胶体金免疫层析法快速检测人工养殖复齿鼯鼠所产五灵脂中氯霉素残留.pdf
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1、2023 Vol.24 No.7732中药制剂工程与技术732胶体金免疫层析法快速检测人工养殖复齿鼯鼠所产五灵脂中 氯霉素残留李 倩1,2,宁红婷1,2,陈 煜1,2,杨国伟1,张 彬1,2(1.山西省检验检测中心药品检验技术研究所,山西 太原 030001;2.食品药品安全防控山西省重点实验室,山西 太原 030001)摘要目的:建立五灵脂中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。方法:采用免疫竞争法对比检测线与控制线两者之间颜色深浅的差距,定性判定五灵脂中的氯霉素含量。结果:检出限:0.1g/kg、灵敏度:98%、特异性:90%、假阴性率:1%、假阳性率:10%。结论:该方法可作为人工养殖复齿
2、鼯鼠所产五灵脂药材中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测。关键词 五灵脂;氯霉素;胶体金免疫层析法中图分类号:R284.1 文献标识码:A DOI:10.19763/ki.2096-7403.2023.07.06Rapid detection of chloramphenicol residues in Wulingzhi produced by artificially bred com-plex-toothed flying squirrel by colloidal gold immunochromatographyLiQian1,2,NingHongting1,2,ChenYu1,2,Yan
3、gGuowei1,ZhangBin1,2(1.InstituteofDrugTestingTechnology,ShanxiProvincialInspectionandTestingCenter,TaiyuanShanxi030001;2.ShanxiKeyLaboratoryofFoodandDrugSafetyPreventionandControl,TaiyuanShanxi030001)Abstract Objective:Toestablishacolloidalgoldimmunochromatographicmethodforrapiddetectionofchloramphe
4、nicolinWulingzhi.Methods:ThedifferenceofcolordepthbetweendetectionlineandcontrollinewascomparedbyimmunecompetitionmethodtoqualitativelydeterminethechloramphenicolcontentinWulingzhi.Results:Detectionlimit:0.1g/kg,sensitivity:98%,specificity:90%,falsenegativerate:1%,andfalsepositiverate:10%.Conclusion
5、:ThemethodcanbeusedascolloidalgoldimmunochromatographyfortherapiddetectionofchloramphenicolinWulingzhiproducedbyartificiallybredcomplex-toothedflyingsquirrel.Keywords Wulingzhi;chloramphenicol;colloidalgoldimmunochromatography基金项目山西省药材资源研究与药物研发重点科技创新平台(201705D151002-02)作者简介 李倩,工程师,Email:通讯作者 宁红婷,工程师
6、,Email:中药五灵脂为鼯鼠科复齿鼯鼠的干燥粪便,生用活血散瘀,炒炭后有止血的作用1,临床上主要用于妇科疾病、心脑血管病、消化系统疾病。在山西、陕西部分地区,人工养殖复齿鼯鼠已初具规模2。在养殖过程中养殖户投喂饲料时混入氯霉素等抗生素,预防鼯鼠因细菌感染死亡,导致五灵脂中氯霉素残留。野生复齿鼯鼠主要生活在高海拔山区,于悬崖峭壁岩洞石缝中筑巢产便,洞口集中排粪。因此采集困难,野生资源极为短缺,为解决五灵脂药材的市场需求,在陕西商洛地区形成了规模性养殖鼯鼠基地,所以人工饲养鼯鼠生产五灵脂成为目前五灵脂药材的主要来源2。氯霉素是一种广谱抗生素,曾广泛应用于预防和治疗动物疾病3,氯霉素理化性质极为稳
7、固,人体难免会出现因摄入食物引发的富集,高浓度药物残留可能诱发再生不良性贫血以及严重的中性粒细胞减少等疾病,即使是低浓度的药物残留也会影响致病菌的抗药性,从而对人体健康造成严重损害4-6。因此,欧美发达国家及我国农业部均做出明确规定在任何动物源食品、饲料、生长环境中禁用氯霉素且不得检出7。氯霉素残留检测方法主要有液质联用质谱法、微生物法、ELISA法、电泳法等8。但这些方法存在需要专业技术人员对样品预处理、操作大型检测精密设备等缺陷。基于抗原与抗体特异性结合的免疫学方法具有操作简单、检出限低和专属性强的优点,优胜于传统方法。2023 年第 24 卷第 7 期733中药制剂工程与技术733目前尚
8、未见到有关于测定五灵脂中氯霉素残留的报道。因此,本研究采用免疫标记技术确立了一种快速测定氯霉素残留的方法,试纸条只需10min就可出结果,操作简单,费用低廉,为今后建立五灵脂质量标准,控制药材质量提供一定的参考依据。1 仪器与试剂CP213电子天平(美国奥豪斯),MS3圆周振荡器(IKA),HC-3018高速离心机(中科中佳),移液枪(Eppendorf),LC-Si固相萃取小柱(天津博纳艾杰尔科技有限公司,200mg/6ml,LOT:0170198),氯霉素快速检测卡力德力诺生物技术(北京)有限公司,批号:LDLN20171128A,氯霉素(德国Dr.Ehrenstorfer公司,41130
9、,99.3%),甲砜霉素(农业部环境保护科研检测所,201706,100g/ml),氟甲砜霉素(农业部环境保护科研检测 所,201706,100g/ml)。除乙腈为色谱纯外、其余试剂均为分析纯。五灵脂药材购自陕西商洛市丹凤县。2 方法与结果2.1 配制对照品溶液分别取氯霉素、甲砜霉素以及氟甲砜霉素用乙腈多步稀释制得10g/ml浓度单位对照品乙腈溶液。注意低浓度对照品需要现用现配。2.2 制备供试品溶液取五灵脂药材粉碎并过3号筛,称取样品粉末5g,在塑料离心管中加入5ml试验用水涡旋1min使其分散均匀,再加入10ml乙酸乙酯涡旋振摇提取5min,8000r/min离心2min。再加入1g氯化钠
10、和10ml正己烷涡旋1min、离心2min,弃去正己烷层,取乙酸乙酯层准备下一步的净化。用10%丙酮正己烷溶液5ml预淋洗LC-Si固相萃取小柱并弃去,乙酸乙酯样液过LC-Si固相萃取小柱,弃去不收集,最后再采用40%正己烷丙酮溶液5ml洗脱,将盛有洗脱液的比色管置于40氮吹仪上,氮吹蒸发至干,用磷酸盐缓冲液600 l复溶并在漩涡混合器上混合均匀,即得样品待测液9-10。2.3 测定步骤在检测卡上的样品添加孔中添加200 l待测的液滴,室温条件下反应5min,即可进行结果的观察判断。2.4 结果判定的要求主要由控制线以及检测线的颜色深度比较来确定结果。当控制线的颜色未显示时,表示操作错误或检测
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