槐杞黄颗粒治疗系统性红斑狼疮患儿的效果观察.pdf

临床医学 医药前沿 59医药前沿 2023年7月 第13卷第20期 槐杞黄颗粒治疗系统性红斑狼疮患儿的效果观察冯美英，王凤颜，余燕平，郑铠军（广东省中山市人民医院普通儿科 广东 中山 528400）【摘要】目的：观察槐杞黄颗粒治疗系统性红斑狼疮（SLE）患儿的疗效，分析其对患儿临床指标、外周血 CD4+T细胞亚群比例的影响。方法：选取 2019 年 9 月2022 年 11 月中山市人民医院普通儿科收治的 78 例 SLE 患儿进行前瞻性研究，采用随机数字表法分为观察组和对照组各 39 例。对照组患者采用 SLE 常规治疗，观察组在常规治疗的基础上加用槐杞黄颗粒治疗。比较治疗前后两组患儿临床指标、外周血 CD4+T 细胞亚群比例、SLE 疾病活动指数评分的差异。结果：治疗后，两组患儿 SLE 疾病活动指数评分、24 h 尿蛋白水平、抗核抗体滴度阳性率、抗 ds-DNA 抗体滴度水平、外周血滤泡辅助性 T 细胞、Th17 细胞比例及 Th17/调节性 T 细胞比值均下降，且观察组均低于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。治疗后，两组患儿外周血Treg细胞比例、补体C3及C4水平均升高，且观察组患儿均高于对照组患儿，差异有统计学意义（P 0.05）。结论：槐杞黄颗粒辅助治疗可调节 SLE 患儿体内 CD4+T 细胞亚群失衡，降低 SLE 的疾病活动度，值得临床应用。【关键词】儿童；系统性红斑狼疮；槐杞黄颗粒；CD4+T 细胞【中图分类号】R593.24【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2023）20-0059-03系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）是一种多脏器受累的自身免疫性炎症性结缔组织病，严重威胁人类健康1。CD4+T 细胞是人体内一类重要的适应性免疫淋巴细胞，包含不同的细胞亚群，如Th1、Th2、Th17、滤泡辅助性 T 细胞（follicular helper T cells,Tfh）及调节性 T 细胞（regulatory T cells,Treg）。多个研究表明，CD4+T 细胞亚群的失衡在 SLE 发病机制中起着关键作用2-4。虽然 SLE 多见于育龄期妇女，但中国儿童 SLE 患病率也很高，占总 SLE 病例数的 10%20%，且具有更高的疾病活动度，病情更凶险5。因此，儿童 SLE 的治疗更具挑战性，药物负担更重。本病常规的治疗包括糖皮质激素和免疫抑制剂，但部分患儿治疗效果欠佳且副作用严重。槐杞黄颗粒由槐耳菌质、枸杞、黄精等中药组成，可调节体液免疫及细胞免疫，已被证实在紫癜性肾炎、儿童肾病综合征等多种免疫性疾病及支气管肺炎等炎症性疾病中均具有良好疗效6-8。研究显示，槐杞黄颗粒辅助治疗可提高儿童 SLE 临床疗效并减少复发率9-10，但该药对 SLE 患儿外周血 CD4+T 细胞亚群是否有调节作用，目前国内外尚无相关报道。因此，本研究旨在进一步探讨槐杞黄颗粒联合常规糖皮质激素或免疫抑制剂治疗对 SLE 患儿临床疗效的影响，并分析其对外周血 CD4+T 细胞亚群的调节作用，为临床多靶点治疗提供一定的参考依据。现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料选取 2019 年 9 月2022 年 11 月中山市人民医院普通儿科收治的 78 例 SLE 患儿进行前瞻性研究，采用随机数字表法分为观察组和对照组各 39 例。观察组 39 例患儿中，男 6 例，女 33 例；年龄 6.0 17.4 岁，平均年龄（9.512.26）岁。对照组 39 例患儿中，男 7 例，女32 例；年龄 6.2 16.5 岁，平均年龄（8.902.16）岁。两组患儿的性别、年龄一般资料比较，差异无统计学意义（P 0.05）。具有可比性。本研究所有患儿家长均知情同意并签署知情同意书。本研究通过中山市人民医院伦理审查委员会审批（批号：2023-026）。纳入标准：年龄小于 18 岁；符合 2009 年美国风湿病学会提出的 SLE 的诊断标准11。排除标准：严重感染或合并严重器官功能障碍者；合并其他结缔组织病者；对本研究中的药物过敏者。1.2 方法对照组患儿给予糖皮质激素（1.5 mgkg-1d-1）和（或）免疫抑制剂（羟氯喹：5 mgkg-1d-1，1 次/d；环磷酰胺静脉冲击：10 mgkg-1d-1，每2周连用2 d为1次，共 6 次；他克莫司：0.05 mgkg-1d-1，分 2 次口服；吗替麦考酚酯：30 mgkg-1d-1，分 2 次口服）常规治疗。观察组患儿在常规治疗的基础上给予槐杞黄颗粒（体重 40 kg，15 g/次，2 次/d；体重 40 kg，10 g/次，2 次/d）治疗。1.3 观察指标（1）于治疗前、治疗 3 个月后所有病例采集清晨空腹 EDTA 抗凝血 2 mL，应用人淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞，加入表面抗体 CD3、CD4、CXCR3、CXCR6、ICOS、CXCR5、CD25 在 4避光孵育 30 min，磷酸盐缓冲液清洗、固定破膜液重悬，在 4 避光孵育 50 min 破核膜后，破膜缓冲液清洗并重悬，加入核内抗体 FOXP3 在 4 避光孵育 50 min，磷酸盐缓冲液清洗重悬，上流式细胞仪检测，采用 Flow Jo X 10.0 软件进行流式数据分析。CD3+CD4+CXCR3+CCR6-细胞代表 Th1 细胞，CD3+CD4+CXCR3-CCR6-细胞代表 Th2 细胞，CD3+CD4+CXCR3-CCR6+细胞代表 Th17细胞，CD3+CD4+ICOS+CXCR5+细胞代表 Tfh 细胞，CD3+CD4+CD25+Foxp3+细胞代表 Treg 细胞。（2）通过临床医学60 医药前沿医药前沿 2023年7月 第13卷第20期 院内电子病历系统获得患儿相关临床资料，包括年龄、性别、抗核抗体（antinuclear antibody,ANA）滴度、抗ds-DNA 抗体滴度（正常范围 0 10 IU/mL）、24 h 尿蛋白水平（正常范围 0.028 0.141 g/d）、补体 C3（正常范围 0.9 1.8 g/L）及 C4（正常范围 0.1 0.4 g/L）。（3）SLE 疾病活动指数（SLE Disease Activity Index,SLEDAI）评分：采用 Gladman 等12制定的 SLEDAI 评分标准结合患儿的临床表现、辅助检查结果等评估 SLE患儿在过去 10 d 内的疾病活动情况，总计 105 分。0 4 分为基本无活动；5 9 分为轻度活动；10 14 分为中度活动；15 分为重度活动。1.4 统计学方法使用 SPSS 23.0 统计软件进行数据处理。符合正态分布的计量资料采用均数标准差（x-s）表示，行t检验；计数资料用频数和百分率 n（%）表示，组间比较采用2检验。P 0.05 表示差异有统计学意义。2 结果2.1 两组 SLEDAI 评分比较治疗后，两组患儿 SLEDAI 评分均低于治疗前，且观察组患儿低于对照组患儿，差异有统计学意义（P 0.05），见表 1。表 1 两组患儿治疗前后 SLEDAI 评分比较（x-s，分）组别例数治疗前治疗后观察组3911.263.652.461.07对照组3911.543.495.332.19t0.3497.348P0.728 0.001注：与治疗前比较，P 0.05。2.3 两组 24 h 尿蛋白水平比较治疗后，两组患儿 24 h 尿蛋白水平均低于治疗前，且观察组患儿低于对照组患儿，差异有统计学意义（P 0.05），见表 2。表 2 两组患儿治疗前后 24 h 尿蛋白水平比较（x-s,g/d）组别例数治疗前治疗后观察组392.790.621.270.39对照组392.710.701.530.49t0.5132.536P0.6100.013注：与治疗前比较，P 0.05。2.4 两组 ANA 滴度阳性率、抗 ds-DNA 抗体滴度水平比较治疗后，两组患儿 ANA 滴度阳性率及抗 ds-DNA 抗体滴度水平均低于治疗前，且观察组患儿低于对照组患儿，差异有统计学意义（P 0.05），见表 3。表 3 两组患儿治疗前后 ANA 滴度阳性率及抗 ds-DNA 滴度水平比较组别例数ANA 滴度阳性 n（%）抗 ds-DNA 滴度水平（x-s，IU/mL）治疗前治疗后治疗前治疗后观察组3939（100.00）7（17.95）140.9430.32 39.8810.41对照组3939（100.00）25（64.10）138.7232.15 50.8411.06t217.1680.3134.507P 0.0010.755 0.001注：与治疗前比较，P 0.05。2.5 两组补体水平比较治疗后，两组患儿补体 C3、C4 水平均有升高，且观察组患儿高于对照组患儿，差异有统计学意义（P 0.05）（P 0.05），见表 4。表 4 两组患儿治疗前后补体 C3、C4 水平比较（x-s,g/L）组别例数C3C4治疗前治疗后治疗前治疗后观察组390.410.150.620.200.080.090.200.10对照组390.430.170.520.180.080.070.130.12t0.5492.3130.1982.878P0.5840.0230.8440.005注：与治疗前比较，P 0.05。2.6 两组 CD4+T 细胞亚群比例比较治疗后，两组患儿外周血 Tfh 细胞、Th17 细胞比例及 Th17/Treg 比值均下降，且观察组患儿低于对照组患儿；Treg 细胞比例均上升，且观察组患儿高于对照组患儿，差异有统计学意义（P 0.05），见表 5。表 5 两组患儿治疗前后外周血 CD4+T 细胞亚群比例比较（x-s，%）组别例数Th1Th2治疗前治疗后治疗前治疗后观察组3917.153.3217.573.1264.8012.9463.2010.36对照组3916.282.9616.363.1465.4210.8265.9610.86t1.2211.7000.2311.146P0.2260.0930.8180.255组别例数TfhTh17治疗前治疗后治疗前治疗后观察组3912.304.457.353.7826.644.4510.633.56对照组3911.924.569.273.6825.196.2517.986.07t0.3722.2701.1796.521P0.7110.0260.242 0.001组别例数TregTh17/Treg治疗前治疗后治疗前治疗后观察组394.001.386.742.266.821.781.310.89对照组394.071.415.741.966.832.213.301.30t0.2292.0960.0077.904P0.8190.0390.995 0.001注：与治疗前比较，P 0.05。临床医学 医药前沿 61医药前沿 2023年7月 第13卷第20期 3 讨论SLE 是一种慢性自身免疫性疾病，目前尚无根治方法1。疾病治疗的长期目标是预防或减少复发，控制疾病所致的器官损害，同时尽量减少药物的不良反应，提高患者的生活质量1,5。槐杞黄颗粒在儿童 SLE 中具有良好疗效。本研究结果显示，观察组患者患儿 SLEDAI评分、24 h 尿蛋白水平更低（P 0.05），与既往研究一致9，提示在常规治疗基础上辅助槐杞黄颗粒治疗有助于进一步降低 SLE 患儿疾病活动性并改善肾功能。目前普遍认为，自身反应性 B 细胞过度活化增殖，导致 ANA 抗体、抗 ds-DNA 抗体等自身抗体的产生，形成免疫复合物沉积于机体各个脏器，激活补体从而引起相应器官组织损伤，是 SLE 发病的关键因素1。本文结果显示，观察组患者患儿治疗后 ANA 抗体阳性率、抗ds-DNA 抗体滴度水平更低，补体 C3、C4 上升更明显（P 0.05），提示槐杞黄颗粒可通过降低自身抗体水平，减少补体激活，缓解疾病进展。Tfh 细胞是辅助 B 细胞产生抗体最重要的一类CD4+T 细胞，该细胞在自身免疫病中的作用已成为研究的热点13。多个研究表明，SLE 患者外周血 Tfh 细胞比例上升，且 SLE 患者肾脏也存在 Tfh 细胞浸润2-4。Tfh细胞参与了抗 ds-DNA 抗体生成和脏器损害4。在小鼠试验中，下调 Tfh 细胞可减少狼疮小鼠体内自身抗体生成，减轻狼疮症状4。因此，Tfh 细胞可能是 SLE 潜在的治疗靶点。本文结果显示，治疗后，两组患儿外周血 Tfh 细胞均下降，且观察组患儿 Tfh 细胞下降更明显（P 0.05），提示 SLE 患儿病情缓解可能与槐杞黄颗粒抑制 Tfh 细胞的异常扩增有关。Treg 细胞可以通过多种机制抑制炎症细胞活化和炎症因子产生，具有强大的免疫抑制功能，有助于维持机体的免疫稳态14。Th17 细胞是一类重要的促炎细胞，主要通过分泌 IL-17 等细胞因子发挥其促炎作用15。既往研究发现，SLE 患者急性期外周血血清 IL-17 浓度、Th17 细胞比例及 Th17/Treg 细胞比值明显升高，Treg细胞比例下降，且与疾病活动度、肾脏损害程度呈正相关16-17。提示 Th17/Treg 细胞比例的失衡在 SLE 患者的发病过程中占据非常重要的位置，而调节 Th17/Treg 细胞失衡将有助于改善 SLE 预后。本研究初步发现，槐杞黄颗粒可调节 Th17/Treg 细胞失衡，为其作用机制提供新的理论基础。综上所述，槐杞黄颗粒辅助治疗可调节 SLE 患儿体内 CD4+T 细胞亚群失衡，降低 SLE 的疾病活动度。但本研究是单中心研究，样本量较少，并且随访期较短，未来需要联合多中心收集更大的研究样本并增加随访时间以了解槐杞黄颗粒对 SLE 的治疗效果及对 CD4+T 细胞亚群的影响。【参考文献】1 TANAKA Y.Systemic lupus erythematosus J/OL.Best Pract Res Clin Rheumatol,2022,36(4):101814.https:/doi.org/10.1016/j.berh.2022.101814.2 JIANG Q L,WANG J K,JIANG H K,et al.Competitive binding of transcription factors underlies flexibility of T peripheral helper cells and T follicular helper cells in SLE J.Rheumatology,2022,61(11):4547-4557.3 XIN Y,HE Z H,MEI Y,et al.Interferon-regulates abnormally increased expression of RSAD2 in Th17 and Tfh cells in systemic lupus erythematosus patients J/OL.Eur J Immunol,2023:e2350420.https:/doi.org/10.1002/eji.202350420.4 JIANG Y,JIN X X,CHI Z X,et al.Protein phosphatase 2A propels follicular T helper cell development in lupus J/OL.J Autoimmun,2023,136:103028.https:/doi.org/10.1016/j.jaut.2023.103028.5 中华医学会儿科学分会风湿病学组，中国医师协会风湿免疫科医师分会儿科学组，海峡两岸医药卫生交流协会风湿免疫病学专业委员会儿童学组，等儿童系统性红斑狼疮临床诊断与治疗专家共识（2022 版）J中华实用儿科临床杂志，2022,37(9):641-652.6 应琴，周先富，叶鑫槐杞黄颗粒联合西药治疗小儿紫癜性肾炎临床研究 J新中医，2023,55(8):134-138.7 王景会，刘霞 槐杞黄颗粒在儿童肾病综合征治疗中的应用效果J临床医学研究与实践，2022,7(7):137-140.8 张曼，储卫红，许承鲜，等槐杞黄颗粒联合多西环素治疗儿童支原体肺炎的临床研究 J现代药物与临床，2023,38(5):1152-1155.9 李智超，郭夏，王石，等槐杞黄颗粒辅助治疗系统性红斑狼疮复发患儿疗效及对免疫功能的影响 J实用医学杂志，2021,37(4):525-529.10 王晓，布力布丽巴哈提，阿依奴尔阿不都司力木，等槐杞黄颗粒联合糖皮质激素治疗轻中度小儿系统性红斑狼疮的疗效观察 J世界中医药，2022,17(7):1022-1025.11 ABDELHADY E I,RABIE M,HASSAN R A.Validity of systemic lupus erythematosus disease activity score(SLE-DAS)for definition of lupus low disease activity state(LLDAS)J.Clin Rheumatol,2021,40(11):4553-4558.12 GLADMAN D D,IBANEZ D,UROWITZ M B.Systemic lupus erythematosus disease activity index 2000J.J Rheumatol,2002,29(2):288-291.13 WEI X D,NIU X Y.T follicular helper cells in autoimmune diseases J/OL.J Autoimmun,2023,134:102976.https:/doi.org/10.1016/j.jaut.2022.102976.14 CHERU N,HAFLER D A,SUMIDA T S.Regulatory T cells in peripheral tissue tolerance and diseases J/OL.Front Immunol,2023,14:1154575.https:/doi.org/10.3389/fimmu.2023.1154575.15 AGALIOTI T,CORTESI F,GAGLIANI N.TH17 cell immune adaptation J/OL.Curr Opin Immunol,2023,83:102333.https:/doi.org/10.1016/j.coi.2023.102333.16 SHAN J,JIN H,XU Y.T cell metabolism:a new perspective on Th17/treg cell imbalance in systemic lupus erythematosus J/OL.Front Immunol,2020,11:1027.https:/doi.org/10.3389/fimmu.2020.01027.17 YANG J,YANG X,ZOU H J,et al.Oxidative stress and treg and Th17 dysfunction in systemic lupus erythematosus J/OL.Oxid Med Cell Longev,2016(2016):2526174.https:/doi.org/10.1155/2016/2526174.