甘肃特色蜂蜜的营养性与安全性研究.pdf
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1、引言甘肃省地域辽阔、地形复杂,自然环境和气候条件独特,植物种群丰富,蜜源植物近700种,主要蜜源植物超过30种1,当归、党参、黄芪、红芪、大黄、甘草等特色中药材已在甘肃规模化种植2,是蜜蜂的特色蜜源植物。目前形成商品化蜂产品蜜源植物的主要有:油菜、苜蓿、草木樨、刺槐、狼牙、泡桐、党参、黄芪、小茴香、枣树等3,这些商品化蜂产品蜜源植物对应的蜂蜜,主要产于甘肃省植被覆盖率较高的地区,是甘肃省的特色产品。徽县、两当等县建立了中华蜜蜂保护区,“两当狼牙蜜”通过了国家地理标志产品认证4,甘肃特色蜜源植物的蜂蜜因其独有风味、鲜明色泽和浓郁香气,颇受国内沿海发达城市市场和国际市场的认可与青睐。甘肃是蜂蜜资源
2、大省,素有“西北蜜库”之称,但不是蜂蜜资源利用与开发的强省,部分蜂农还是土法养殖,缺少专业、科学的养蜂及生产、加工蜂蜜技术。为了追求利益最大化,对蜂蜜产品进行掺杂使假、违规使用防腐剂;为了降低因蜜蜂疾病、死亡而带来的产量下降,对蜂箱进行兽药溶液喷洒;不科学采集、收集蜂蜜,导致蜂蜜因受到微生物侵染而出现发酵甚至变酸腐败不能食用而成为废品5。这些行为都为甘肃特色蜂蜜产业的发展带来了不利影响,故本研究对购自于甘肃省蜂蜜企业的特色蜜源蜂蜜产品进行分析,以期通过氨基酸、微量元素、山梨酸和苯甲酸、喹诺酮类类药物、菌落总数、大肠菌群等相关指标从营养价值和安全性两方面评价甘肃特色蜜源蜂蜜产品,并为今后相关科学
3、研究提供基础数据支撑。1材料与方法1.1材料试验样品分别购自于多家甘肃省蜂蜜生产企业2019年的蜂蜜产品,分别为甘肃山丹县油菜花蜜、甘肃两当县狼牙蜜、甘肃陇南市黄芪蜜、甘肃景泰县枣花蜜、甘肃兰州市枸杞花蜜、甘肃会宁县苜蓿蜜、甘肃陇南市党参蜜、甘肃省天水市茴香蜜、甘肃天水市洋槐蜜。1.2 试剂与仪器1.2.1标样与试剂标样:氨基酸混标溶液Catalog No.:S000029批号05010117德国赛卡姆公司;山梨酸、苯甲酸德国Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司;诺美沙星(纯度 99.9%)批号C14646000、培氟沙星(纯度92.1%)批号C15905000、氧甘肃特色蜂蜜的营养
4、性与安全性研究段鹏1,顾春华1,蒋玉梅2,燕妮1,白斌芳1,王智斌3(1.甘肃省食品检验研究院,甘肃兰州730000;2.甘肃农业大学,甘肃兰州730070;3.白银市食品检验检测中心,甘肃白银730900)摘要:本论述以甘肃特色蜂蜜为主要研究对象,测定氨基酸种类与数量、喹诺酮类药物残留、山梨酸和苯甲酸、微量元素、菌落总数、大肠菌群等指标。经测试,甘肃特色蜂蜜微量元素丰富,植物蜜源的苜蓿花蜜和中药材蜜源的黄芪蜜、党参蜜检出了其他样品不具有的氨基酸,所有样品均不含山梨酸、苯甲酸及喹诺酮类药物。结果表明:甘肃蜂蜜独具特色,具有良好的营养价值和安全性,营养成分组成及含量具有一定差异,为甘肃特色蜂蜜的
5、营养品质评价及安全性评估提供参考依据。关键词:甘肃特色蜂蜜;营养价值;安全性;研究中图分类号:S896.1文献标志码:A环境生态25甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横2023 年(第 52 卷)第 3 期氟沙星(纯度99.3%)批号C15717000
6、、诺氟沙星(纯度97.2%)批号C15648000;微量元素混标溶液Catalog No:QCS-02-1、QCS-ASL-21-1。试剂:平板计数琼脂(北京陆桥批号:190301)结晶紫中性红胆盐琼脂(北京陆桥批号:190426)0.85%生理盐水管(北京路桥批号:191010)。1.2.2仪器S4330氨基酸分析仪;Waters e2695高效液相色谱仪、2998PDA 二极管阵列检测器,使用C18柱;Waters高效液相色谱仪与AB5500QTRAP串联质谱仪;赛默飞iCAP 7000 电感耦合等离子体光谱仪;德国 MemmertIPP plus 750培养箱。1.3试验方法1.3.1蜂
7、蜜中氨基酸的测定根据GB 5009.124-20166精密称取2 g蜂蜜样品于水解管内,加入15 mL、6 mol/L盐酸溶液,再加入苯酚3滴4滴,振荡水解管3 min后冷冻5 min,然后抽真空,冲入氮气,重复3次,在氮气状态下封口,放入水解炉水解22 h后,取出冷却至室温。将水解液过滤定容至50 mL容量瓶内,准确吸取1.0 mL滤液移入15 mL试管内,在40 减压干燥,残留物用2 mL水溶解,再减压干燥,最后蒸干。加入1.0 mL、pH2.2柠檬酸钠缓冲溶液,振荡混匀后,用0.22 um滤膜过滤,转移至样品瓶,为样品测定液。1.3.2蜂蜜中苯甲酸、山梨酸的测定根据GB 5009.28-
8、20167第一法准确称取2 g蜂蜜样品于50 mL具塞离心管中,加水25 mL,涡旋混匀,于50 水浴超声20 min,用水混匀,定容至50 mL容量瓶中进行液相色谱测定。1.3.3蜂蜜中诺美沙星、培氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的测定根据GB/T 23412-20098,准确称取5 g蜂蜜样品,置于50 mL具塞离心管中,准确加入1 ug/mL氘代诺氟沙星内标工作液50 uL,加入5 mL、0.1mol/L氢氧化钠溶液,于涡旋混匀器快速混合至蜂蜜完全溶解,依次用3 mL甲醇和3 mL水活化固体萃取小柱(阴离子交换柱PAX),将蜂蜜溶液转移到小柱上,依次用水、甲醇淋洗,弃去上述滤液。用3 mL甲酸
9、-甲醇溶液(5+95,体积比)洗脱,40 水浴旋转蒸发至干,用甲醇-水(2+8,体积比)定容1.0 mL,过0.45 um的滤膜到进样瓶中,进行液相色谱-质谱仪测定。1.3.4蜂蜜中微量元素的测定根据GB 5009.268-20169精密称取0.2 g0.5 g蜂蜜样品于消解内罐中,加入5 mL硝酸,放置过夜,旋紧不锈钢外套,放入恒温干燥箱按微波消解的参考条件进行消解,消解完成后采用第二法进行微量元素测定。1.3.5蜂蜜中菌落总数、大肠菌群的测定称取25 g蜂蜜样品溶于225 mL无菌生理盐水,按照GB 4789.2-201610和GB 4789.3-201611分别进行菌落总数和大肠菌群的测
10、定。1.4数据分析采用Excel 2010软件进行数据处理分析并作图。2 结果2.1蜂蜜中氨基酸的测定分析实验对9种蜂蜜样品进行了包括8种赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸必需氨基酸以及婴幼儿必需的组氨酸,早产儿所样品名称油菜花蜜狼牙蜜黄芪蜜枣花蜜枸杞花蜜苜蓿花蜜党参蜜茴香蜜洋槐蜜氨基酸含量与种类Ala14.2214.2018.76NDNDND15.62NDNDValNDND20.58NDNDND18.27NDNDLeu16.1826.1524.60122.9311.3811.9718.099.6318.85Ile9.2711.9114.0357.50ND7.
11、1310.35ND10.92Phe12.2212.7713.6271.055.658.4514.34ND13.64TrpNDNDNDNDNDNDNDNDNDMetNDNDNDNDND0.41NDNDNDProNDNDNDNDNDNDNDNDNDGly10.749.6812.3858.319.337.3711.908.3711.69Ser17.0514.1720.7663.3814.9611.9318.7113.8119.25Thr11.2912.4716.9364.529.547.4412.418.6712.18Cys32.0625.741.46123.7930.2924.901.4327.8
12、837.19Tyr2.972.875.0114.59ND3.163.40ND3.29His4.007.1210.9427.664.003.374.383.304.44LysNDNDNDNDNDNDNDNDNDArgNDND10.79NDNDND3.72NDNDAsp42.7533.0047.03190.0841.8731.9548.0733.72108.24Glu55.3442.0444.57186.3830.5823.7560.8629.6147.18表1各样品中氨基酸含量的测定注:ND代表未检出环境生态262023 年(第 52 卷)第 3 期甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵
13、横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横必需的精氨酸、半胱氨酸、酪氨酸及非必需氨基酸共18种氨基酸含量的测定。9种样品经检测均含有亮氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、组氨酸、谷氨酸,见表1所列。油菜花蜜共检出12种氨基酸,总含量为228.15 ug/g;狼牙花蜜检出12种氨基酸,总含量为212.
14、12 ug/g;黄芪蜜共检出14种氨基酸,总含量为261.46 ug/g;枣花蜜共检出11种氨基酸,总含量为980.19 ug/g;枸杞花蜜共检出9种氨基酸,总含量为157.60 ug/g;苜蓿花蜜共检出12种氨基酸,总含量为141.83 ug/g;党参蜜共检出14种氨基酸,总含量为241.55 ug/g;茴香蜜共检出8种氨基酸,总含量为134.99 ug/g;洋槐蜜共检出11种氨基酸,总含量为286.86 ug/g;其中植物蜜源的苜蓿花蜜和中药材蜜源的黄芪蜜、党参蜜检出了其他样品不具有的氨基酸;苜蓿花蜜检出了蛋氨酸,含量为,0.41 ug/g;黄芪蜜和党参蜜检出了缬氨酸(Val)、精氨酸(A
15、rg),缬氨酸含量分别 20.58 ug/g、18.27 ug/g,精氨酸含量分别为10.79 ug/g、3.72 ug/g2.2 蜂蜜中苯甲酸及山梨酸的测定分析此次实验中,所有样本均未检测出山梨酸和苯甲酸的阳性样本,见表2所列。GB 2760-201112规定禁止蜂蜜中添加山梨酸、苯甲酸,同时GH/T 18796-201213中真实性要求规定蜂蜜:“不得添加或混入任何防腐剂、澄清剂、增稠剂等异物。”2.3蜂蜜中诺美沙星、培氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的测定分析此次实验中9个样品中均未检出诺美沙星、培氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的阳性样本。喹诺酮类药物是一类人工合成的广谱抗菌药物,曾经广泛用于人和
16、动物疾病的治疗14。由于喹诺酮类药物会随着食物链在机体组织中残留,长期摄入含有喹诺酮类药物的食品,会导致人体呼吸道感染、基因突变、致癌,引起消化系统、神经系统和心血管系统等疾病15。对此,我国农业部第2292号公告16已明文规定禁止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等四种兽药。2.4蜂蜜中微量元素的测定分析本实验采用微波消解法处理蜂蜜样品,采用电感耦合等离子体发射光谱法测定蜂蜜中15种微量元素。结果表明:9种蜂蜜样品中均含有Ca、Mg、Fe、Mn、Al、K、Na微量元素,其中K的含量最高,其次为Ca、Na,再次为Al、Mg,最次为Mn;Ti在5个样品中检出,Li在3个样品中检出,Cu在
17、两个样品中检出,Ba在一个样品中检出;Ag、Zn在所有样品中均未检出;在6种均检出的元素中,景泰县枣花蜜Ca含量最高为72.96 mg/kg;景泰县党参蜜Mg含量最高为24.26 mg/kg;武都县黄芪蜜Mn含量最高为0.44 mg/kg;景泰县枣花蜜Al含量最高为14.88 mg/kg;景泰县枣花蜜K含量最高为1 536.21 mg/kg;山丹县油菜花蜜Na含量最高为84.193 mg/kg。天水市茴香蜜、会宁县苜蓿花蜜分别检出10种元素;景泰县枣样品名称油菜花蜜狼牙蜜黄芪蜜枣花蜜枸杞花蜜苜蓿花蜜党参蜜茴香蜜洋槐蜜元素种类及含量/(mgkg-1)Ca钙56.998.4840.7972.961
18、0.0136.0465.0256.808.77Cu铜NDNDNDNDNDND0.430.34NDFe铁2.006.994.232.362.092.543.894.102.03Li锂NDNDND0.09ND0.02ND0.09NDMg镁20.377.9211.0815.9712.678.9024.2622.403.36Mn猛0.280.290.440.280.260.300.240.320.10Ni镍NDNDNDNDNDNDNDNDNDSe硒NDNDNDNDNDNDNDNDNDTi钛0.15ND0.300.21ND0.21ND0.30NDZn锌NDNDNDNDNDNDNDNDNDAg银NDNDN
19、DNDNDNDNDNDNDAl铝9.4613.4913.4214.8814.6715.3413.6114.8010.95Ba钡NDNDNDNDND0.10NDNDNDK钾428.11319.66415.171536.21481.23343.75690.611161.92207.57Na钠84.1938.8931.3643.1842.6248.2851.7263.7617.90表3各样品元素含量的测定注:ND代表未检出环境生态表2各样品苯甲酸及山梨酸的测定样品名称油菜花蜜狼牙蜜黄芪蜜枣花蜜枸杞花蜜苜蓿花蜜党参蜜茴香蜜洋槐蜜苯甲酸未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出山梨酸未检出未
20、检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出27甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横甘肃科技纵横2023 年(第 52 卷)第 3 期花蜜检出9种元素;山丹县油菜花蜜、武都县黄芪蜜、景泰县党参蜜检出8种元素;两当县狼牙蜜、景泰县枸杞花蜜检出7种元素;天水市洋槐蜜
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