谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立.pdf

,N o 收稿日期:;修回日期:基金项目:河南省市场监管局科技计划项目(s j ).作者简介:瞿超杰(),女,硕士,主要研究方向为药物分析学.通讯作者:付燕峰(),男,中级工程师,研究方向为食品安全检测.d o i:/j i s s n 谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立瞿超 杰,苗 银 萍,赵 光 升,赵 林 萍,娄 亚 坤,任 宝 红,曾 小 宇,李宁,许洪超,付燕峰,(郑州中道生物技术有限公司,河南 郑州 ;国家市场监管重点实验室(食品安全快速检测与智慧监管技术),河南郑州 ;河南省食品和盐业检验技术研究院,河南 郑州 )摘要:建立了一种快速检测谷物中玉米赤霉烯酮的时间分辨免疫层析定量检测方法.对荧光微球与抗体制备过程、抗原抗体反应比例、样本前处理过程等实验条件进行优化,在最佳实验条件下,评价试纸条的检测限、准确度、重复性、特异性及稳定性.试纸条最佳研制条件:活化缓冲液为p H ME S,标记缓冲液为p H HE P E S,E D C用量为 g,抗体标记量为 g,膜T线 m g/m l,C线 m g/m l包被,微球偶联物稀释倍.确定 甲醇水和样本按质量体积比混匀提取时间m i n.通过L o g i s t i c曲线四参数拟合,R均为 ,在 n g/g范 围 内 具 有 较 好 的 线 性 关 系,玉 米、小 麦、小 米、大 米 样 本 的 检 出 限 分 别 为 、n g/g.回收率在 ,变异系数均小于.与其他真菌毒素的交叉反应率均小于,放置 d基本稳定.选择 份样本与仪器确证方法比较,结果一致性好.所制备的试纸条具有较好准确性、重复性、特异性及热稳定性,该方法操作简单、快速,结果准确、可视化,适合于大批量样本的快速筛查.关键词:谷物;玉米赤霉烯酮;时间分辨免疫层析;定量中图分类号:T S 文献标志码:A文章编号 ()E s t a b l i s h m e n t o fh i g h s e n s i t i v i t yt i m e r e s o l v e df l u o r e s c e n c e i mm u n o c h r o m a t o g r a p h yf o rt h eq u a n t i f i c a t i o no fz e a r a l e n o n e i nc e r e a l sQU C h a o j i e,M I A O Y i n p i n g,Z HA O G u a n g s h e n g,Z HAO L i n p i n g,L OU Y a k u n,R E N B a o h o n g,Z E N GX i a o y u,L IN i n g,X U H o n g c h a o,F U Y a n f e n g,(Z h e n g z h o uZ h o n g d a oB i o t e c h n o l o g yC o,L t d,Z h e n g z h o u ,C h i n a;K e yL a b o r a t o r yo fF o o dS a f e t yQ u i c kT e s t i n ga n dS m a r tS u p e r v i s i o nT e c h n o l o g yf o rS t a t eM a r k e tR e g u l a t i o n,Z h e n g z h o u ,C h i n a;H e n a nI n s i t u t eo fF o o da n dS a l tI n d u s t r yI n s p e c t i o nT e c h n o l o g y,Z h e n g z h o u ,C h i n a)A B S T R A C T:At i m e r e s o l v e d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i cm e t h o d f o r r a p i da n dq u a n t i t a t i v ed e t e rm i n a t i o no f z e a r a l e n o n e i nc e r e a l sw a se s t a b l i s h e d T h ee x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n ss u c ha st h ep r e p a r a t i o np r o c e s so ff l u o r e s c e n tm i c r o s p h e r e sa n da n t i b o d i e s,t h ep r o p o r t i o no f a n t i g e n a n t i b o d yr e a c t i o n,a n dt h ep r e t r e a t m e n tp r o c e s so f s a m p l e sw e r eo p t i m i z e d T h ed e t e c t i o n l i m i t,a c c u r a c y,r e p e a t a b i l i t y,s p e c i f i c i t ya n ds t a b i l i t yo ft h et e s ts t r i p sw e r ee v a l u a t e du n d e rt h eb e s te x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n s T h eo p t i m u mp r e p a r a t i o nc o n d i t i o n sw e r e a s f o l l o w s:a c t i v a t i o nb u f f e rw a sp H ME S,l a b e l i n gb u f f e rw a sp H HE P E S,E D Cd o s a g ew a s g,a n t i b o d y l a b e l i n ga m o u n tw a s g,m e m b r a n eT l i n ew a s m g/m l,C l i n ew a s m g/m lc o a t e d,m i c r o s p h e r ec o n j u g a t ew a sd i l u t e dt i m e s T h ee x t r a c t i o nt i m eo f m e t h a n o lw a t e ra n ds a m p l e sw a sd e t e r m i n e dt ob em i n,m i x e da c c o r d i n gt ot h em a s sv o l u m e r a t i oo f B y f i t t i n gf o u rp a r a m e t e r so fL o g i s t i c c u r v e,Rw a s ,s h o w i n gag o o d l i n e a r r e l a t i o n s h i pw i t h i n t h e r a n g eo f n g/g T h ed e t e c t i o n l i m i t so f c o r n,w h e a t,m i l l e t a n dr i c e s a m p l e sw e r e ,a n d n g/g,r e s p e c t i v e l y T h er e c o v e r i e sr a n g e df r o m t o ,a n dt h ec o e f f i c i e n to fv a r i a t i o nw a s l e s st h a n T h ec r o s s r e a c t i o nr a t ew i t ho t h e rm y c o t o x i n sw a s l e s s t h a n,a n dw a sb a s i c a l l ys t a b l ea t f o r d a y s s a m p l e sw e r es e l e c t e dt oc o m p a r ew i t h t h e i n s t r u m e n t c o n f i r m a t i o nm e t h o d,a n d t h e r e s u l t sw e r e c o n s i s t e n t T h ep r e p a r e d t e s t s t r i ph a sg o o da c c u r a c y,r e p e a t a b i l i t y,s p e c i f i c i t ya n dt h e r m a l s t a b i l i t y T h em e t h o di ss i m p l e,r a p i d,a c c u r a t ea n dv i s u a l,a n di ss u i t a b l ef o rr a p i ds c r e e n i n go f l a r g eq u a n t i t i e so f s a m p l e s K E YWO R D S:c e r e a l;z e a r a l e n o n e;t i m e r e s o l v e d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h y;q u a n t i f i c a t i o n 瞿超杰等:谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立/年第期玉米赤霉烯酮(Z E N),又称F 毒素,是由田间霉菌镰刀菌产生的一种雌激素类真菌毒素,常见的谷物类玉米、稻谷、大麦、小麦、小米和燕麦等长期储存于高温低湿环境下发霉后产生Z E N.Z E N具有很强的生殖毒性 且对热稳定,高温不易破坏,被国际癌症研究机构列为类致癌物.我国对小麦、玉 米 及 其 谷 物 制 品 中 规 定Z E N最 低 限 制为 g/k g.常用的检测方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法,与上述方法相比,免疫层析具有特异性强、操作便捷、成本低等特点,逐渐被应用于Z E N检测.免疫层析常见的标记物有胶体金 、荧光微球、磁性微球及量子点、时间分辨荧光微球,实现了定性至定量检测的转变,并进一步提高了免疫层析试纸的灵敏度、特异性.基于稀土金属时间分辨特征的荧光免疫层析分析技术,以其高灵敏、抗干扰、检测方便等优势,逐渐成为市场备受青睐的产品.本研究采用羧基修饰的E u包裹荧光微球作为载体偶联抗体,一方面可有效放大免疫信号,提高灵敏度,另一方面镧系元素的引入可有效排除激发光和非特异性荧光的干扰,同时结合配套的标准曲线实现粮谷物中玉米赤霉烯酮的准确、快速、定量分析.材料与方法 实验材料 试剂硝酸纤维素膜、N C膜,赛多利斯;微球,直径 n m,固含,C O OH,苏州为度生物技术有限公 司;玉 米 赤 霉 烯 酮 标 准 品,质 量 浓 度 m g/m l,纯度,P r i b o l a b;羊抗鼠二抗,质量浓度m g/m l,洛阳昊华生物技术有限公司;Z E N单 克 隆 抗 体,质 量 浓 度 m g/m l;Z E N B S A,质量浓度m g/m l,武汉纯度生物科技有限公司;结合垫、样品垫、P V C底板、吸水纸等耗材,上海杰一生物公司;B S A(新生牛血清白蛋白)纯度,盐城赛宝生物科技;(二甲氨基丙基)乙基碳二亚胺盐酸盐(E D C),纯度 ,上海阿拉丁生化科技股份有限公司.实验室用水均为M i l l i Q超纯水.其他试剂均为国产分析纯.玉米、小麦等样本,市售.仪器G L M高速冷冻离心机,湖南湘仪离心机仪器有限公司;超声清洗仪,冠森生物科技(上海)有限公司;X Y Z三维划膜喷金仪HM 、数控裁条机C T S 、自动斩切机Z Q 、恒温培养DH ,上海金标生物科技有限公司;垂直混匀仪XW A,V o r t e x;干式荧光免疫分析仪,郑州中道生物技术有限公司.玉米赤霉烯酮免疫层析试纸条的研制 荧光微球与Z E N单克隆抗体偶联物的制备取微球 g,加入 l m o l/Lp H (N 吗啉)乙磺酸(ME S)活化缓冲液,混匀,加入 gNH S,混匀,加入 gE D C,混匀.避光摇匀 m i n,r/m i n离心 m i n,弃上清,加入 l m o l/Lp H HE P E S缓冲液,超声混匀.加入 g玉米赤霉烯酮单抗,避光摇匀h,加入 l m g/m lB S A,避光摇匀h,r/m i n离 心 m i n,弃 上 清,加 入 m l m o l/L p H HE P E S复 溶 后,避 光 冷 藏保存.包被膜制备在N C膜T线上划浓度 m g/m l的Z E N B S A,C线 划 浓 度 m g/m l羊 抗 鼠 二 抗,l/c m,置于 烘箱干燥h.结合垫制备将 节制备的微球偶联物倍稀释后喷涂在预处理结合垫上,喷涂量为l/c m,真空干燥h,密封室温保存.试纸条制备以P V C为底板,先将N C膜粘贴至底板上,取结合垫重叠N C膜下端mm,然后取样品垫重叠结合垫下端mm,最后贴吸水纸重叠N C膜上端mm,裁成 mm宽度放入卡壳,密封干燥保存备用.样本前处理称取g g样本,加入 m l 甲醇水,r/m i n振荡 m i n,r/m i n离心m i n,取上清液 l,向其中加入 l样本稀释液(m o l/Lp H P B S),混匀成检测液.检测取 l检测液滴加 至加样孔内,室 温 孵 育 m i n,仪器读取待测物含量.试纸条制备条件优化 活化缓冲液优化选择浓度均为 m o l/L的柠檬酸(C A)、醋酸(HA C)、ME S、羟 乙 基 醇 哌 秦 基乙 磺 酸(HE P E S)、磷酸(P B)、硼酸(B B)、碳酸(C B)缓冲液瞿超杰等:谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立/年第期 分别对荧光微球进行活化后,按 法制备试纸条,根据抑制率、释放性、C T线显色情况选择最佳活化缓冲液.抑制率(B B)/B式中,B为空白的T/C值,B为标液的T/C值.偶联缓冲液优化选择浓度均为 m o l/L的 吗啉丙磺 酸(MO P S)、HA C、ME S、HE P E S、P B、B B和C B缓冲液分别对微球和抗体进行标记,按 节制备试纸条,根据抑制率、释放性、C T线显色情况选择最佳活化缓冲液.E D C用量优化分别加入、gE D C进行微球活化,按 法制备试纸条,根据抑制率、释放性、C T线显色情况选择最佳活化缓冲液.抗体用量优化分别加入、g单抗分别与 g微球偶联,按 节制备试纸条,根据抑制率、释放性、C T线显色情况和偶联率选择最佳单抗量.偶联率(添加单抗量上清余单抗量)/添加单抗量 .抗原抗体最佳反应量优化采用二因素水平实验,确定抗原抗体最佳反应比例.固定C线浓度为 m g/m l,梯度设定T线浓度 和 微 球 抗 体 偶 联 物 铺 垫 量.T线 分 别 为 、m g/m l.微球抗体偶联物稀释倍数分别为倍、倍、倍、倍.通过棋盘法确定最佳工作量.样品垫预处理液优化以P B S为 母 液,单 独 或 组 合 添 加 蛋 白 分 子B S A、表面活性剂t w e e n 、大分子P E G 保证荧光微球偶联物的有效释放.按 法制备试纸条,根据抑制率、释放性、C T线显色情况选择最佳预处理液.样本前处理条件优化 提取液优化对比乙酸乙酯、乙腈和甲醇提取效果.准确称取 g玉米样本加标、n g/m l,按 样本前处理方法提取,计算回收率,通过C T线显色情况及回收率评价最佳提取液.提取时间优化准确称取 g玉米样本加标、n g/m l,加入提取液后分别漩涡振荡、m i n.按 样本前处理方法提取,筛选最佳样本提取时间.样本提取比例优化准确称取 g玉米样本加标、n g/m l,分别加入提取液、m l,按 节样本前处理方法提取,筛选最佳提取比例.方法评价 标准曲线和检测限取终浓度分别为、n g/g的标准品 l检测,平行测定次,拟合标准曲线.同时对 份确证不含Z E N的玉米、小麦、大米、小米样本,各 份检测,以样品 次测定结果的均值加倍的标准差,即为检测限 .准确度和精密度在小麦、玉米空白样本中分别加入低、中、高浓度的Z E N标准品,最终浓度分别为、n g/g,并检测空白样本,平行测定次,计算准确度及精密度.准确度(实测样本浓度空白样本浓度)/加标浓度 精密度标准偏差/平均值 特异性评价选择其他常见的真菌毒素标准品 玉米赤霉烯醇(z e a r a l e n o l)、玉米赤霉烯醇(z e a r a l e n o l)、黄曲霉毒素B(A F B)、T 毒素(T )、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(D ON)、伏马毒素(F B)、赭曲霉毒素A(O T A),分别添加在空 白玉米样本 中,终浓度为 n g/g.按照上述方法检测,平行测定次,取平均值.稳定性评价将试纸条置于 恒温箱加速破坏,并与未破坏试纸条进行对比,考察其稳定性.分别在第天、第天、第天、第天、第天、第 天、第 天抽取试纸条,记录试纸条的T、C线荧光强度,计算T/C值,分析数据,评价试纸条的稳定性.与仪器确证方法比较选取常见的谷物中小麦、玉米、大米、小米样本各份,分别采用仪器确证法和本研究方法进行检测,计算相对偏差.相对偏差(超高液相色谱法检测结果时间分辨免疫层析定量检测结果)/超高液相色谱法检测结果 .结果与讨论 瞿超杰等:谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立/年第期 试纸条最适条件优化 活化缓冲液优化本实验选择种不同种类活化缓冲液(C A、HA C、ME S、HE P E S、P B、B B、C B)分别对荧光微球进行活化.对比发现,ME S缓冲液活化微球铺垫时,微球抗体偶联物释放较为充分,T值较亮且抑制率较高(见图).图不同种类活化缓冲液筛选 标记缓冲液优化合适的标记缓冲液能够使微球与抗体蛋白结合位点充分结合,能够有效保证复合物的稳定性,并避免凝集现象的发生.本实验在不同的标记缓冲液中进行标记抗体的标记,实验结果显示在不同的标记缓冲液中标记的微球存在不同程度的聚集,而在HE P E S缓冲液中,标记微球分散均一,无明显聚集.经加标Z E N标液滴卡 对比,HE P E S缓冲 液中,偶联微球的亮度最高,结合垫释放性较好,且抑制率明显高于其它标记缓冲液,见图.图不同种类标记缓冲液筛选 活化剂E D C用量优化经实验加标对比发现,随着E D C用量增大,偶联微球在微球垫上存在聚集情况,另外,抑制率随着活化剂E D C的 用 量 呈 先 增 加 后 下 降 的 趋 势,见图.当活化剂E D C的加入量为 g时,抑制率最高,活化效果最好.图活化剂用量优化 标记抗体用量优化荧光微球与抗体的结合具有一定范围,当抗体浓度低时标记效率低,灵敏度低,当抗体量过高时偶联效率降低且过多抗体随上清液弃去,导致原料浪费.如图所示,随抗体量增加,微球偶联效率先增加后降低,当抗体量为 g时较为合适,此时微球与抗体比例为.图单抗标记量优化 抗原抗体最佳反应量优化基于前期试验,选择合适范围的微球单抗偶联物和Z E N B S A进行组合.不同条件组合情况见表.随T线包被浓度增大,T线荧光强度逐渐增大;随微球偶联物稀释倍数增大,T线荧光强度逐渐降低.当选用T线 m g/m l包被,微球偶联物稀释倍,T线荧光强度虽不是最大,但是标准品抑制瞿超杰等:谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立/年第期 率和结合垫释放性较好.表棋盘滴定法优化抗原及微球偶联物工作量抗原浓度m gm l稀释倍数T平均值C平均值T/C值抑制率C T 倍 倍 倍 倍 C T 倍 倍 倍 倍 C T 倍 倍 倍 倍 样品垫预处理液优化样品垫预处理后能够有效减少成分差异,调节爬速,控制释放微球偶联物,抑制非特异性吸附,提高检测灵敏度.根据溶液的配伍原则宜简不宜繁,我们对常见的蛋白B S A、表面活性剂t w e e n 、大分子P E G 的用量进行调试.本实验对几种物质的浓度搭配比例进行了优化,号配方B S A、吐温、t w e e n 、蔗糖组合时,T值亮度较高,微球偶联物的释放较充分,灵敏度也较好,见表.表样本垫预处理液优化编号T值亮度释放性抑制率号 上沿红色 号 整体深粉 号 明显红色聚集 号 明显红色聚集 号 整体微红 号 无色 号 微粉 号 微粉 样本前处理条件优化通过对提取液进行对比,乙酸乙酯提取的回收率最低,且样本基质干扰较大,结合垫明显红色聚集.而提取剂为甲醇时,样本回收率均在 (见图),C T线显色正常且释放性较好.通过对振荡时间的对比(见图),发现振荡时间m i n以后,样本回收率相差不大,为节约时间,提高检测效率,选择m i n.在确定提取液和提取时间的前提下,比较样本和提取液质量体积比为、时样本回收情况,由图可知,最佳,回收率接近 ,且样本基质干扰小.图样本提取液筛选图样本提取时间优化图样本提取比例优化 方法评价 标准曲线以加入标准品浓度为横坐标,T/C值为纵坐标,通过L o g i s t i c曲线拟合(四参数法)制作标准曲线(见图).图标准曲线曲线Y(AD)/(x/C)BD,其中 瞿超杰等:谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立/年第期A ,B ,C ,D ,标曲拟合度R .选取确证的不含Z E N的玉米、小麦、大米、小米样本各 份,读取各样本T/C值,并将T/C值代入回归方程中,根据xS求得检测限,玉米、小麦、小 米 和 大 米 分 别为 、n g/g.准确性和重复性采用加标回收考察准确性,通过对玉米、小麦样本的检测,结果显示如表,准确度在 之间,精密度小于,均满足检测的需求.表不同样本准确性和精密度(n)样本添加浓度n gm l平均测定浓度/n gm l平均回收率/批内变异系数/玉米 小麦 特异性评价如表所示,玉米赤霉烯酮与常见类似物之间交叉反应率均,说明该方法有较好的特异性.表特异性实验添加标准品交叉反应率/玉米赤霉烯醇玉米赤霉烯醇黄曲霉毒素BT 毒素雪腐镰刀菌烯醇伏马毒素B赭曲霉毒素A 稳定性评价检测结果如图,存放至d时,T值略有下滑,至 d时基本稳定,但是T/C值至 d无明显变化,说明试纸条的稳定性良好.图玉米赤霉烯酮荧光定量试纸条 稳定性考察 与仪器确证方法比较参照食品安全国家标准G B 食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定(液相色谱法)检测,同时将本研究方法检测结果和仪器确证法进行比较,计算相对偏差,结果见表.由表可知,T R F I A法与液相色谱法的相对偏差在 ,两种方法具有较好的一致性.表两种检测方法结果比较样本名称编号T R F I A法gk g液相色谱法gk g相对偏差大米 玉米 小米 小麦 结论本研究基于时间分辨免疫层析构建了定量检测谷物样本中玉米赤霉烯酮的方法,通过实验条件优化,得到最佳工艺条件.所研发试纸条对玉米、小麦、小米、大米样 本 的 检 出 限 分 别 为 、n g/g,检测范围为 n g/g,实际样本添加回收率(准确度)为 ,精密度均小于,且 放置 d基本稳定.T R F I A法与液相色谱法的相对偏差在 ,两种方法具有较好的一致性.因此,本研究建立的方法具有较好的准确性、重复性、稳定性和一致性,能有效提升实际样本产品质量的检测能力,再配套成本低廉便于携带的小型荧光读卡仪,不仅能实现快速评价的定性判断,还能为谷物样本中玉米赤霉烯酮的准确测定提供定量结果.此外,试纸条操作简瞿超杰等:谷物中玉米赤霉烯酮高灵敏时间分辨荧光免疫层析定量法的建立/年第期 单、成本低廉、灵敏度高,可为基层单位或企业厂家对大量样本中玉米赤霉烯酮的快速筛选和现场快速检测提供强有力的保障.参考文献J I N Y,C HE N Q,L UO S,e ta l D u a ln e a r i n f r a r e df l u o r e s c e n c e b a s e dl a t e r a lf l o wi mm u n o s e n s o rf o rt h ed e t e c t i o no fz e a r a l e n o n ea n dd e o x y n i v a l e n o l i nm a i z eJ F o o dC h e m i s t r y,:WU SJ,L I U L H,D UAN N,e ta l A p t a m e r B a s e dL a t e r a lF l o w T e s tS t r i pf o rR a p i dD e t e c t i o no fZ e a r a l e n o n ei nC o r nS a m p l e sJ J o u r n a l o fa g r i c u l t u r a l a n df o o dc h e m i s t r y,():卫生部食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量:G B S北京:中国标准出版社KA TA R Z YNA K,R E NA T A G,C E N D R OW S K IK A n a l y t i c a lp r o c e d u r e f o r t h ed e t e rm i n a t i o no f z e a r a l e n o n e i ne n v i r o n m e n t a l a n db i o l o g i c a l s a m p l e sJ C r i t i c a lR e v i e w s i nA n a l y t i c a lC h e m i s t r y,():T RU C K S E S S M W,P OHL AN D A E M y c o t o x i nP r o t o c o l sM T o t o w a,N e wJ e r s e y:H u m a n aP r e s s,S H IL,YU T,L UO M,e ta l P r e p a r a t i o nm o n o c l o n a l t y p ea n t i i d i o t y p ea n t i b o d yo f z e a r a l e n o n e a n dd e v e l o p m e n t o f g r e e nE L I S Aq u a n t i t a t i v ed e t e c t i n gt e c h n i q u eJ P r e p a r a t i v eB i o c h e m i s t r y&B i o t e c h n o l o g y,():HOUS,MAJ,C HE N G Y,e ta l O n e s t o pr a p i dd e t e c t i o no ff u m o n i s i nB,d e x y o n i v a l e n o la n dz e a r a l e n o n ei ng r a i n sJF o o dC o n t r o l,:P AN M,MA T,YAN GJ,e ta l D e v e l o p m e n to f l a t e r a l f l o wi mm u n o c h r o m a t o g r a p h i ca s s a y su s i n gc o l l o i d a la us p h e r ea n dn a n o r o d s a s s i g n a l m a r k e r f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o fz e a r a l e n o n e i nc e r e a l sJ F o o d s,():张贺秋生物医学实验技术系列丛书:胶体金标记探针与酶联免疫斑点技术M北京:军事医学科学出版社,R A P HA E L W,T S EH L a t e r a l f l o wi mm u n o a s s a y|m a r k e tt r e n d s i n l a t e r a l f l o wi mm u n o a s s a y sM :GUO L,S HA O Y,D UAN H,e ta l M a g n e t i cq u a n t u md o tn a n o b e a d b a s e d f l u o r e s c e n t i mm u n o c h r o m a t o g r a p h i c a s s a y f o rt h eh i g h l ys e n s i t i v ed e t e c t i o no f a f l a t o x i nBi nd a r ks o ys a u c eJ A n a l y t i c a lC h e m i s t r y,L IM,WAN G H,S UNJ,e ta l R a p i d,o n s i t e,a n ds e n s i t i v ed e t e c t i o no f a f l a t o x i n M i nm i l kp r o d u c t sb yu s i n gt i m e r e s o l v e df l u o r e s c e n c em i c r o s p h e r et e s ts t r i pJ F o o dC o n t r o l,:WAN GX,WU X,L UZS,e ta l C o m p a r a t i v es t u d yo f t i m e r e s o l v e df l u o r e s c e n tn a n o b e a d s,q u a n t u md o tn a n o b e a d sa n dq u a n t u md o t sa sl a b e l si nf l u o r e s c e n c ei mm u n o c h r o m a t o g r a p h yf o rd e t e c t i o no fa f l a t o x i nBi ng r a i n sJ B i o m o l e c u l e s,():X I N G Y,WU X,L I U L,e ta l D e v e l o p m e n to faf l u o r e s c e n ti mm u n o a s s a ys t r i p f o r t h e r a p i dq u a n t i t a t i v ed e t e c t i o no f c a d m i u mi nr i c eJ F o o dA g r i c I mm u n o l,(),孙明山检出限的分类与计算方法J现代化农业,():王兴国理化检验与数理统计M河南:河南科学技术出版社,:(责任编辑:梅竹)(上接第 页)赵静,宁月莲,谢瑞龙,等电感耦合等离子体质谱仪测定乳粉中铅的检出限方法优化J乳业科学与技术,():D O I:/j c n k i j d s t D ES OU Z AJR,D UY C KCB,F ON S E C ATCO,e t a l M u l t i e l e m e n t a l d e t e r m i n a t i o n i no i lm a t r i c e sd i l u t e di nx y l e n eb yI C P M Sw i t had y n a m i cr e a c t i o nc e l le m p l o y i n gm e t h a n ea sr e a c t i o ng a sf o rs o l v i n gs p e c i f i ci n t e r f e r e n c e sJ J o u r n a lo fA n a l y t i c a lA t o m i cS p e c t r o m e t r y,():C AM I NF,L A R C HE RR,P E R I N IM,e ta l C h a r a c t e r i s a t i o no fa u t h e n t i c I t a l i a ne x t r a v i r g i no l i v eo i l sb ys t a b l e i s o t o p e r a t i o so fC,Oa n dHa n dm i n e r a l c o m p o s i t i o nJ F o o dC h e m i s t r y,():D R I V E L O SSA,G E O R G I OUCA M u l t i e l e m e n t a n dm u l t i i s o t o p e r a t i oa n a l y s i st od e t e r m i n et h eg e o g r a p h i c a lo r i g i no ff o o d s i nt h e e u r o p e a nu n i o nJ T r e n d s i nA n a l y t i c a lC h e m i s t r y,:国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局食品安全国家标准 食品中铅的测定:G B S北京:中国标准出版社 国家卫生和计划生育委员会食品安全国家标准 食品中镉的测定:G B S北京:中国标准出版社 国家卫生和计划生育委员会食品安全国家标准 食品中铬的测定:G B S北京:中国标准出版社 国家卫生和计划生育委员会食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定:G B S北京:中国标准出版社 国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局食品安全国 家标准 食品中 铝的测定:G B S北京:中国标准出版社 国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局食品安全国家标准 食品中污染 物的限量:G B S北京:中国标准出版社 国家卫生和计划生育委员会食品安全国家标准 食品添加剂使用标准:G B S北京:中国标准出版社(责任编辑:梅竹)