甘肃省甲基丙二酸血症发病率及基因突变分析.pdf
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1、甘肃省甲基丙二酸血症发病率及基因突变分析王 兴,刘芙蓉,张 钏,陈 雪,郝胜菊,李修晶甘肃省妇幼保健院 甘肃省出生缺陷防控研究重点实验室,甘肃 兰州 730050收稿日期:2023-03-13基金项目:甘肃省科技计划资助项目-民生科技专项-社会发展专题(20CX4FA003);甘肃省卫生健康行业科研资助项目(GSWSKY2020-39)作者简介:李修晶,女,主治医师,研究方向为新生儿疾病,e-mail:,通信作者摘要:目的目的 研究甘肃省甲基丙二酸血症的发病率及致病基因突变谱。方法方法 回顾性分析2018年1月-2021年12月甘肃省妇幼保健院新生儿疾病筛查中心对各地州市送检新生儿样本遗传代谢
2、病筛查、诊断的结果,得出甘肃省甲基丙二酸血症发病率;根据新生儿疾病筛查中心和临床儿科确诊甲基丙二酸血症患儿的基因检测结果,探索甘肃省甲基丙二酸血症的临床分型及基因突变位点。结果结果 甘肃省妇幼保健院新生儿疾病筛查中心2018年1月-2021年12月共筛查213 786例新生儿干血斑样本,确诊甲基丙二酸患儿22例,发病率为1/9 718;对25例甲基丙二酸患儿(新生儿疾病筛查中心20例、临床儿科 5 例)进行基因检测,共鉴定出 MMUT、MMAA 和 MMACHC 3 个基因 31 个突变位点。MMUT 基因c.323G A(9.09%)、c.917C T(9.09%)、c.494A G(9.0
3、9%)和c.984delC(9.09%)突变以及MMACHC基因c.609G A(46.15%)、c.567dupT(11.54%)、c.80A G(7.69%)和c.394C T(7.69%)突变较为常见;单纯型12例(48%),合并型13例(52%)。结论结论 甲基丙二酸血症在甘肃省新生儿群体中有较高的发病率、病死率;合并型甲基丙二酸血症占比略高;MMUT、MMAA和MMACHC基因突变位点的发现,可为甘肃省后续开展遗传代谢病基因筛查、遗传咨询及产前诊断提供理论基础。关键词:新生儿疾病筛查;遗传代谢病;甲基丙二酸血症;基因分型中图分类号:R394文献标识码:Adoi:10.13885/j.
4、issn.1000-2812.2023.06.012Incidence rate and gene mutation analysis ofmethylmalonic acid in Gansu ProvinceWang Xing,Liu Furong,Zhang Chuan,Chen Xue,Hao Shengju,Li XiujingGansu Provincial Key Laboratory of Birth Defect Prevention and Control,Gansu Province Maternal and Child Health Care Hospital,Lanz
5、hou 730050,ChinaAbstract:Objective To investigate the incidence,gene mutation spectrum and prognosis of methylmalonic acidemia in Gansu Province.Methods Retrospective analysis of the screening and diagnostic results of genetic and metabolic diseases of newborn samples submitted by the Neonatal Disea
6、se Screening Center of Gansu Provincial Maternal and Child Health Care Hospital from January 2018 to December 2021 in various regions,states and cities indicated that the incidence rate of methylmalonic acid in Gansu Province.According to the genetic testing results of children with methylmalonic ac
7、id confirmed by the Neonatal Disease Screening Center and Clinical Pediatrics,the clinical typing and gene mutation sites of methylmalonic acid in Gansu Province were explored.Results In the past 4 years,a total of 213 786 samples of neonatal dry blood spots were screened by the Neonatal Disease Scr
8、eening Center,and 22 cases were diagnosed with methylmalonic acid,with an incidence rate of 1/9 718.A total of 31 mutation sites of MMUT,MMAA and MMACHC genes were identified by genetic testing in 25 children with methylmalonic acid(20 cases in Neonatal Disease Screening Center and 5 in Clinical Ped
9、iatrics).MMUT gene c.323G A(9.09%),c.917C T(9.09%),c.494A G(9.09%)文章编号:1000-2812(2023)06-0072-05第49卷 第6期2023年6月兰州大学学报(医 学 版)Journal of Lanzhou University(Medical Sciences)Vol.49 No.6June.2023甲基丙二酸血症(methylmalonic academia,MMA)是由于甲基丙二酰辅酶A变位酶或其辅酶钴胺素代谢缺陷,导致甲基丙二酸、甲基枸橼酸、3-羟基丙酸等代谢产物在体内异常蓄积的一种遗传代谢病。患儿可出现喂养
10、困难、呕吐、昏迷、酸中毒、生长发育迟滞等临床表现,因缺乏临床特异性,容易漏诊或误诊,延误治疗可导致多器官不可逆损伤甚至死亡1。应用串联质谱技术筛查新生儿群体和临床高危儿,后续通过尿气相质谱或基因测序技术进行疾病鉴别诊断,是早发现、早诊断、早治疗、降低疾病伤害的有效途2。MMA 在全球的发病率为 1/48 0001/250 0003,中国总体发病率为1/28 0004,但不同地区发病率存在明显差异性,呈现北方地区高于南方地区的特点。根据患儿是否伴有血同型半胱氨酸水平升高,可分为单纯型 MMA 和合并型 MMA。单纯型MMA 可 由 MMUT、MMAA、MMAB、MCEE、MMADHC 基因变异引
11、起,合并型 MMA 可由MMACHC、MMADHC 及 LMBRD1 基 因 变 异 引起5。本研究回顾性分析2018年1月-2021年12月在甘肃省妇幼保健院新生儿疾病筛查中心进行遗传代谢病筛查的新生儿MMA发病率,以及新生儿疾病筛查中心和临床儿科MMA患儿的基因诊断数据,探讨甘肃省MMA的发病率、临床分型和基因突变谱。1研究对象研究对象2018年1月-2021年12月,甘肃省各地州市送往甘肃省妇幼保健院新生儿疾病筛查中心符合新生儿疾病筛查技术规范要求的213 786例新生儿样本进行串联质谱筛查,22例确诊为MMA,对其中20例及5例甘肃省妇幼保健院临床儿科确诊的MMA患儿进行基因诊断。本研
12、究经甘肃省妇 幼 保 健 院 伦 理 委 员 会 批 准(批 件 文 号:2021GSFY伦审22号),征得所有家系成员同意,签署知情同意书。2研究方法研究方法2.1 仪器与试剂串联质谱检测系统,Waters TQD 串联质谱仪、Waters 2777C 自动进样器、Waters 1525 u 高效液相色谱仪泵购自美国Waters 公司;尿气相质谱检测系统,GC-MS QP 2010气相色谱-质谱联用仪购自日本岛津公司。串联质谱-非衍生化试剂盒购自芬兰PerKin Elmer公司,尿气相质谱检测试剂盒购自深圳爱湾医学检验实验室。血细胞基因组DNA提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司。2.2
13、样本采集与保存 串联质谱检测样本,使用新生儿疾病筛查S&S903滤纸片采集新生儿足跟血,收集3个直径大于 8 mm的血斑,室温下自然晾干,26 C保存。气相质谱检测样本,使用15 mL无菌试管收集患儿510 mL尿液样本,-20 C保存。基因检测样本,使用EDTA抗凝管采集患儿及其父母外周血样本23 mL,DNA提取后-20 C保存。2.3 串联质谱检测氨基酸和酰基肉碱用打孔器取 3.2 mm 直径干血斑样本和质控品置于 96孔板内,每孔加 100 L 按照试剂盒说明书配置的萃取工作液,在恒温震荡器内45 C、700 r/min萃取45 min后移板上机检测包括乙酰肉碱(C2)、丙酰肉碱(C3
14、)在内的11种氨基酸和31种酰基肉碱浓度。2.4 气相质谱检测有机酸按照深圳爱湾医学检验实验室提供的操作流程,根据尿液样本肌酐浓度取不同体积尿液,尿素酶处理后加内标17烷酸、24烷酸和托品酸并定and c.984delC(9.09%),and MMACHC gene c.609G A(46.15%),c.567dupT(11.54%),c.8 0A G(7.69%)and c.394C T(7.69%)were common.There were 12 cases(48%)of simple type and 13(52%)of compli-cated type.Conclusion Met
15、hylmalonic acidemia has a high incidence and fatality rate in newborn population in Gansu Province.The proportion of combined methylmalonic acidemia was slightly higher.The discovery of MMUT,MMAA and MMACHC gene mutation sites can provide a theoretical basis for genetic screening,genetic counseling
16、and prenatal diagnosis of genetic metabolic diseases in Gansu Province.Keywords:neonatal disease screening;genetic metabolic disease;methylmalonic acidemia;genotyping第6期王 兴,等:甘肃省甲基丙二酸血症发病率及基因突变分析73第49卷兰州大学学报(医 学 版)容至2 mL,经盐酸羟胺、氢氧化钠和盐酸处理,乙酸乙酯萃取2次,甲基硅烷化衍生后上机检测包括甲基丙二酸在内的有机酸浓度。2.5 基因检测患儿及其父母外周血DNA样本送北京迈
17、基诺基因科技股份有限公司,采用高通量测序Panel法进行遗传代谢病相关基因检测以明确致病变异,测序平均深度为200,大于20的靶向基因序列测序达97%以上。2.6 基因数据分析高通量测序得到的结果与参考基因组(GRCh37/hg19)比对得到所有变异的文件,筛选检测到的碱基变异,应用PolyPhen2(http:/genetics.bwh.harvard.edu/pph2/)和 PROVEAN(https:/provean.jcvi.org/index.php)软件对新变异进行蛋白功能预测,新变异致病性判读依据美国医学遗传学与基因组学会2015版指南。2.7 筛查、诊断标准及随访串联质谱结果
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