2-1微生物的实验室培养2省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2010年上学期,湖南长郡卫星远程学校,制作 05,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢,第1页,第2页,是一切肉眼看不见或看不清楚微小生物总称。,一、微生物,第3页,微生物,病毒,细菌,放线菌,真菌,原生动物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,是一切肉眼看不见或看不清楚微小生物总称。,一、微生物,1.分类,第4页,特点：小 简 低,微生物,病毒,细菌,放线菌,真菌,原生动物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,是一切肉眼看不见或看不清楚微小生物总称。,1.分类,一、微生物,第5页,芽孢：,细菌形成椭圆形休眠体,第6页,芽孢壁很,厚,，对干旱、低温、高温等恶劣环境有很强抵抗力。,芽孢又,小,又,轻,，能够随风飘散。,当环境适宜（如温度、水分适宜）时候，芽孢又能够萌发，形成一个细菌。,第7页,放线菌,结构：,单细胞原核生物,分支状菌丝（基内菌丝、气生菌丝）,第8页,（2）繁殖,孢子丝|,孢子,第9页,菌落,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见，含有一定形态结构子细胞群体，叫做菌落。,第10页,细菌菌落特征因种而异,菌落,第11页,菌落,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见，含有一定形态结构子细胞群体，叫做菌落。,菌落是判定菌种主要依据。,第12页,2.营养及功效,微生物化学元素组成：,第13页,2.营养及功效,C、H、O、N、P、S,微生物化学元素组成：,第14页,C、H、O、N、P、S,五大营养物质,碳源,氮源,生长因子,水,无机盐,微生物化学元素组成：,2.营养及功效,第15页,二、培养基,培养基（培养液）是由人工方法配制而成，专供微生物生长繁殖使用混合营养基质。,第16页,（1）按物理状态分：,固体培养基和液体培养基、半固体培养基,。,（2）按功效分：,选择培养基和判别培养基,。,（3）按成份分：,天然培养基和合成培养基,。,1.培养基类型,第17页,固体培养基：菌落,第18页,液体培养基：,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,第19页,半固体培养基：,第20页,2.不一样微生物往往需要采取不一样培养基配方,第21页,2.不一样微生物往往需要采取不一样培养基配方,3.不论哪种培养基，普通都含有,水、碳源、氮源、无机盐,等营养物质，另外还需要满足微生物生长对,pH、特殊营养物质以及氧气要求,。,第22页,1000mL牛肉膏蛋白胨培养基营养组成,培养基组分,提供主要营养,牛肉膏5g,碳源、磷酸盐和维生素,蛋白胨10g,氮源和维生素,NaCl 5g,无机盐,H,2,O定容在1000mL,氢元素、氧元素,第23页,4.培养基用途,第24页,4.培养基用途,液体培养基：增菌、工业生产,固体培养基：纯化（分离），判定、活菌计数、保藏菌种,半固体培养基：,第25页,三、无菌技术,第26页,三、无菌技术,1.无菌技术概念,无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。,第27页,1.无菌技术概念,无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。,成功地培养微生物关键。,三、无菌技术,第28页,（1）消毒定义：,2.消毒与灭菌概念及二者区分,（2）灭菌定义：,第29页,（1）消毒定义：,2.消毒与灭菌概念及二者区分,（2）灭菌定义：,3.惯用消毒与灭菌方法,第30页,灭菌方法：,第31页,1.灼烧灭菌,灭菌方法：,第32页,1.灼烧灭菌,灭菌方法：,第33页,2.干热灭菌：,160-170 下加热1-2h。,3.高压蒸气灭菌,100kPa、121 下维持15-30min.,第34页,1.无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？,旁栏思索,第35页,1.无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？,答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。,旁栏思索,第36页,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。,（1）培养细菌用培养基与培养皿,（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管,（3）试验操作者双手,第37页,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。,（1）培养细菌用培养基与培养皿,（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管,（3）试验操作者双手,答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。,第38页,微生物试验室培养基本操作程序,1.器具灭菌,2.培养基配制,3.培养基灭菌,4.倒平板,5.微生物接种,6.恒温箱中培养,7.菌种保留,第39页,四、试验操作,第40页,牛肉膏蛋白胨固体培养基配方,牛肉膏 5.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,琼脂 20.0g,将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL,四、试验操作,第41页,1计算,、,称量,2溶化,3调pH：pH76,4过滤：这一步能够省去。,5分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引发污染。分装三角烧瓶量以不超出三角烧瓶容积二分之一为宜。,6加塞,7包扎,操作步骤,第42页,8灭菌:,将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。,第43页,9倒平板:,待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见书本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种,。,第44页,倒平板技术,将灭过菌培养皿放在火焰旁桌面上，右手拿装有培养基锥形瓶，左手拨出棉塞。,1,2,3,4,第45页,倒平板技术,右手拿锥形瓶，使瓶口快速经过火焰。,1,2,3,4,第46页,倒平板技术,1,2,3,4,用左手拇指,和食指将培养皿,打开一条稍大于,瓶口缝隙，右,手将锥形瓶中,培养基,(,约,10,20mL),倒入培养,皿，左手马上盖,上培养皿皿盖。,第47页,倒平板技术,1,2,3,4,等候平板冷却凝固，大约需510min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。,第48页,9倒平板:,待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见书本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种,。,10无菌检验：,将灭菌培养基放入37温室中培养2448小时，以检验灭菌是否彻底。,第49页,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？,问题讨论,第50页,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？,答：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。,问题讨论,第51页,2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？,第52页,2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？,答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。,第53页,3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？,第54页,3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。,第55页,4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？,第56页,4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？,答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。,第57页,（二）纯化大肠杆菌,接种方法有：,平板划线法和稀释涂布平板法,微生物接种技术：,第58页,平板划线操作方法,第59页,第60页,第61页,第62页,第63页,第64页,第65页,第66页,第67页,第68页,第69页,一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；,二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。,第70页,一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；,二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。,第71页,第72页,第73页,问题讨论,1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,依然需要灼烧接种环吗？为何？,第74页,答：第一步灼烧是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。,第75页,2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,第76页,2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,第77页,3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,第78页,答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。,3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,第79页,稀释涂布平板法,第80页,1.将分别盛有9mL水6支试管灭菌，并按10,1,10,6,次序编号。,第81页,2.用移液管吸收1mL培养菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。,第82页,3.从10,1,倍稀释试管中吸收1mL稀释液，注入10,2,倍稀释试管中，重复第2步操作。依次类推，直到完成最终一支试管稀释。,第83页,注意：,移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰12cm处.,第84页,第85页,第86页,第87页,第88页,涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？,问题讨论,第89页,涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？,应从操作各个细节确保“无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,问题讨论,第90页,微生物恒温培养,微生物恒温培养,第91页,微生物恒温培养,第92页,菌种保留,1.,暂时保藏,：,接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保留。,2.,长久保留,：,甘油冷冻管藏法,第93页,四、课题结果评价,（一）培养基制作是否合格,假如未接种培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。,第94页,（二）接种操作是否符合无菌要求,假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。,第95页,（三）是否进行了及时细致观察与统计,培养12 h与24 h后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。这一步要求主要是培养学生良好科学态度与习惯。,第96页,例1.相关微生物营养物质叙述中，正 确(),A.是碳源物质不可能同时是氮源,B.凡碳源都提供能量,C.除水以外无机物只提供无机盐,D.无机氮源也能提供能量,典例解析,第97页,例1.相关微生物营养物质叙述中，正 确(),A.是碳源物质不可能同时是氮源,B.凡碳源都提供能量,C.除水以外无机物只提供无机盐,D.无机氮源也能提供能量,典例解析,D,第98页,例2.下面对灭菌了解不正确是(),A.预防杂菌污染,B.毁灭杂菌,C.培养基和发酵设备都必须灭菌,D.灭菌必须在接种前,第99页,例2.下面对灭菌了解不正确是(),A.预防杂菌污染,B.毁灭杂菌,C.培养基和发酵设备都必须灭菌,D.灭菌必须在接种前,B,第100页,编号,成份,含量,粉状硫,10g,（NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,例3右表是某微生物培养基成份，请据此回答：,（1）右表培养基可培养微生物类型是_。,第101页,例3右表是某微生物培养基成份，请据此回答：,（1）右表培养基可培养微生物类型是_。,自养型微生物,编号,成份,含量,粉状硫,10g,（NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,第102页,