通常先配成10草酸钾或草酸钠溶液，然后草酸钾或草酸钠溶液，然后吸收此液吸收此液0.1ml于试管中，转动试管，使其铺散在试管壁于试管中，转动试管，使其铺散在试管壁上，置上，置80干燥箱内烘干，管壁呈白色粉末状，加塞备用。干燥箱内烘干，管壁呈白色粉末状，加塞备用。每管含草酸钾或草酸钠每管含草酸钾或草酸钠10mg，可抗凝血液，可抗凝血液5ml。应用范围：适合用于非蛋白氮、血糖等各种测定项目，但应用范围：适合用于非蛋白氮、血糖等各种测定项目，但不适合用于钾、钠和钙测定；另外草酸盐能抑制乳酸脱氢不适合用于钾、钠和钙测定；另外草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶，故使用时给予注意。酶、酸性磷酸酶和淀粉酶，故使用时给予注意。血液样品的处置和组织样品的制备第5页草酸钾一氟化钠混合剂。草酸钾一氟化钠混合剂。血液内一些化学成份血液内一些化学成份(如血糖如血糖)离开机体后仍易被离开机体后仍易被酶作用而影响测定结果。如用混合剂可抑制酶作酶作用而影响测定结果。如用混合剂可抑制酶作用用(氟化钠有抑制糖酵解作用氟化钠有抑制糖酵解作用)，因而能预防血糖，因而能预防血糖等化学物质分解。等化学物质分解。配制方法：称取草酸钾配制方法：称取草酸钾6g，氟化钠，氟化钠3g，加蒸馏水，加蒸馏水至至lOOml，分装在试管内，每管，分装在试管内，每管0.25ml。80烘烘干后加塞备用。每管含混合剂干后加塞备用。每管含混合剂22.5mg，可抗凝血，可抗凝血液液5ml。应用范围：最适合用于血糖测定，而不适合用于应用范围：最适合用于血糖测定，而不适合用于脲酶法尿素氮测定脲酶法尿素氮测定(因氟化钠能抑制脲酶活性因氟化钠能抑制脲酶活性)。血液样品的处置和组织样品的制备第6页肝素肝素是一个很好抗凝剂，因它对血中有机成份和无机是一个很好抗凝剂，因它对血中有机成份和无机成份测定均无影响，其主要作用是抑制凝血酶原成份测定均无影响，其主要作用是抑制凝血酶原转变为凝血酶，使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋转变为凝血酶，使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白而凝血。白而凝血。配制方法：常将肝素配成配制方法：常将肝素配成lmgml水溶液，每管水溶液，每管装装01ml，再横放蒸干，再横放蒸干(不宜超出不宜超出50)备用。每备用。每管可抗凝血液管可抗凝血液5lOml。市售肝素大多数为钠盐，可按市售肝素大多数为钠盐，可按10mgml配制成配制成水溶液。每管装水溶液。每管装0.1ml，按上法烘干，可使，按上法烘干，可使5lOml血液不凝固。血液不凝固。应用范围：适合用于血液有机物测定；不适合用应用范围：适合用于血液有机物测定；不适合用于凝血酶原测定。于凝血酶原测定。血液样品的处置和组织样品的制备第7页乙二胺四乙酸二钠盐乙二胺四乙酸二钠盐(简称简称EDTANa2)EDTANa2对血液中钙离子有很大亲和力，对血液中钙离子有很大亲和力，能使钙离子络合而使血液不凝固。能使钙离子络合而使血液不凝固。配制方法：常配成配制方法：常配成40mgmlEDTANa2水水溶液，每管分装溶液，每管分装0.1ml，在，在80干燥箱内烘干燥箱内烘干备用。每管可抗凝血液干备用。每管可抗凝血液5ml。应用范围：适合用于各种生化分析，但不应用范围：适合用于各种生化分析，但不适合用于血浆中含氮物质、钙及钠测定。适合用于血浆中含氮物质、钙及钠测定。血液样品的处置和组织样品的制备第8页血浆制备血浆制备血浆制备由静脉采集血液，放人装有抗凝血浆制备由静脉采集血液，放人装有抗凝剂试管或离心管中，轻轻摇动，使血液与剂试管或离心管中，轻轻摇动，使血液与抗凝剂充分混合，以防小血块形成。抗凝抗凝剂充分混合，以防小血块形成。抗凝血可静置或离心沉淀分离血可静置或离心沉淀分离(rmin,10min)，以使血细胞下沉，上清液即为血浆。血，以使血细胞下沉，上清液即为血浆。血浆与血清成份基本相同，只是血清不含纤浆与血清成份基本相同，只是血清不含纤维蛋白原。维蛋白原。血液样品的处置和组织样品的制备第9页无蛋白血滤液制备无蛋白血滤液制备 多生化分析要防止蛋白质干扰，经常先将多生化分析要防止蛋白质干扰，经常先将其中蛋白质除去；分析血液中许多成份时，其中蛋白质除去；分析血液中许多成份时，也经常需要除去蛋白质，制成无蛋白质血也经常需要除去蛋白质，制成无蛋白质血滤液。制备无蛋白血滤液方法很多，可依滤液。制备无蛋白血滤液方法很多，可依据不一样需要加以选择。现将生化惯用无据不一样需要加以选择。现将生化惯用无蛋白血滤液制备方法介绍以下：蛋白血滤液制备方法介绍以下：血液样品的处置和组织样品的制备第10页钨酸法钨酸法 原理：血液中蛋白质在原理：血液中蛋白质在pH小于其等电点时，可用小于其等电点时，可用钨酸来沉淀。钨酸钠与硫酸混合产生钨酸和硫酸钨酸来沉淀。钨酸钠与硫酸混合产生钨酸和硫酸钠，游离钨酸被，蛋白质吸附，形成不溶性钨酸钠，游离钨酸被，蛋白质吸附，形成不溶性钨酸蛋白而沉淀，经过滤或离心，除去沉淀即得无蛋蛋白而沉淀，经过滤或离心，除去沉淀即得无蛋白血滤液。白血滤液。试剂：试剂：10%钨酸钠溶液；钨酸钠溶液；0.333molL硫酸溶液。硫酸溶液。仪器与器材：锥形瓶、吸管、奥氏吸管、滤纸、仪器与器材：锥形瓶、吸管、奥氏吸管、滤纸、漏斗或离心管及离心机。漏斗或离心管及离心机。血液样品的处置和组织样品的制备第11页方法与步骤：方法与步骤：取取50ml锥形瓶锥形瓶1只，加入蒸馏水只，加入蒸馏水7份；份；用奥氏用奥氏吸管吸收抗凝血吸管吸收抗凝血l份，擦去管壁外血液，将吸管插份，擦去管壁外血液，将吸管插人锥形瓶中水底部，迟缓地放出血液。放完血液人锥形瓶中水底部，迟缓地放出血液。放完血液后，将吸管提升吸收上清液再吹人，重复洗管后，将吸管提升吸收上清液再吹人，重复洗管3次。充分混合，使红细胞完全溶解；次。充分混合，使红细胞完全溶解；加入加入0.333molL硫酸溶液硫酸溶液1份，随加随摇，充分混匀份，随加随摇，充分混匀。此时血液由鲜红变成棕色，静置。此时血液由鲜红变成棕色，静置510min，使，使其酸化完全；其酸化完全；加入加入10钨酸钠溶液钨酸钠溶液1份，边加份，边加边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产生泡沫为止；生泡沫为止；放置数分钟后用定量滤纸过滤或放置数分钟后用定量滤纸过滤或离心除去沉淀，即得完全澄清无蛋白血滤液，供离心除去沉淀，即得完全澄清无蛋白血滤液，供测定用。测定用。用此法制得无蛋白血滤液为用此法制得无蛋白血滤液为10倍稀释血滤液。即倍稀释血滤液。即每毫升血滤液相当于全血每毫升血滤液相当于全血0.ml，适合用于葡萄糖、，适合用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等测定。非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等测定。血液样品的处置和组织样品的制备第12页三氯醋酸法三氯醋酸法 原理：三氯醋酸是一个有机强酸，可使血原理：三氯醋酸是一个有机强酸，可使血液中蛋白质变性而形成不溶蛋白质盐沉淀。液中蛋白质变性而形成不溶蛋白质盐沉淀。其上清液即为无蛋白血滤液。此液呈酸性，其上清液即为无蛋白血滤液。此液呈酸性，惯用来测定无机磷等。惯用来测定无机磷等。试剂：试剂：10三氯醋酸溶液。三氯醋酸溶液。仪器与器材：锥形瓶、刻度吸管和奥氏吸仪器与器材：锥形瓶、刻度吸管和奥氏吸管、滤纸、漏斗或离心管和离心机。管、滤纸、漏斗或离心管和离心机。血液样品的处置和组织样品的制备第13页方法与步骤：方法与步骤：取取9份份10三氯醋酸放人锥三氯醋酸放人锥形瓶中；形瓶中；加入抗凝血加入抗凝血1份，边加边摇，静份，边加边摇，静置置5min；过滤或离心，即得完全澄清无过滤或离心，即得完全澄清无蛋白血滤液，此液亦为蛋白血滤液，此液亦为10倍稀释之血滤液。倍稀释之血滤液。附注附注(1)等无蛋白血滤液时，各液加妥后，摇匀等无蛋白血滤液时，各液加妥后，摇匀不应有泡沫，不然表明蛋白质沉淀不完全。不应有泡沫，不然表明蛋白质沉淀不完全。(2)所得无蛋白血滤液均应是五色透明液体，所得无蛋白血滤液均应是五色透明液体，如呈粉红色则说明蛋白质沉淀不完全。如呈粉红色则说明蛋白质沉淀不完全。血液样品的处置和组织样品的制备第14页二、离心机使用方法二、离心机使用方法血液样品的处置和组织样品的制备第15页离心分离技术是依据物体在一个实用离心离心分离技术是依据物体在一个实用离心场所中状态而发展起来新技术。不一样密场所中状态而发展起来新技术。不一样密度、大小或形状物质在不一样速度离心场度、大小或形状物质在不一样速度离心场所中沉降，所以一个大致是球形非均一混所中沉降，所以一个大致是球形非均一混合物，能够用离心方法加以分离，离心机合物，能够用离心方法加以分离，离心机是为了深入硕士物化学、分离大量物质。是为了深入硕士物化学、分离大量物质。比如：搜集细胞，分离血浆。从这些预纯比如：搜集细胞，分离血浆。从这些预纯化制剂中分离化制剂中分离DNA和蛋白质分子，并可分和蛋白质分子，并可分离出病毒和大规模大肠杆菌、亚细胞成份、离出病毒和大规模大肠杆菌、亚细胞成份、核蛋白微粒。核蛋白微粒。血液样品的处置和组织样品的制备第16页使用方法使用方法1将离心机放在坚实而平整工作台上；将离心机放在坚实而平整工作台上；2在适用离心管中加入样品，按离心机转头离心在适用离心管中加入样品，按离心机转头离心管位置刻度所对应孔插入，必须注意对称配重，管位置刻度所对应孔插入，必须注意对称配重，不然会损坏离心机；不然会损坏离心机；3放下离心机顶盖；放下离心机顶盖；4检验确认调速钮处于最低速位置；检验确认调速钮处于最低速位置；5打开电源开关；打开电源开关；6调速到需要转速调速到需要转速7选择工作时间，调选择工作时间，调“选时选时”钮到需要位置。钮到需要位置。血液样品的处置和组织样品的制备第17页