寒热平药性苗药隔药灸对类风湿性关节炎模型家兔穴位刺激的比较研究.pdf

论 著第 36 卷第 17 期医学信息Vol.36 No.172023 年 9 月Journal of Medical InformationSept.2023基金项目：贵州中医药大学大学生创新创业训练计划项目编号：贵中医大创合字（2019）45 号作者简介：谭永翠（1996.9-），女，贵州德江人，本科，主要从事中药制剂研究通讯作者：高远（1987.4-），男，黑龙江哈尔滨人，博士，讲师，主要从事中药经皮给药与新剂型的开发研究寒热平药性苗药隔药灸对类风湿性关节炎模型家兔穴位刺激的比较研究谭永翠袁闫汉语袁周春敏袁高 远渊贵州中医药大学药学院袁贵州 贵阳550025冤摘要院目的比较寒尧热尧平三种药性的单味苗药隔药灸治疗对类风湿性关节炎模型家兔穴位刺激相关神经递质释放量袁比较用药的寒尧热尧平药性对穴位刺激的影响袁总结其中规律遥方法采用卵蛋白法与弗氏完全佐剂制备类风湿性关节炎模型家兔48只袁将其随机分为空白组尧单纯艾灸组尧隔药灸3组渊寒性苗药-三加皮组尧热性苗药-三百棒组尧平性-青风藤组冤尧穴位贴敷3组渊寒性苗药-三加皮组尧热性苗药-三百棒组尧平性-青风藤组冤袁每组6只遥空白组只造模不干预袁单纯艾灸组艾灸干预袁隔药灸3组为隔药灸治疗袁穴位贴敷3组为穴位敷药治疗袁比较各组P物质渊SP冤尧降钙素基因相关肽渊CGRP冤释放量遥结果与寒尧平性药相比袁热性苗药-三百棒组的SP尧CGRP mRNA释放更高渊 约0.05冤曰同种药性组内比较袁隔药灸治疗优于穴位贴治疗袁SP尧CGRP mRNA释放更高渊 约0.05冤袁且隔药灸3组尧穴位贴敷3组SP尧CGRP mRNA释放均高于单纯艾灸组尧空白组渊 约0.05冤遥结论与寒尧平性相比袁热性苗药穴位刺激作用更显著袁热性苗药配合艾灸的穴位刺激性优于单独穴位贴治疗曰借助艾灸的温热效应袁热性苗药可以产生更好的穴位刺激性遥关键词院寒热平药性曰隔药灸曰单味苗药曰类风湿关节炎模型曰穴位刺激中图分类号院R285.5文献标识码院ADOI院10.3969/j.issn.1006-1959.2023.17.026文章编号院1006-1959渊2023冤17-0130-04Comparative Study on Acupuncture Point Stimulation of Rabbits with Rheumatoid Arthritis Modelby Miao Medicine-separated Moxibustion with Cold,Heat and Normal Drug PropertiesTAN Yong-cui,YAN Han-yu,ZHOU Chun-min,GAO Yuan(Guizhou University of Traditional Chinese Medicine,Guiyang 550025,Gizhou,China)Abstract：Objective To compare the release of neurotransmitters related to acupoint stimulation in rheumatoid arthritis model rabbits treated withMiao medicine-separated moxibustion with cold,heat and normal drug normal,and to compare the effects of cold,heat and normal drug properties onacupoint stimulation,and to summarize the rules.Methods A total of 48 rabbits with rheumatoid arthritis model were prepared by egg protein methodand Freunds complete adjuvant.They were randomly divided into blank group,simple moxa-wool moxibustion group,medicine-separated moxibustion3 groups(cold Miao medicine-Sanjiapi group,heat Miao medicine-Sanbaibang group,normal-Qingfengteng group),acupoint application 3 groups(cold Miao medicine-Sanjiapi group,heat Miao medicine-Sanbaibang group,normal-Qingfengteng group),with 6 rabbits in each group.The blankgroup was only modeled without intervention.The simple moxa-wool moxibustion group was given moxa-wool moxibustion intervention.The threegroups of medicine-separated moxibustion were treated with drug-separated moxibustion.The three groups of acupoint application were treated withacupoint application.The release of substance P(SP)and calcitonin gene-related peptide(CGRP)in each group was compared.Results Comparedwith cold and normal drug properties,the release of SP and CGRP mRNA in the heat Miao medicine-Sanbaibang group was higher(0.05).Compared with the same drug group,the treatment of medicine-separated moxibustion was better than the acupoint application treatment,and therelease of SP and CGRP mRNA was higher(0.05).The release of SP and CGRP mRNA in the three groups of drug-separated moxibustion andacupoint application was higher than that in the simple moxa-wool moxibustion group and the blank group(0.05).Conclusion Compared with coldand normal drug properties,the acupoint stimulation of heat Miao medicine is more significant,and the acupoint stimulation of heat Miao medicinecombined with moxa-wool moxibustion is better than that of single acupoint application.With the help of the warm effect of moxa-wool moxibustion,heat Miao medicine can produce better acupoint stimulation.Key words：Cold,heat and normal drug properties;Medicine-separated moxibustion;Single Miao medicine;Rheumatoid arthritis model;Acupointstimulation130论 著第 36 卷第 17 期医学信息Vol.36 No.172023 年 9 月Journal of Medical InformationSept.2023中药的“四气”理论认为，每一味药物都具有温、热、寒、凉、平的属性，这种药性（气）是药物性能的集中体现，是由古至今的临床经验总结出来的药物与人体相互作用的科学规律1，2。古代医家认为，“寒为凉之甚，热为温之极”，寒与凉，温与热含义相同，只是程度不同，平性具有寒热“双向”的特点，介于寒热两性之间，因此药性（气）可以分类为寒、热、平三种药性。中医药理论认为3，4，通过递送药物寒、热、平的特性进入人体，能够影响人体阴阳、寒热变化，起到调节机体平衡、治疗疾病的作用。隔药灸是借助艾灸温热效应，将药物的“药性”通过穴位这一通道，递送进入人体的传统治疗方法。现代研究发现5，6，其治疗类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的作用比单纯艾灸更具有优势，这是因为药物一方面发挥药理作用，于关节局部镇痛、消炎；另一方面刺激穴位，激发穴位-经络的全身调节功能，达到祛邪扶正的治疗效果。目前，提高其穴位刺激性可以获得更好的治疗效果，已经成为共识7，8。虽然不同药性的药物治疗 RA 均有一定效果，但是，发挥作用的机制并不相同，且认识不够深入。本实验期望从穴位刺激的机制入手，从药性角度出发，建立所用药物的药性与穴位刺激之间的关联性。基于此，本研究以类风湿性关节炎家兔为模型动物，分别选择寒、热、平性苗药：寒性-三加皮、热性-三百棒、平性-青风藤为代表性药物，于模型动物的“足三里”穴位处隔药灸治疗，比较不同药性苗药隔药灸对穴位的刺激强度，以探索不同药性隔药灸治疗对刺激穴位的影响，现报道如下。1材料与方法1.1 仪器与试剂 ABI7500 全自动荧光定量 PCR 仪，美国 ApplieBiosystems 公司；组织粉碎机，美国Biospec 有限公司；紫外可见分光光度计，上海谱元仪器有限公司；三加皮、青风藤、三百棒，贵州同济堂制药有限公司；微烟艾条，南阳市艾德润天然药草制品有限公司；弗氏完全佐剂，美国 Sigma 公司；卵蛋白，美国 Sigma 公司；兔 PCR 反转录试剂盒、PCR 试剂盒，湖南锋锐生物科技有限公司。1.2 实验动物 新西兰家兔 48 只，雌雄各半，平均体重 2.0 kg，由贵州医科大学实验动物中心提供。实验开始前 1 周适应性饲养，饲养环境：普通级动物饲养室，温度（20依5）益、湿度（60依20）%，自然昼夜周期。1.3 方法1.3.1 动物模型建立及分组 卵蛋白+弗氏完全佐剂法建立家兔 RA 模型。家兔颈背去毛发，取 5 个等距点，于第 1、15、20 天，分别皮下注入 0.2 ml 弗氏完全佐剂致敏；致敏后第 2 天在家兔双膝关节腔内注入 0.4 ml 乱蛋白作诱导剂。造模后连续 3 d 考察家兔双膝关节直径变化，关节红肿达到最高峰则造模成功。将造好的 RA 模型家兔随机分为 8 组，每组6只，空白组：只造模不干预；单纯艾灸组：“足三里”穴位直接艾灸 30min；隔药灸-寒性-三加皮组：“足三里”穴位隔药三加皮，艾灸 30 min；隔药灸-热性-三百棒组：“足三里”穴位隔药三百棒，艾灸 30 min；隔药灸-平性-青风藤组：“足三里”穴位隔药青风藤，艾灸 30 min；穴位贴-寒性-三加皮组：“足三里”穴位敷药三加皮 12 h，不艾灸；穴位贴-热性-三百棒组：“足三里”穴位敷药三百棒 12 h，不艾灸；穴位贴-平性-青风藤组：“足三里”穴位敷药青风藤12 h，不艾灸。1.3.2 模型动物的干预 模型家兔后肢背外侧、胫骨粗隆下部外约 0.3 cm 处定位为“足三里”穴位。隔药灸 3 组的三种药材分别粉碎后，清水调制成糊，敷于“足三里”穴位，隔药微烟艾条（0.40 cm伊12 cm）悬于穴位上进行艾灸治疗 30 min，艾条燃烧端距皮肤1.5 cm 处施灸。穴位贴敷三组敷药后，医用胶带固定12 h 后取样。1.3.3 样本采集 取“足三里”穴部位（皮肤+部分皮下组织）约 0.9 cm伊0.9 cm伊0.9 cm 大小的组织样本块，生理盐水清洗、剪碎，组织粉碎机粉碎，滤过沉淀物，得到组织匀浆，置于于离心管中，-80 益冰箱保存，基于实时荧光 PCR 技术定量检测各组 SP、CGRP 释放。1.4 PCR 检 测 模 型 动 物 穴 位 组 织 SPmRNA、CGRPmRNA 含量 采用 Trizol 总 RNA 提取试剂，提取组织中的 RNA，在液氮中研磨后加入 RNA原Sure 1 ml 充分溶解 RNA，逆转录为 cDNA。设计得到的内参 GAPDH 和 SP、CGRP 基因引物见表 1。取样本 cDNA 进行 5 倍梯度稀释，稀释后样品各取2 滋l 作模板，反应程序为：94 益预变性 120 s；变性94 益10 s、60 益退火 30 s，共 40 个循环数，采用RQ/2-吟吟CT法进行数据的相对定量分析，计算与目的参照基因相对定量比值。131论 著第 36 卷第 17 期医学信息Vol.36 No.172023 年 9 月Journal of Medical InformationSept.2023组别空白组单纯艾灸组隔药灸-寒性药-三加皮组隔药灸-平性药-青风藤组隔药灸-热性药-三百棒组SP mRNA（相对定量比）1.04依0.201.25依0.23a1.47依0.30ab1.99依0.42ab2.65依0.55abcdCGRP mRNA（相对定量比）1.55依0.291.77依0.33a1.97依0.40ab2.25依0.49ab2.99依0.59abcd表2不同药性苗药隔药灸对SP mRNA尧CGRP mRNA释放的影响比较渊 依 冤注：与空白组比较，a约0.05；与单纯艾灸组比较，b约0.05；与隔药灸-寒性-三加皮组比较，c约0.05；与隔药灸-平性-青风藤组比较，d约0.051.5 统计学处理 采用 SPSS 24.0 软件进行统计学分析，符合正态分布且方差齐的计量资料采用（依）表示，行配对 检验（置信区间 95%），相关系数显示该条件下适合进行配对 检验比较显著性。约0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1 不同药性苗药隔药灸对 SP mRNA、CGRP mRNA释放的影响比较 与空白组、单纯艾灸组比较，隔药灸 3 组均更能促进 SP mRNA、CGRP mRNA 的释放（约0.05）；与寒性-三加皮、平性-青藤碱比较，热性-三百棒隔药灸更能促进 SP mRNA、CGRP mRNA 的释放（约0.05），见表 2。2.2 不同药性苗药隔药灸、穴位贴敷对 SP mRNA、CGRP mRNA 释放的影响比较 与穴位贴-寒性-三加皮组比较，隔药灸-寒性-三加皮组更能促进 SPmRNA、CGRP mRNA 释放（约0.05）；与穴位贴-热性-三百棒组比较，隔药灸-热性-三百棒组更能促进 SP mRNA、CGRP mRNA 释放（约0.05）；与穴位贴-平性-青风藤组比较，隔药灸-平性-青风藤组更能促进 SP mRNA、CGRP mRNA 释放（约0.05），见表 3。基因名称Substance PCGRPGAPDH引物序列（5-3）F：CCAAGCCTCAGCAGTTCTR：CTCCGTTCATAAGCCACAGAF：ACTGGCTTATCTGGTAGCAAACTR：TTCTTAGACAACAAGGCACAGCF：GAGCACCAGAGGAGGACGAR：TGGGATGGAAACTGTGAAGAG长度182023221921表1 PCR检测的引物序列3讨论本研究发现，热性药-三百棒作为隔药灸所用药有增强穴位刺激的特性，且这种穴位刺激性优于寒性、平性药物。从三种药物的药理活性角度分析，三加皮、三百棒、青风藤三种苗药均具有抗炎、镇痛的药理活性，临床上均可以用于 RA 的治疗9-11。从中医药理论分析，这三种药物分别具有寒、热、平三种截然不同的药性，实际临床应用是有所区别的。三百棒12，13属于热性药物，将其作隔药灸所用药，能够借助艾灸的温热特性，深入皮下穴位部位，产生更加强烈的穴位刺激作用。因此，与寒、平性苗药相比，热性苗药促进穴位刺激相关神经递质的释放更显著。由此，可以推测，药性+艾灸产生累加的综合作用，能够达到更好的治疗效果。性味理论的现代研究表明14，中药温、热、寒、凉的药性（气）特性具有非线性的叠加性，通过多种同一药性（气）的药物叠加使用，可以增加该种药性的能量。艾灸在燃烧过程中，伴随着产生温热的效应，这种效应会增加温热性药物“热”的属性。吴尚先在其所著外用经典 理瀹骈文 中提出：“热者易效”的项目SP mRNA（相对定量比）CGRP mRNA（相对定量比）穴位贴1.21依0.201.55依0.29隔药灸1.47依0.29淫1.97依0.40淫穴位贴1.87依0.351.91依0.39隔药灸1.99依0.42淫2.25依0.49淫穴位贴2.01依0.422.45依0.52隔药灸2.65依0.55淫2.99依0.59淫寒性药-三加皮组平性药-青风藤组热性药-三百棒组表3不同药性苗药隔药灸尧穴位贴敷对SP mRNA尧CGRP mRNA释放的影响比较渊 依 冤注：与同组内穴位贴比较，淫约0.05132论 著第 36 卷第 17 期医学信息Vol.36 No.172023 年 9 月Journal of Medical InformationSept.2023观点，认为热性药物在外用制剂中更容易发挥作用。苏曼等15将生姜炮制后增加其热性，能够显著增强透皮吸收的效果。姚俊宏等16对 21 种辛味中药挥发油透皮促渗效果进行分析，发现辛热中药优于辛温、辛凉的中药。以上两项研究均有力支撑了“热者易效”的观点。本研究发现热性苗药更具穴位刺激性的结果，是对该理论的再一次验证。本研究发现，隔药灸治疗对穴位的刺激作用优于单纯穴位贴，与目前对艾灸的认识相符合。艾灸自古以来，其温热的特性是其发挥作用的独特所在。李梴 医学入门 指出：“虚者灸之，使火气以助元阳也；寒者灸之，使其气之复温也”。而 RA 的发病恰恰是由于人体虚弱、正气不足，寒湿之邪侵入而引发的，与艾灸的治疗机制刚好是对应的。隔药灸是在艾灸的基础上，增加药物的药理作用，并且在艾草燃烧的热性助力下，进一步增强了穴位刺激作用，因此隔药灸治疗由少数民族长期居住于潮湿、寒冷的地区而引发的 RA，能够取得良好的临床疗效17，18。隔药灸的作用机制包含了药物本身药理作用和光、热、烟、穴位刺激等综合作用19，20，目前对其认识尚显不足，特别是药物与艾灸的光热效应的相互影响并不清楚，这导致了当前临床选药单一、用药粗放的情况，因此需要对隔药灸用药规律、体内过程进行深入研究，特别是结合药性四气特征与艾灸温热效应理论，使其从简单外敷到现代制剂，更好服务于当今临床应用和苗药新产品的开发。综上所述，与寒、平性相比，热性苗药穴位刺激作用更显著，热性苗药配合艾灸的穴位刺激性优于单独穴位贴治疗；借助艾灸的温热效应，热性苗药可以产生更好的穴位刺激性。参考文献院1孙帅玲,马晓北.叶温病条辨曳中寒湿病的辨治及方剂性味配伍规律探析J.中国中医基础医学杂志,2023,29(4):533-535.2李霄,孙延平,王秋红,等.商陆及其性味拆分组分对阿霉素肾病大鼠肾脏的保护作用研究J.中医药学报,2021,49(6):12-17.3魏国辉,张丰聪,付先军,等.中药成分相似性量化建模及寒热药性预测分析J.数据分析与知识发现,2020,4(5):75-83.4陈健,汤琛琛,赵堃鹏,等.基于中药药性理论探索野性味网络药理学冶的合理性与可行性J.上海中医药大学学报,2021,35(6):1-11.5Ren S,Liu H,Wang X,et al.Acupoint nanocomposite hydro鄄gel for simulation of acupuncture and targeted delivery of trip鄄tolide against rheumatoid arthritisJ.Journal of 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