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实验室常用染色液配方

1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精 毫升
B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水 100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精 10.O 毫升
B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水 95 毫升
将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精 25.0 毫升
B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水 100 毫升
将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘 1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水 300毫升
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克 蒸馏水 100毫升
6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水 100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水 100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水 100毫升
9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水 95.0
10、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸 10.0克 甘油 20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升 棉蓝 0.02克蒸馏水 10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
11动物组织石蜡切片染色方法
苏木精-伊红(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊红染液染色10 min；入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性树脂封片.

一、常用染色液的配制
⒈ 碘-碘化钾（I2-KI）溶液 能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。
配方：碘化钾2g ； 蒸馏水300ml ； 碘1g
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。
⒉ 苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ） 能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。
配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ； 95％酒精10ml ； 过滤后再加入10ml甘油
（2）先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。
（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。
⒊ 1％醋酸洋红（aceto carmine） 酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ； 45％醋酸100ml
煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。
⒋ 改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine） 核染色剂。
配制步骤： 先配成三种原液，再配成染色液。
原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）。
（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）
染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1~1.8g，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。
适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用，假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。
⒌ 中性红（neutral red）溶液 用于染细胞中的液泡，可鉴定细胞死活。
配方：中性红0.1g ； 蒸馏水100ml
使用时再稀释10倍左右。
⒍ 曙红Y（伊红，eosin Y）酒精溶液 常与苏木精对染，能使细胞质染成浅红色，起衬染作用。
配方：曙红0.25g ； 95％酒清100ml
也常用于95％酒精脱水时，加入少量曙红溶液，其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。
⒎ 钌红（ruthenium red）染液 钌红是细胞胞间层专性染料，其配后不易保存，应现用现配。
配方：钌红5～10mg ； 蒸馏水25-50ml
⒏ 龙胆紫（gentian violet） 为酸性染料，适用于细菌涂抹制片。
配方：龙胆紫0.2~1 g ； 蒸馏水100ml
⒐ 苯胺兰（aniline blue）溶液 为酸性染料，对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等，尤其是染丝状藻类效果好。还多用于与真曙红作双重染色，对于高等植物多用于与番红作双重染色。
配方：苯胺兰1 g ； 35％或95％酒精100ml
⒑ 间苯三酚（phloroglucin）溶液 用于测定木质素。
配方：间苯三酚5g ； 95％酒精100ml
注：此溶液呈黄褐色即失效。
⒒ 橘红G（orange G）酒精溶液 为酸性染料，染细胞质，常作二重或三重染色用。
配方：橘红G 1g ； 95％酒精100ml
⒓ 番红（safranin O） 为碱性染料，适用于染木化、角化、栓化的细胞壁，对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色，与橘红G、结晶紫作三重染色。
配方：（1）番红水溶液 番红0.1或1 g ；蒸馏水100ml
（2）番红酒精溶液 番红0.5或1 g ；50％（或95％）酒精100ml
（3）苯胺番红酒精染色液
甲液 番红5 g +95％酒精50ml
乙液 苯胺油20ml +蒸馏水450ml
将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀，过滤后使用。
⒔ 固绿（fast green） 又称快绿溶液。为酸性染料，能将细胞质，纤维素细胞壁染成鲜艳绿色，着色很快，故要很好的掌握着色时间。
配方：（1）固绿酒精液 固绿0.1 g ； 95％酒精100ml
（2）苯胺固绿酒精液 固绿 1 g ；无水酒精 100ml ；苯胺油 4ml
配后充分摇匀，过滤后使用。现配现用效果好。
⒕ 苏木精（hematoxylin）染液 苏木精是植物组织制片中应用最广的染料，是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料，而且可以分化出不同颜色。配方很多，现举海登汉氏（Heidenhain's）苏木精染色液，又称铁矾苏木精染色液。
配方：甲液（媒染剂）： 硫酸铁铵（铁明矾）2-4g ；蒸馏水100ml
（必须保持新鲜，最好临用之前配制）
乙液（染色剂）：苏木精 0.5-1g ；95％酒精 10ml；蒸馏水 90ml
配制步骤：（1）将苏木精溶于酒精中，瓶口用双层纱布包扎，使其充分氧化（通常在室内放置两个月后方可使用）。（2）加入蒸馏水，塞紧瓶口，置冰箱中可长期保存。
切片需先经甲液媒染，并充分水洗后才能以乙液染色，染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。
铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂，但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。
⒖亚甲基蓝染液 常用于细菌、活体细胞等的染色。
取0.1g亚甲基蓝，溶于100ml蒸馏水中即成。
⒗詹纳斯绿B（Janus green B）染液
将5.18gJanus 绿溶于100ml蒸馏水，配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。
⒘硫堇染液
取0.25克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。使用此液时，需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能成多色反应。
18.黑色素液
水溶性黑素10g，蒸馏水100mL，甲醛(福尔马林)0.5mL。可用作荚膜的背景染色。
19.墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。用作荚膜的背景染色。
20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液
A液：美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝)0.3g，95%乙醇30mL;
B液：0.01%KOH100mL。
混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液，按1∶10或1∶100稀释均可。
21.革兰氏染色液
(1)结晶紫(cristal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。
(2)芦戈(Lugol)氏碘液：碘1g，KI 2g，蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL，即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色 能使用。
(3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。
(4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g，95%乙醇10mL，5%石炭酸90mL)10mL，加蒸馏水90mL。
(5)番红溶液：番红O(safranine O，又称沙黄O)2.5g，95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
以上染色液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌，前者蓝紫色，后者淡红色。
22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：碱性复红0.3g溶于95%乙醇10mL中为A液；0.01%KOH溶液100mL为B液。混合A、B液即成。
23.姬姆萨(Giemsa)染液
(1)贮存液：称取姬姆萨粉0.5g，甘油33mL，甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细，再逐滴加入甘油，继续研磨，最后加入甲醇，在56℃放置1-24h后即可使用。
(2)应用液(临用时配制)：取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。
24. 1%瑞氏(Wright's)染色液
称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈久，则染色色泽愈佳。

二、常用试剂的配制
(一)显微镜镜头清洁剂
将乙醚和乙醇按7∶3混合，装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等（注意瓶口必须塞紧，以免挥发）。
(二)固定液
1.福尔马林-乙酸-酒精固定液（FAA，又称万能固定剂）
福尔马林（38％甲醛）5ml＋冰乙酸5ml＋70％酒精90 ml，可用于固定植物的一般组织，但不适用于单细胞及丝状藻类。幼嫩材料用50％酒精代替70％酒精，可防止材料收缩；还可加入5ml甘油（丙三醇）以防蒸发和材料变硬。FAA 可兼作保存剂。
2.福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）
福尔马林5ml＋丙酸5ml＋70％酒精90ml，用于固定一般的植物材料，通常固定24h，效果比FAA 好，并可长期保存。
3.福尔马林-丙酸-氯仿固定液（卡诺固定液）
配方一：无水酒精3份＋冰乙酸1份。
配方二：无水酒精6份＋冰乙酸1份＋氯仿3份。
是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液，材料固定后，用95％和85％的酒精浸洗，清洗2-3次，也可转入70％酒精中保存备用。
4.甘油-酒精软化剂
甘油1份＋50％或70％酒精1份，适用于木材的软化，将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中，时间至少一周或更长一些，也可将材料保存于其中备用。
5. 铬酸-乙酸固定液
根据固定对象的不同，可分强、中、弱3种不同的配方：
弱液配方：10％铬酸2.5 ml＋10％乙酸5.0 ml＋蒸馏水92.5ml。
中液配方：10％铬酸7 ml+10％乙酸10 ml＋蒸馏水83 ml。
强液配方：10％铬酸10 ml+10％乙酸30 ml＋蒸馏水60 m1。
弱液用于固定较柔嫩的材料，例如藻类、真菌类、苔药植物和蕨类的原叶体等，固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12-24 h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟到1h。
中液用作固定根尖、茎尖、小的子房和胚珠等，固定时间12-24 h或更长。
强液适用于木质的根、茎和坚韧的叶子、成熟的子房等。为了易于渗透，可在中液和强液中另加入2％的麦芽糖或尿素。固定时间12-24 h或更长。
(三)离析液
1. 铬酸-硝酸离析液
铬酸为三氧化铬的水溶液：(1) 10 ml铬酸；(2) 10 ml浓硝酸。
将上述两液等量混合均匀后再使用。适于对导管、管胞、纤维等木质化的组织进行解离时使用。
2. 盐酸-酒精固定离析液
将浓盐酸、95％酒精等量混合备用，一般用于离析根尖细胞。
(四)解离液
常用于根尖等细胞的涂片，它能使细胞壁中层（果胶质）溶解，而使细胞分开。
1．盐酸酒精
配方:95%酒精 1份，浓盐酸1份。二者混合即成。
2．盐酸溶液
（1）1 mol／L盐酸
配方：浓盐酸（比重1.19） 82.5ml
用蒸馏水定容 1 000ml
（2）0.2mol／L盐酸
配方：浓盐酸（比重1.19） 16.5ml
用蒸馏水定容 1 000m1
盐酸水解时间对染色效果影响很大，水解时间短，易着色但较难压片；水解时间长，染色慢而色淡；超过20min或水解温度过高，往往染色极淡，或染不上色。各种材料最合适的时间有差别，一般来说，大染色体材料水解时间可较长，小染色体材料宜短。
改用0.2mol／L盐酸于60℃恒温下水解10～15min，对各种类型材料都能获得细胞分离和染色合适的较好效果。
(五)预处理液
用于根尖压片的前处理，能使细胞有丝分裂染色体缩短。
1．0.002mol/L 8-羟基奎林水溶液 称取0.29g 8-羟基奎林溶于1 000ml蒸馏水中。
2．对二氯代苯饱和水溶液 将对二氯代苯加入蒸馏水中搅拌至不再溶解为止，即成饱和水溶液。
(六)各级酒精的配制
由于无水乙醇价格较高，故常用95％的酒精配制。配制方法很简便，用95％的酒精加上一定量的蒸馏水即可。可按下列公式推算：
（原酒精浓度值（95％）－最终酒精浓度值）×100＝所需加水量
最终酒精浓度 95％酒精用量 蒸馏水量
85％ 85ml 10ml
70％ 70ml 25ml
50％ 50ml 45ml
30％ 30ml 65ml
(七)其他试剂
1. 0.7%生理盐水 取NaCl 0.7g溶于100mL蒸馏水中。用于两栖类动物。
2. 1%硝酸银溶液 称取1克硝酸银,溶于100毫升蒸馏水中即可。
3.碘酒
取碘2g和KI 1.5g，先加入少量的75%乙醇搅拌，待溶解后再用75%乙醇稀释至100mL
4. 树胶封固剂
将固体的加拿大树胶块，溶解于二甲苯或正丁醇中，浓度要适当（注意绝对不能混入水或酒精），是玻片标本好的封固剂。也可用人工合成的中性树胶代替。
5. 明胶粘贴剂
明胶1-2 g＋石碳酸（苯酚）2g＋蒸馏水100ml＋甘油15ml。
配法：先将蒸馏水加温至30-40℃，慢慢加入明胶，待全部溶解后，再加入2g苯酚和15ml甘油，搅拌至全溶为止，然后用纱布过滤，滤液贮于瓶中备用。
6.标本消毒剂
用于腊叶标本消毒，常用0.4％~1%升汞酒精溶液（95％酒精1 000ml+4 g升汞），浸泡标本0.5～2min。升汞有剧毒，不要弄到手上，消毒后注意洗手。