高黏粘液型肺炎克雷伯菌临床分布、毒力基因检测及耐药分析.pdf
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1、本文引文格式:乔艳,孙红,应冲涛,等.高黏粘液型肺炎克雷伯菌临床分布、毒力基因检测及耐药分析J.右江民族医学院学报,2 0 2 3,4 5(4):6 3 0-6 3 4.【论著与临床报道】高黏粘液型肺炎克雷伯菌临床分布、毒力基因检测及耐药分析乔艳1,孙红2,应冲涛3,陶赵宇2,郭普2(1.蚌埠医学院第一附属医院感染性疾病科,安徽 蚌埠 2 3 3 0 0 4;2.蚌埠医学院第一附属医院检验科,安徽 蚌埠 2 3 3 0 0 4;3.蚌埠医学院第一附属医院输血科,安徽 蚌埠 2 3 3 0 0 4)摘 要:目的 了解高黏粘液型肺炎克雷伯菌(h y p e r m u c o v i s c o
2、u sK l e b s i e l l aP n e u m o n i a,h mK P)临床分布、耐药性及毒力基因携带情况。方法 收集蚌埠医学院第一附属医院2 0 2 1年1月至1 2月临床分离的肺炎克雷伯菌,自动化仪器法进行鉴定和药敏实验,黏液拉丝试验筛选h mK P,P C R方法检测h mK P菌株的毒力基因和荚膜分型。结果 2 0 2 1年1月至1 2月临床共分离出5 5 4株肺炎克雷伯菌,其中h mK P9 6株,占1 7.3 3%(9 6/5 5 4)。主要分离自脓液、血液标本及痰标本,分别占3 0.2 1%(2 9/9 6)、2 7.0 8%(2 6/9 6)和2 1.8
3、8%(2 1/9 6)。9 6株h mK P的荚膜分型,主要为K 1和K 2型,分别占6 0.4 2%(5 8/9 6)和1 6.6 7%(1 6/9 6),其中8株碳青霉烯耐药的h mK P荚膜血清型主要为K 6 4型。9 6株h mK P主要携带的毒力基因为i u t A、r mp A、a e r o b a c t i n和m a g A基因,分别占9 5.8 3%(9 2/9 6)、9 4.7 9%(9 1/9 6)、8 9.5 8%(8 6/9 6)和6 0.4 2%(5 8/9 6)。h mK P对碳青霉烯类抗菌药物厄他培南和亚胺培南耐药率分别为8.3 3%和7.2 9%,低于普通
4、型肺炎克雷伯菌,差异有统计学意义(P0.0 5)。结论 本院分离肺炎克雷伯菌高毒力株主要为K 1、K 2荚膜血清型,同时携带多种毒力基因,对常用抗菌药物较为敏感,碳青霉烯耐药的h mK P值得临床关注。关键词:高黏粘液型肺炎克雷伯菌;毒力基因;耐药中图分类号:R 3 7 8.9 9 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 1-5 8 1 7(2 0 2 3)0 4-0 6 3 0-0 5d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 1-5 8 1 7.2 0 2 3.0 4.0 1 5C l i n i c a l d i s t r i b u t i o n,v i r
5、 u l e n c eg e n ed e t e c t i o na n dd r u gr e s i s t a n c ea n a l y s i so fh y p e r m u c i n o u sK l e b s i e l l ap n e u m o n i a eQ i a oY a n1,S u nH o n g2,Y i n gC h o n g t a o3,T a oZ h a o y u2,G u oP u2(1.D e p a r t m e n t o fI n f e c t i o u sD i s e a s e s,T h eF i r s
6、 tA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fB e n g b uM e d i c a lC o l l e g e,B e n g b u2 3 3 0 0 4,A n h u i,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o fC l i n i c a lL a b o r a t o r y,T h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fB e n g b uM e d i c a lC o l l e g e,B e n g b u2 3 3 0 0 4,A n h
7、u i,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o fB l o o dT r a n s f u s i o n,T h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fB e n g b uM e d i c a lC o l l e g e,B e n g b u2 3 3 0 0 4,A n h u i,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e c l i n i c a l d i s t r i b u
8、 t i o n,d r u gr e s i s t a n c ea n dv i r u l e n c eg e n e s c a r r y i n go fh y p e r m u c o v i s c o u sK l e b s i e l l aP n e u m o n i a e(h mK P).M e t h o d s K l e b s i e l l aP n e u m o n i a ec l i n i c a l l yi s o l a t e df r o mT h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t
9、 a l o fB e n g b uM e d i c a lC o l l e g e f r o mJ a n u a r yt oD e c e m b e r2 0 2 1w e r ec o l l e c t e d.I d e n t i f i c a t i o na n dd r u gs e n s i t i v i t yt e s tw e r ec a r r i e do u tb ya u t o m a t i c i n s t r u m e n tm e t h o d.h mK Pw a ss c r e e n e db ym u c u ss
10、t r i n gt e s t.V i r u l e n c eg e n ea n dc a p s u l e t y p i n go fh mK Ps t r a i nw e r ed e t e c t e db yP C R.R e s u l t s At o t a l o f 5 5 4s t r a i n so fK l e b s i e l l ap n e u m o n i a ew e r e i s o l a t e d f r o mJ a n u a r y t oD e c e m b e r 2 0 2 1,i n c l u d i n g9
11、 6s t r a i n s036第4 5卷 第4期 右江民族医学院学报 V o l.4 5N o.42 0 2 3年8月 J o u r n a l o fY o u j i a n gM e d i c a lU n i v e r s i t yf o rN a t i o n a l i t i e s A u g.2 0 2 3第一作者简介:乔艳(1 9 8 1-),女,本科,副主任护师,研究方向:感染性疾病护理,E-m a i l:q i a o y a n 0 3 1 01 6 3.c o m 通讯作者简介:郭普(1 9 7 6-),男,硕士,主任技师,副教授,研究方向:病原菌
12、致病与耐药机制,E-m a i l:3 5 0 4 6 2 4 9 0 2q q.c o mo fh mK P,a c c o u n t i n g f o r 1 7.3 3%(9 6/5 5 4).T h e yw e r em a i n l y i s o l a t e d f r o mp u s,b l o o da n ds p u t u m,a c c o u n t-i n gf o r3 0.2 1%(2 9/9 6),2 7.0 8%(2 6/9 6)a n d2 1.8 8%(2 1/9 6)r e s p e c t i v e l y.K 1a n dK 2w
13、 e r e t h em a j o r c a p-s u l a r s e r o t y p e s i n9 6s t r a i n so fh mK P,a c c o u n t i n gf o r6 0.4 2%(5 8/9 6)a n d1 6.6 7%(1 6/9 6)r e s p e c t i v e l y.A-m o n gt h e m,K 6 4w a s t h em a j o rc a p s u l a rs e r o t y p e i n8s t r a i n so f c a r b a p e n e m-r e s i s t a
14、n th mK P.T h em a i nv i r u-l e n c eg e n e so f 9 6h mK Ps t r a i n sw e r ei u t A,r mp A,a e r o b a c t i na n dm a g A,a c c o u n t i n gf o r9 5.8 3%(9 2/9 6),9 4.7 9%(9 1/9 6),8 9.5 8%(8 6/9 6)a n d6 0.4 2%(5 8/9 6),r e s p e c t i v e l y.T h e r e s i s t a n c e r a t e s o f h mK Pt
15、oe r t a p-e n e ma n d i m i p e n e m w e r e8.3 3%a n d7.2 9%r e s p e c t i v e l y,w h i c hw e r e l o w e r t h a nt h o s eo fK.p n e u m o n i a e(P5mm即为阳性,高毒力株,5mm为阴性3。1.4 P C R方法检测h mK P荚膜血清型和毒力基因1.4.1 基因引物 引物设计参照参考文献4-5,K1、K2、K5、K5 4、K5 7、r mp A、a e r o b a c t i n、i u t A及m a g A基因引物由上海
16、捷瑞生物工程有限公司合成,引物序列及产物大小,见表1。1.4.2 P C R扩增 使用煮沸法提取D NA模板,P C R反应体系:模板D NA1L、上下游引物各1L、2P C R M i x t u r e2 5L、H2O 2 2L,合 计5 0L。将P C R扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,成像及结果分析,同时设阴性对照和阳性对照。表1 基因引物基因名称引物序列(5 -3)产物大小/b pK1F:G G T G C T C T T TA C AT C AT T G C1 2 8 3R:G C AAT G G C C AT T T G C G T TAGK2F:GA C C C GATAT T C
17、 ATA C T T GA C AGAG6 4 1R:C C T GAAG TAAAAT C G TAAATAGAT G G CK5F:T G G TAG T GAT G C T C G C GA2 8 0R:C C T GAA C C C A C C C C AAT CK5 4F:C AT TAG C T C AG T G G T T G G C T8 8 1R:G C T T GA C AAA C A C C ATAG C AGK5 7F:C T C AG G G C TAGAAG T G T C AT1 0 3 7R:C A C TAA C C C AGAAAG T C GAGr mp
18、AF:A C T G G G C TA C C T C T G C T T C A5 1 6R:C T T G C AT GAG C C AT C T T T C Aa e r o b a c t i nF:G C ATAG G C G GATA C GAA C AT5 5 6R:C A C AG G G C AAT T G C T TA C Ci u t AF:AAT C A C C T G G G G G C T G GAT G C T6 8 3R:C C G C A C C T T C C A C G C C G TAATm a g AF:G G T G C T C T T TA C A
19、T C AT T G C1 2 8 2R:G C AAT G G C C AT T T G C G T TA C1.5 碳青霉烯耐药h mK P全基因组测序 挑取经过1 82 4h3 7培养的血琼脂平板上的纯菌落加入3m L的L B肉汤培养基中,经3 7、2 2 0r/m i n摇床1 2h培养后,取菌液1m L,1 20 0 0r/m i n离心2m i n后,弃上清,留沉淀,用D NA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)提取菌株D NA,超微量分光光度计检测回收产物的纯度和浓度,合格样品O D 2 6 0/O D 2 8 0为1.71.9。i l l u m i n aH i s e q
20、2 5 0 0测序平台(上海生工生物股份有限公司)对菌株进行全基因组测序。在L i n n u x系统下运行S P A d e s-2.0软件拼接原始数据。1.6 统计学方法 采用WHON E T5.6软件进行药敏结果统计分析,利用S P S S2 2.0进行数据统计分析,分类变量采用2检验进行分析,P0.0 5为差异具有统计学意义。2 结果2.1 h mK P株分布 蚌埠医学院第一附属医院2 0 2 1年1月至1 2月临床分离的5 5 4株肺炎克雷伯菌中1362 0 2 3年 右江民族医学院学报 第4期h mK P9 6株,占1 7.3 3%。分离自脓液2 9株,血液标本2 6株,痰液2 1
21、株,胆汁6株,穿刺液5株,尿液5株,腹水4株。2.2 粘液丝实验 5 5 4株肺炎克雷伯菌中9 6株粘液丝实验阳性,见图1。图1 粘液丝实验阳性菌株2.3 9 6株h mK P对 抗 菌 药 物 的 耐 药 率 9 6株h mK P氨苄西林-舒巴坦耐药率为3 5.4 2%,头孢曲松、氨曲南、头孢替坦和哌拉西林-他唑巴坦等-内酰胺类以及氟喹诺酮类抗菌药物环丙沙星和左旋氧氟沙星耐药率均低于1 5.0 0%。碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南、厄 他 培 南 耐 药 率 分 别 为7.2 9%和8.3 3%。h mK P对于在测试的抗菌药物耐药率均低于普通肺炎克雷伯菌(P0.0 5),见表2。表2 9 6株
22、h mK P对抗菌药物的耐药率抗菌药物h mK P(n=9 6)非h mK P(n=4 5 8)2P氨苄西林-舒巴坦3 4(3 5.4 2)2 5 2(5 5.0 2)1 2.2 1 50.0 0 1哌拉西林-他唑巴坦9(9.3 8)1 1 6(2 5.3 3)1 1.5 5 90.0 0 1头孢他啶1 1(1 1.4 6)2 1 2(4 6.2 9)4 0.0 3 30.0 0 1头孢曲松1 5(1 5.6 3)2 5 5(5 5.6 8)5 0.9 5 80.0 0 1头孢吡肟1 0(1 0.4 2)1 7 8(3 8.8 6)2 8.6 4 90.0 0 1头孢替坦9(9.3 8)1 1
23、 7(2 5.5 5)1 1.8 1 10.0 0 1氨曲南1 3(1 3.5 4)2 4 4(5 3.2 8)5 0.3 8 10.0 0 1厄他培南8(8.3 3)8 5(1 8.5 6)5.9 4 10.0 1 5亚胺培南7(7.2 9)9 7(2 1.1 8)1 0.0 3 80.0 0 2阿米卡星9(9.3 8)1 3 4(2 9.2 6)1 6.3 8 40.0 0 1庆大霉素1 3(1 3.5 4)2 1 4(4 6.7 2)3 6.1 3 30.0 0 1妥布霉素1 6(1 6.6 7)1 7 9(3 9.0 8)1 7.4 8 40.0 0 1环丙沙星1 2(1 2.5 0)
24、2 4 4(5 3.2 8)5 3.0 8 60.0 0 1左旋氧氟沙星1 4(1 4.5 8)2 1 6(4 7.1 6)3 4.6 9 20.0 0 1甲氧苄啶-磺胺甲噁唑1 5(1 5.6 3)2 3 5(5 1.3 1)4 0.8 1 40.0 0 1 注:表内计数资料数据用n(%)表示。2.4 9 6株h mK P荚膜血清分型及毒力基因 9 6株h mK P荚膜血清分型:5 8株为K 1型,占6 0.4 2%;K 2型为1 6株,占1 6.6 7%。9 6株h mK P中9 2株携带毒力基因i u t A基因,占9 5.8 3%;9 1株携带r mp A,占9 4.7 9%;8 6株
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