江西省市售清热解毒口服液的质量分析.pdf

540药品评价 Drug Evaluation 2023,20（5）江西省市售清热解毒口服液的质量分析肖芳红，方慧琼，廖宝源，吴应帅，吴晓勇，李功辉赣州市综合检验检测院，江西 赣州 341000摘要：目的 对江西省内 19 家生产企业生产的 42 批清热解毒口服液进行质量分析。方法 按中国药典2015 年版一部收载清热解毒口服液质量标准对 42 批样品进行检验，制定了 HPLC 法同时测定黄芩苷、栀子苷含量的方法再按其进行检验，并统计检验结果。结果 按现行标准检验，所有批次样品均符合规定；按修订标准检验，7 个厂家 21 批次样品栀子苷含量不符合要求。结论 江西省内市售清热解毒口服液的总体质量一般，现行标准检验项目设置不够完善，有必要对其进行提高完善。关键词：清热解毒口服液；质量分析；栀子苷；黄芩苷DOI:10.19939/ki.1672-2809.2023.05.05Quality Analysis of Qingre Jiedu Oral Liquid Sold in Jiangxi ProvinceXIAO Fanghong,FANG Huiqiong,LIAO Baoyuan,WU Yingshuai,WU Xiaoyong,LI GonghuiGanzhou Comprehensive Inspection and Testing Institute,Ganzhou Jiangxi 341000,China.Abstract:Objective Quality analysis of 42 batches of qingre jiedu oral liquid produced by 19 manufacturers in Jiangxi Province.Methods According to the 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia,42 batches of qingre jiedu oral liquid were tested.A HPLC method for the simultaneous determination of baicalin and geniposide was developed,and then the test results were statistically analyzed.Results According to the revised standard,the content of geniposide in 21 batches of samples from 7 manufacturers did not meet the regulations.Conclusion The overall quality of qingre jiedu oral liquid sold in Jiangxi Province is general,and the current standard test items were not perfect,so it is necessary to improve it.Key words:Qingre jiedu oral liquid;Quality analysis;Geniposide;Baicalin药物研究清热解毒口服液为清热解毒类中成药，属于乙类非处方药（OTC），由黄芩、栀子、金银花等十二味药材组方，具有清热解毒的功效，用于热毒壅盛所致的发热面赤、烦躁口渴、咽喉肿痛；流感、上呼吸道感染见上述证候者，临床上常用于治疗流感、上呼吸道感染、痤疮、儿童手足口等疾病1。目前，已获国家药品监督管理局批准的生产企业有 203 家，共 221 个批准文号。本研究共抽取样品 42 批，涉及批准文号 19 个、生产企业 19 家，执行标准均为中国药典2015 年版一部。本研究对清热解毒口服液现行标准中黄芩苷的含量测定方法进行修订，制定了 HPLC 法同时测定黄芩苷和栀子苷的含量测定方法2-11，分别按现行标准和修订后的标准对 42 批样品进行检验，并对检验结果进行对比分析，评价该品种质量状况。1 仪器与试药1.1 仪器Agilent1260 高效液相色谱仪（安捷伦公司）、Waters e2695 高效液相色谱仪（沃特世公司）、XSE205DU 电子天平（梅特勒公司）、METTLER FE20 pH 计（梅特勒公司）。1.2 试剂与试药本研究抽取的清热解毒口服液来自 19 个厂家，共 42 批次，规格均为 10 mL/支，详见表 2。对 照 品：黄 芩 苷（批 号 110715-201821，含量 95.4%），栀子苷（批号 110749-201919，含量97.1%），绿原酸（批号 110753-202018），连翘苷（批号 110821-201816），菝葜皂苷元（批号 110744-作者简介：肖芳红，本科，药师。研究方向：中药研究及检验检测。E-mail:通信作者：方慧琼，本科，中药师。研究方向：中药研究及检验检测。E-mail:541药品评价 Drug Evaluation 2023,20（5）201711），麦冬（批号 121013-201711）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 按现行标准检验对 19 个厂家的 42 批样品按中国药典2015年版一部清热解毒口服液标准进行检验，各项检验结果如下。2.1.1 性状 标准规定应为棕红色的液体；味甜、微苦。经检验，42 批样品均符合规定。2.1.2 鉴别 鉴别（1）为绿原酸的薄层色谱鉴别，鉴别（2）为栀子苷的薄层色谱鉴别，鉴别（3）为连翘苷的薄层色谱鉴别，鉴别（4）为菝葜皂苷元的薄层色谱鉴别，鉴别（5）为麦冬的薄层色谱鉴别。按标准检验，结果 42 批样品均符合规定，但有部分批次样品在鉴别（2）中栀子苷斑点较弱。2.1.3 检查 pH 值按标准检验，42 批样品 pH 值范围为 4.85.7，均符合规定（标准规定 pH 值应为4.56.5）。装量按标准检验，42 批样品均符合规定。微生物限度按标准检验，42 批样品需氧菌总数小于100 cfu/mL、霉菌和酵母菌总数小于 10 cfu/mL、大肠埃希菌未检出，均符合规定。2.1.4 含量测定 本法为黄芩苷的 HPLC 法含量测定，标准规定本品每 1 mL 含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于 1.0 mg。按标准检验，42批样品均符合规定。2.2 含量测定方法修订现行标准含量测定方法为 HPLC 法测定黄芩苷的含量，为提升本品质量的可控性，结合现有标准检验时发现的鉴别（2）中部分批次样品栀子苷斑点较弱的问题，将方法修订为 HPLC 法同时测定黄芩苷和栀子苷的含量。2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Sharpsil-T C18（4.6 mm 250 mm，5 m）；流动相以甲醇为流动相 A，以 0.2%磷酸溶液为流动相 B，按表 1 中的规定进行梯度洗脱；检测波长为 238 nm；柱温 35 ；进样量 10 L。理论板数按栀子苷峰计算应不低于 3 000。表1 梯度洗脱表 时间/min流动相 A/%流动相 B/%0252278253022 4578 55305045552.2.2 溶液的配制 混合对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品 0.010 81 g、栀子苷对照品 0.012 95 g，分别置 100 mL 量瓶中，加 50%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述黄芩苷对照品溶液 5 mL、栀子苷对照品 3 mL，置同一 25 mL 量瓶中，加 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备：精密量取供试品 2 mL，置100 mL 量瓶中，加 50%甲醇适量，振摇，用 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置，滤过，取续滤液，即得。2.2.3 专属性试验 按供试品工艺制备缺黄芩和栀子的阴性样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，并按上述色谱条件进样测定。结果表明：阴性对照溶液在与栀子苷对照和黄芩苷对照色谱峰保留时间处无相应色谱峰，阴性无干扰，说明本法专属性良好。见图 1。时间/min响应值/mAuA时间/min响应值/mAuB时间/min响应值/mAuC注：1.栀子苷 2.黄芩苷。图1 HPLC色谱图：A.混合对照品溶液，B.供试品溶液，C.阴性对照溶液2.2.4 方法学考察（1）线性关系考察。精密称取黄芩苷对照品、栀子苷对照品各适量，加 50%甲542药品评价 Drug Evaluation 2023,20（5）醇制成每 1 mL 分别含黄芩苷 4.13 g、10.31 g、20.63 g、51.56 g、103.13 g 及栀子苷 3.02 g、7.54 g、15.09 g、62.87 g、125.74 g 的混合对照品溶液，分别进样测定。以对照品溶液浓度为横坐标 X，以峰面积为纵坐标 Y，绘制标准曲线，计算回归方程。结果：栀子苷回归方程为 Y=15.434 5X-2.426 3，相关系数 r 为 1.000，进样浓度在 3.02 g/mL125.74 g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系；黄芩苷回归方程为 Y=13.969 0X-2.535 0，相关系数 r 为 1.000，进样浓度 4.13 g/mL103.13 g/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系。（2）重复性。取同一批号样品制备供试品溶液6 份，分别进样测定，测得栀子苷、黄芩苷平均含量分别为1.57 mg/mL、1.19 mg/mL，RSD分别为0.7%、0.6%,说明本法重复性良好。（3）稳定性。取供试品溶液分别在 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、9 h 分别进样测定，结果栀子苷、黄芩苷峰面积 RSD 分别为 0.9%、1.0%，说明供试品溶液在 9 小时内稳定。（4）精密度。取同一份供试品溶液，连续进样6 次，结果栀子苷、黄芩苷峰面积 RSD 分别为 0.2%、0.2%，说明仪器精密度良好。（5）回收率试验。精密量取已知含量的供试品（栀子苷为 1.569 7 mg/mL、黄芩苷为 1.185 1 mg/mL）1 mL，置 100 mL 量瓶中，分别精密加入“2.2.2”中的栀子苷对照品母液（0.125 7 mg/mL）、黄芩苷对照品母液（0.103 1 mg/mL）各 10 mL，再加 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置，滤过，取续滤液进样测定。结果栀子苷、黄芩苷回收率分别为 99.5%、100.3%，RSD 分别为 0.9%、0.8%，说明本法准确度良好。（6）耐用性试验。取同一批次样品制备的供试品溶液，采用不同仪器、不同品牌色谱柱进样测定，且使用了不同柱温和流速的色谱条件测定，结果各色谱条件下测得的含量接近，峰形良好，主峰与杂峰完全分离，说明本法耐用性良好。（7）样品测定。按上述方法对 42 批样品分别进行测定，结果见表 2 样品含量测定结果。参考现行标准中黄芩苷含量限度，限度暂拟定为：本品每 1 mL 含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于 1.0 mg；含栀子以栀子苷（C17H24O10）计，不得少于 0.6 mg（栀子苷相当于所测样品平均值的70%，结合中国药典2015 年版一部对栀子中栀子苷的含量限度，转移率为 49.8%）。表2 样品含量测定结果 mg/mL生产企业批号现行标准含量测定修订含量测定方法黄芩苷黄芩苷栀子苷A 厂家1905031.21.10.41904031.21.10.31905031.21.10.41909121.41.40.51909101.41.30.31909101.41.30.4B 厂家201906011.71.60.2201910022.01.90.1201910021.91.80.4201903011.91.80.1C 厂家190701111.92.00.5200312111.81.80.5200312111.81.70.4191204111.91.80.5200313111.91.90.5200307111.91.90.5D 厂家1907143.83.70.81912142.82.91.01912152.93.00.9E 厂家1802010381.51.51.1F 厂家201804083.33.31.4201906013.53.41.4201906013.63.51.4201804012.92.81.3G 厂家1910013.23.12.01905013.33.22.32002013.13.11.9H 厂家200204311.91.80.2190417311.81.80.3I 厂家QR200209012.92.82.6QR200208012.92.92.5J 厂家1906033.33.31.51904113.93.81.7K 厂家1804013.73.61.3L 厂家21904011.61.50.6M 厂家201905023.03.00.5N 厂家181202021.61.50.3O 厂家201911022.12.10.3P 厂家Q2002012.82.81.4Q 厂家201903071.61.60.7R 厂家1904061.51.50.7S 厂家1905011.21.21.6543药品评价 Drug Evaluation 2023,20（5）3 讨论3.1 现行标准检验的差异分析按现行标准检验，42 批样品均符合规定。其中 pH 值的限度为 4.56.5，本次所测 pH 值范围区间为 4.85.7。不同生产企业稍有差异，分析原因：（1）不同企业生产工艺参数有区别，比如煎煮加水量、温浸温度等；（2）不同企业使用的辅料类别及使用量上有差异，在矫味剂的选择上，有蔗糖和甜菊素，部分企业还添加了桔子香精，防腐剂的使用上有苯甲酸钠和山梨酸钾两种。3.2 修订前后含量测定结果的差异分析按现行标准黄芩苷含量测定项检验，42 批样品均符合规定，但不同厂家之间的黄芩苷含量差异较大，最大值有 3.9 mg/mL，最小值仅为 1.2 mg/mL，推测原因为生产工艺参数不同及黄芩药材质量参差不齐。按修订后的含量测定方法测定，并按拟定限度判定，黄芩苷含量均符合规定，且与原方法测得值基本一致，但有 7 个厂家的 21 批次样品栀子苷含量低于限度，且不同生产企业之间及同一生产企业不同批次间差异较大，最大值有 2.6 mg/mL，最小值仅为 0.1 mg/mL，原因可能是：（1）各生产企业用于投料的栀子药材质量参差不齐，栀子药材采购验收标准中没有含量测定项。（2）各企业具体的生产工艺参数（比如煎煮加水量、煎煮罐压力等）有差异。（3）因现行标准中未对栀子药材进行定量控制，难以保证生产厂家真实、足量投料，从而导致了产品质量的差异。3.3 建议应修订清热解毒口服液含量测定方法，增加栀子苷的含量测定，从标准上提高清热解毒口服液的质量。参考文献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2020 年版 一部 S北京:中国医药科技出版社,2020:1014-1015.2 林银凤,曾雅真.建立骨舒乳膏中栀子苷和黄芩苷的含量测定方法 J.海峡药学,2022,34(6):51-53.3 李军鸽,王永春,孟珈同,等.黄连解毒汤中盐酸小檗碱、黄芩苷、黄柏碱、栀子苷的含量测定 J.人参研究,2021,33(5):19-24.4 郑利伟.双波长 HPLC 法同时测定小儿清肺止咳片中栀子苷和黄芩苷的含量 J.中国医药导刊,2019,21(6):365-368.5 孙慧.葛根素、栀子苷、黄芩苷、柚皮苷含量测定的 ELISA方法与 HPLC 方法的相关性研究 D.北京:北京中医药大学,2013.6 欧阳春,孙增先.高效液相色谱法测定舒肝宁注射液中黄芩苷和栀子苷含量 J.数理医药学杂志,2006,19(2):173-174.7 张艳.HPLC 法同时测定泻肝安神丸中龙胆苦苷、栀子苷、黄芩苷的含量 J.中国药师,2017,20(6):1125-1127.8 唐怡,刘甜甜,曾珊珊,等.HPLC 同时测定茵栀黄颗粒及新生儿尿液中栀子苷和黄芩苷的含量J.药品评价,2022,19(14):857-860.9 林银凤,曾雅真.建立骨舒乳膏中栀子苷和黄芩苷的含量测定方法 J.海峡药学,2022,34(6):51-53.10 龚旭昊,杨星,张璐,等.HPLC 法同时测定清瘟解毒口服液中栀子苷、黄芩苷的含量 J.中国兽药杂志,2020,54(8):47-53.11 余功富.高效液相色谱法测定黄连解毒散中栀子苷和黄芩苷J.浙江畜牧兽医,2020,45(5):4-6.收稿日期：2023-02-14 定稿日期：2023-05-18