生化分析携带污染的发现与排除课件.ppt
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1、文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。携带污染的来源测试项目测试项目A A试剂针,比色杯等试剂成分残留试剂针,比色杯等试剂成分残留干扰下一个测试项目干扰下一个测试项目B B文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。引起携带污染的原因原因一原因一 生化仪的发展变化生化仪的发展变化:、多项目,多样本处理,、多项目,多样本处理,、处理能力的提高(高速化)处理能力的提高(高速化)共有化共有化:、样本针,试剂针;样本针,试剂针;、比色杯;、比色杯;、搅拌棒、搅拌棒携带污染携带污染文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当
2、之处,请联系网站或本人删除。原因二原因二 生化仪状态不良,使用不当:生化仪状态不良,使用不当:、清洗力的低下(日常维护欠缺,仪器老化)、清洗力的低下(日常维护欠缺,仪器老化)、生化仪内污垢的积聚、生化仪内污垢的积聚 、测试顺序安排不当、测试顺序安排不当常规清洗不能有效的消除污染常规清洗不能有效的消除污染携带污染携带污染文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。主要主要内容内容1试剂针携带污染2样本针携带污染3比色杯携带污染4搅拌棒携带污染5携带污染的消除文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。一、试剂针携带污染原因一原因
3、一 全自动生化分析仪一般采用双试剂针,即所有项目的一试剂都共全自动生化分析仪一般采用双试剂针,即所有项目的一试剂都共用试剂针用试剂针R1R1,所有项目的二试剂都共用试剂针,所有项目的二试剂都共用试剂针R2R2。试剂针。试剂针R1R1或或R2R2在每在每吸取一次试剂后都会进行一次清洗,之后会立即吸取下一个项目的试吸取一次试剂后都会进行一次清洗,之后会立即吸取下一个项目的试剂。剂。当自身清洗能力下降,试剂针在吸取试剂时会将部分残留的前项当自身清洗能力下降,试剂针在吸取试剂时会将部分残留的前项目试剂成分带入到后项目反应杯中,对后项目的检测结果造成影响。目试剂成分带入到后项目反应杯中,对后项目的检测结
4、果造成影响。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。原因二原因二 从各个项目设置的参数可知,试剂体积量远大从各个项目设置的参数可知,试剂体积量远大于样本体积量。于样本体积量。因此试剂针携带污染影响程度会高于样本针携因此试剂针携带污染影响程度会高于样本针携带污染。带污染。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。试剂针携带污染的类型1 1、试剂成分间的直接影响、试剂成分间的直接影响 试剂中含有下一个检测所要测定的底物,或是含有的某种试剂成试剂中含有下一个检测所要测定的底物,或是含有的某种试剂成分与下一反应的底物有作用,因而
5、直接干扰下一反应的测定结果。分与下一反应的底物有作用,因而直接干扰下一反应的测定结果。2 2、试剂成分间的间接影响试剂成分间的间接影响 前一个测定试剂与后一个测定试剂反应原理相近,或者都会通过前一个测定试剂与后一个测定试剂反应原理相近,或者都会通过相同的中间产物。该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来相同的中间产物。该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰,因为在有试剂污染的情况下,下一个测试所测定的是前间接的干扰,因为在有试剂污染的情况下,下一个测试所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。后两个项目反应的综合作用结果。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之
6、处,请联系网站或本人删除。部分常用试剂间可能产生的干扰如下:部分常用试剂间可能产生的干扰如下:1.pH1.pH值改变:试剂中反应缓冲液之间因仪器携带污染而使下一反应的值改变:试剂中反应缓冲液之间因仪器携带污染而使下一反应的pHpH值改变,使下一反应达不到最佳状态。如双缩脲法测血清总蛋白,值改变,使下一反应达不到最佳状态。如双缩脲法测血清总蛋白,若其他条件相同,反应在碱性若其他条件相同,反应在碱性(pH(pH值值8-9)8-9)条件时,蛋白肽键(条件时,蛋白肽键(CONHCONH)才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应,完全测出血清蛋白的)才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应,完全测出血清蛋白的总量。
7、若总量。若pHpH8 8时,总蛋白测定结果偏低,直接影响球蛋白、白蛋白时,总蛋白测定结果偏低,直接影响球蛋白、白蛋白/球蛋白的结果。酶活力测定在最适球蛋白的结果。酶活力测定在最适pHpH值时,反应最快,灵敏度最高,值时,反应最快,灵敏度最高,但是因为缓冲能力有限,可因携带污染使酶促反应出现无效值。大多但是因为缓冲能力有限,可因携带污染使酶促反应出现无效值。大多数酶反应数酶反应pHpH值在值在6.0-7.56.0-7.5之间;之间;ALPALP、-GT-GT、LDHLDH须在碱性条件下最适须在碱性条件下最适宜。宜。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。2.
8、TG2.TG、T-CHT-CH、UAUA、MGMG试剂中含有胆酸盐,对循环酶法测定胆试剂中含有胆酸盐,对循环酶法测定胆汁酸能产生严重干扰。汁酸能产生严重干扰。3.ALT3.ALT(IFCCIFCC)、)、ASTAST(IFCCIFCC)试剂中含有高活力)试剂中含有高活力LDLD成分,有成分,有可能会对可能会对LDLD的测定带来干扰。的测定带来干扰。4.CK4.CK(NAC-activatedNAC-activated)、)、CK-MBCK-MB(NAC-activatedNAC-activated)试剂中)试剂中含有含有GluGlu成分,其分析方法的原理中包含成分,其分析方法的原理中包含Glu
9、Glu的已糖激酶的已糖激酶(HK)(HK)反应过程,因此可能对反应过程,因此可能对GluGlu测定带来干扰,尤其对测定带来干扰,尤其对GluGlu的的HKHK法法测定可能带来严重干扰。测定可能带来严重干扰。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。5.Glu(HK)5.Glu(HK)、CKCK(NAC-activatedNAC-activated)、)、CK-MBCK-MB(NAC-NAC-activatedactivated)、)、TGTG、HDL-CHDL-C、LDL-C(LDL-C(直接法直接法)等试剂中使用了等试剂中使用了镁盐,可能会对其后的镁盐,可
10、能会对其后的Mg2+Mg2+测定带来干扰;测定带来干扰;TPTP试剂中高浓试剂中高浓度的度的Cu2+Cu2+对对Mg2+Mg2+测定也会产生干扰。测定也会产生干扰。6.ChE(Butyrylthiocholine)6.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-Glu(GOD-PAP)PAP)、UA(Uricase)UA(Uricase)、-HBDH(DGKC)-HBDH(DGKC)等试剂使用磷酸缓冲等试剂使用磷酸缓冲液,可能会对无机磷的测定带来干扰。液,可能会对无机磷的测定带来干扰。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿
11、;如有不当之处,请联系网站或本人删除。7.Mg2+7.Mg2+试剂试剂(Calmagite)(Calmagite)中含有中含有E ED DTATA成分,为成分,为Ca2+Ca2+络合剂,可能络合剂,可能对对Ca2+Ca2+的测定带来干扰。的测定带来干扰。8 8.CK.CK检测不应在检测不应在ALPALP、CaCa检测之前,因检测之前,因CKCK反应液中加入反应液中加入EDTA-NaEDTA-Na,能抑制能抑制ALPALP活性,结合活性,结合CaCa而使结果偏低。而使结果偏低。9 9.BUN.BUN酶法测定因谷氨酸脱氢酶(酶法测定因谷氨酸脱氢酶(GLDHGLDH)消耗)消耗NADHNADH,不能
12、放在底,不能放在底物物NADHNADH如如ALTALT、ASTAST项目前检测。项目前检测。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。试剂针携带污染排查和发现1 1、思路、思路 目前绝大部分实验室开展的生化检测项目至少都在目前绝大部分实验室开展的生化检测项目至少都在2020项项以上,评价全部项目之间的携带污染会非常以上,评价全部项目之间的携带污染会非常耗时耗时,并且试剂,并且试剂成本成本消耗量大消耗量大。且不同仪器的动作原理不完全相同,设计一。且不同仪器的动作原理不完全相同,设计一个较为个较为简单、合理简单、合理的实验方法是需要重点考虑的内容。的实验方法是需
13、要重点考虑的内容。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。2 2、原理、原理 通过设置特定的标本检测顺序,每个样本只做一个项目通过设置特定的标本检测顺序,每个样本只做一个项目的检测,可以控制不同项目的先后吸取顺序,实现任何一个的检测,可以控制不同项目的先后吸取顺序,实现任何一个项目都能与其他项目相遇。项目都能与其他项目相遇。为了有效评价项目之间携带污染影响程度,污染实验所为了有效评价项目之间携带污染影响程度,污染实验所用的病人样本的混合血清应尽量包含用的病人样本的混合血清应尽量包含医学决定水平浓度医学决定水平浓度。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;
14、如有不当之处,请联系网站或本人删除。试剂针携带污染实验方法一1 1、携带污染初实验、携带污染初实验 假设本次实验以假设本次实验以A A、B B、C C、D D、E E五个项目来考察各个项目之间的五个项目来考察各个项目之间的试剂针携带污染。试剂针携带污染。先在生化仪中输入样本测试号码和选择项目,每个样本号码只选先在生化仪中输入样本测试号码和选择项目,每个样本号码只选择一个项目,目的是使试剂针吸取项目的顺序完全按照样本测试号码择一个项目,目的是使试剂针吸取项目的顺序完全按照样本测试号码的选后顺序进行,五个项目的测试顺序表见的选后顺序进行,五个项目的测试顺序表见表表1 1。测试完成后,将数。测试完成
15、后,将数据输入到处理据输入到处理表格表格2 2和和表格表格3 3中,按照判断标准,寻找可能存在的污染中,按照判断标准,寻找可能存在的污染项目组合。项目组合。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。测试顺序号测试顺序号123456789101112测试项目测试项目AAAAABACADAE测试顺序号测试顺序号131415161718192021222324测试项目测试项目ABBBBBCBDBEB测试顺序号测试顺序号252627282930313233343536测试项目测试项目CCCCCDCECDDD测试顺序号测试顺序号373839404142434445测试
16、项目测试项目DDEDEEEEE表1 测试项目数为5时测试顺序安排表文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。表2 各项目单独测试5次时测试结果列表,数字代表对应检测项目的测试结果测试次数ABCDE11142534412215263542331627364344172837445518293845平均值平均值AvAvBvBvCvCvDvDvEvEv文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。表3 项目之间交叉列表纵向代表施污染项目 横向代表受污染项目ABCDEA6(AB)8(AC)10(AD)12(AE)6/Bv*100%8/
17、Cv*100%10/Dv*100%12/Ev*100%B7(BA)19(BC)21(BD)23(BE)7/Av*100%19/Cv*100%21/Dv*100%23/Ev*100%C9(CA)20(CB)30(CD)32(CE)9/Av*100%20/Bv*100%30/Dv*100%31/Ev*100%D11(DA)22(DB)31(DC)39(DE)11/Av*100%22/Bv*100%31/Cv*100%39/Ev*100%E13(EA)24(EB)33(EC)40(ED)13/Av*100%24/Bv*100%33/Cv*100%40/Dv*100%文档仅供参考,不能作为科学依据,请
18、勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。携带污染实验结果分析表表3 3中显示了试剂之间携带污染初实验后的结果:中显示了试剂之间携带污染初实验后的结果:将表格内测试顺序号代表的位置处输入该项目对应的测试结果;将表格内测试顺序号代表的位置处输入该项目对应的测试结果;对每个测试顺序号下面对应的测试结果和该项目单独对每个测试顺序号下面对应的测试结果和该项目单独5 5次重复结果次重复结果的均值相比;的均值相比;比值以百分比形式表示,通过观察百分比的大小来初步判断携带污比值以百分比形式表示,通过观察百分比的大小来初步判断携带污染的可能性。染的可能性。目前的判断标准以目前的判断标准以正负百分之五正负百分
19、之五作为判断标准,超过范围时怀疑作为判断标准,超过范围时怀疑有携带污染。有携带污染。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。2、确认实验由携带污染初实验筛选出怀疑有污染的项目组合,假设由携带污染初实验筛选出怀疑有污染的项目组合,假设(ABAB)同同(DEDE)即即A A项目对项目对B B项目(项目(A A项目做好后紧接着做项目做好后紧接着做B B项目),项目),D D项目对项目对E E项目项目(D D项目做好后紧接着做项目做好后紧接着做E E项目)怀疑有污染项目)怀疑有污染由于初实验的项目交叉结果只是一次测试的结果,可能有偶然因素,由于初实验的项目交叉结果
20、只是一次测试的结果,可能有偶然因素,还必须进行确认实验。还必须进行确认实验。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。确认实验以以(ABAB)为例,为例,(DEDE)的情况相同的情况相同先单独做先单独做A A项目项目,紧接着连续测试,紧接着连续测试3 3次次B B项目项目,第一个,第一个B B项目的结果受项目的结果受A A项目影响最大,第三个项目影响最大,第三个B B项目的结果因为有项目的结果因为有2 2次自身冲洗,结果比较次自身冲洗,结果比较准确。比较第一个准确。比较第一个B B项目检测结果同第三个项目检测结果同第三个B B项目检测结果,如果影响项目检测结
21、果,如果影响百分比同初实验结果影响趋势和程度相近,可以判断百分比同初实验结果影响趋势和程度相近,可以判断A A项目对项目对B B项目有项目有携带污染。携带污染。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。确认实验A B1 B2 B3 D E1 E2 E3 A B1 B2 B3 D E1 E2 E3 表表4 4 携带污染确认实验携带污染确认实验 施污染项目AD受污染项目BE测试值1B1E1测试值2B2E2测试值3B3E3测试值1/测试值3*100%B1/B3*100%E1/E3*100%文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除
22、。试剂针携带污染实验方法二1 1、携带污染初实验、携带污染初实验 假设本次实验以假设本次实验以A A、B B、C C、D D、E E五个项目来考察各个项目之间的五个项目来考察各个项目之间的试剂针携带污染。试剂针携带污染。先在生化仪中输入样本测试号码和选择项目,每个样本号码只选先在生化仪中输入样本测试号码和选择项目,每个样本号码只选择一个项目,目的是使试剂针吸取项目的顺序完全按照样本测试号码择一个项目,目的是使试剂针吸取项目的顺序完全按照样本测试号码的选后顺序进行,五个项目的测试顺序表见的选后顺序进行,五个项目的测试顺序表见表表1 1。测试完成后,将数。测试完成后,将数据输入到处理据输入到处理表
23、格表格2 2和和表格表格3 3中,按照判断标准,寻找可能存在的污染中,按照判断标准,寻找可能存在的污染项目组合。项目组合。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。测试顺序号测试顺序号123456789101112测试项目测试项目AAAAABACADAE测试顺序号测试顺序号131415161718192021222324测试项目测试项目AAAAABBBBBCB测试顺序号测试顺序号252627282930313233343536测试项目测试项目DBEBBBBBCCCC测试顺序号测试顺序号373839404142434445464748测试项目测试项目CDCEC
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