低鱼粉饮食中添加半胱氨酸对卵形鲳鲹幼鱼脂质和蛋白质代谢的影响.pdf

DOI:10.12131/20230030文章编号：2095 0780（2023）04 0116 10低鱼粉饮食中添加半胱氨酸对卵形鲳鲹幼鱼脂质和蛋白质代谢的影响刘佳兴1,2,3，郭华阳2,3，朱克诚2,3，刘宝锁2,3，张 楠2,3，冼 霖2,3，张殿昌2,31.大连海洋大学 水产与生命学院，辽宁 大连 1160232.中国水产科学研究院南海水产研究所/农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室，广东 广州 5103003.广东省海洋生物种业工程技术研究中心，广东 广州 510300摘要：为研究半胱氨酸对低鱼粉引起的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼(10.05 0.05)g 代谢紊乱的影响，采用动植物蛋白(鸡粉、大豆浓缩蛋白、发酵豆粕等)部分替代鱼粉制作卵形鲳鲹基础饮食，分别添加0(C0组，对照组)、0.30%(C1组)、0.60%(C2组)、0.90%(C3组)和1.20%(C4组)半胱氨酸制成5种等氮等脂饲料。56 d的饲养实验结果显示：1)半胱氨酸通过激活S6K/PI3K/TOR/4E-BP1通路，提高卵形鲳鲹蛋白质合成代谢能力。补充0.6%0.9%半胱氨酸通过上调肌肉核糖体蛋白S6激酶(S6K)、雷帕霉素靶蛋白(TOR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和4E结合蛋白1(4E-BP1)基因的mRNA水平，增加肌肉和血清总蛋白(Total protein,TP)含量与肌肉粗蛋白含量，降低血氨(Serum ammonia,SA)、肌肉和肝脏尿素氮(Urea nitrogen,UN)含量，促进肌肉蛋白质沉积。2)补充0.6%0.9%半胱氨酸通过下调肌肉中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)基因的mRNA水平，降低乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)基因的mRNA水平与酶活水平，抑制脂肪合成代谢；同时，上调肌肉中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)基因的表达水平，使激素敏感性脂肪酶(HSL)和肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT1)基因高表达并伴随酶活提高，进而促进肌肉中脂肪酸氧化反应，减少蛋白质因分解供能所带来的消耗，促进肌肉中蛋白质沉积。关键词：卵形鲳鲹；半胱氨酸；脂代谢；蛋白质代谢；鱼粉替代中图分类号：S 963.73文献标志码：A 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Effects of cysteine addition to low-fishmeal diets on metabolism of lipid andprotein in juvenile Trachinotus ovatusLIU Jiaxing1,2,3,GUO Huayang2,3,ZHU Kecheng2,3,LIU Baosuo2,3,ZHANG Nan2,3,XIAN Lin2,3,ZHANG Dianchang2,31.College of Fisheries and Life Science,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China2.South China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences/Key Laboratory of South China Sea FisheryResources Exploitation and Utilization,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Guangzhou 510300,China3.Guangdong Provincial Engineer Technology Research Center of Marine Biological Seed Industry,Guangzhou 510300,ChinaAbstract:To investigate the effect of cysteine on the metabolic disorders of juvenile Trachinotus ovatus(10.050.05)gcaused by low fishmeal,we prepared a basal pomfret diet by using plant and animal proteins(Chicken meal,soybean proteinconcentrate,fermented soybean meal,etc.)as partial substitutes for fishmeal,and then added 0(Group C0,control group),第 19 卷第 4 期南 方 水 产 科 学Vol.19，No.42023 年 8 月South China Fisheries ScienceAug.，2023收稿日期：2023-03-02；修回日期：2023-03-30基金项目：国家自然科学基金重点项目(U20A2064)；中国水产科学研究院南海水产研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助(2021SD12)；中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助(2022TD29)；国家海水鱼产业技术体系资助(CARS-47)；广东省现代农业产业技术体系海水鱼产业创新项目(2019KJ143)作者简介：刘佳兴(1996)，男，硕士研究生，研究方向为水产动物营养。E-mail:通信作者：张殿昌(1977)，男，研究员，博士，研究方向为水产种质资源与遗传育种。E-mail:0.30%(Group C1),0.60%(Group C2),0.90%(Group C3)and 1.20%(Group C4)cysteine to make five isonitrogenous and isoenerge-tic diets.The results of a 56-day feeding trial show that:1)Cysteine enhanced the protein synthesis and metabolism ability ofT.ovatus by activating the S6K/PI3K/TOR/4E-BP1 pathway.Supplementation with 0.6%0.9%cysteine up-regulated themRNA levels of ribosomal protein S6 kinase(S6K),target of rapamycin(TOR),phosphoinositide 3-kinase(PI3K)and eukaryo-tic initiation factor 4E-binding protein 1(4E-BP1)in muscle,increased total protein(TP)in muscle and serum as well as musclecrude protein content,reduced serum ammonia(SA)and urea nitrogen(UN)in muscle and liver,promoting protein deposi-tion in muscle.2)Supplementation with 0.6%0.9%cysteine inhibited lipid anabolism by down-regulating the expression levelof peroxisome proliferator-activated receptors gamma(PPAR)in muscle,decreasing the transcript level and enzyme activitylevel of Acetyl-CoA carboxylase(ACC)and fatty acid synthetase(FAS),while it up-regulated the expression level of peroxisomeproliferator activated receptors-alpha (PPAR)in muscle,resulting in high hormone-sensitive lipase (HSL)and carnitinepalmitoyl transferase 1(CPT1)expression with increasing enzyme activity,which in turn promoted-oxidation of fatty acids inmuscle,reducing protein consumption due to catabolism for energy supply.Thus,protein deposition in muscle is promoted.Keywords:Trachinotus ovatus;Cysteine;Lipid metabolism;Protein metabolism;Fishmeal replacement鱼粉资源的波动下滑促使其价格上涨，严重制约了水产饲料行业的发展，研发鱼粉替代品成为解决这一问题的关键1。以来源广泛、价格低廉且蛋白含量丰富的动植物蛋白替代鱼粉符合当前水产饲料行业的发展趋势。然而，豆粕1、发酵豆粕2和玉米蛋白粉3等植物蛋白存在适口性差、抗营养因子多等缺点；动物蛋白(如家禽副产品粉3和鸡肉粉4)成本较高且品质难以保证。采用动植物蛋白过度替代鱼粉会造成脂代谢与蛋白质代谢紊乱，例如低鱼粉饲料增加了三疣梭子蟹(Portunus trituber-culatus)5和加拿大军曹鱼(Rachycentron canadum)6的蛋白质分解能力，同时抑制 PI3K、TOR、4E-BP1、S6K 基因的表达水平，进而抑制机体蛋白质合成，使得蛋白质沉积减少。因此，寻找合适的添加剂来弥补动植物蛋白的不足，是改善鱼粉限制问题的有效方法7。含硫氨基酸(牛磺酸、半胱氨酸和蛋氨酸等)是近年水产饲料添加剂的研究热点之一8。作为一种功能性氨基酸，牛磺酸对水产动物脂质与蛋白质代谢具有显著影响。研究显示，牛磺酸可以有效降低大西洋白姑鱼(Argyrosomus regius)7、塞内加尔舌鳎(Solea senegalensis)9和大西洋鲑(Salmosalar)10等水产动物的脂肪含量，增加蛋白质沉积。半胱氨酸是生物体合成牛磺酸的前体物质，也是一种功能性氨基酸11。对肉仔鸡的研究结果显示，补充半胱氨酸可以使其具有更低的体脂率和更高的蛋白质水平12。然而，半胱氨酸在水产动物中的研究相对较少。有研究显示，半胱氨酸摄入不足造成黄条鰤(Seriola lalandi)肝脏脂肪沉积13，补充半胱氨酸增加了大西洋鲑对蛋白质、脂肪、淀粉的消化率以及氮保留14。卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)又名金鲳，是中国最主要的水产养殖鱼类之一15。笔者实验室早前的研究表明，在低鱼粉饮食中补充半胱氨酸，可以提高卵形鲳鲹抗氧化应激能力与肠道免疫能力11。然而，半胱氨酸对卵形鲳鲹脂质和蛋白质代谢的影响和机制尚未见报道。因此，本实验探讨了补充半胱氨酸的低鱼粉饮食(20%鱼粉)对卵形鲳鲹幼鱼的脂代谢和蛋白质代谢能力的影响，旨在了解半胱氨酸对水生动物脂质和蛋白质代谢的作用机制，为半胱氨酸在水产饲料中的使用提供理论依据。1 材料与方法 1.1 实验饲料实验饮食中食品级半胱氨酸纯度为 99.99%(浙江一诺生物科技有限公司)，其他成分由广州联鲲生物科技有限公司提供。日粮配方和营养水平见表 1。本实验采用了动物蛋白(鱼粉和鸡粉)和植物蛋白(大豆浓缩蛋白、发酵豆粕和玉米蛋白粉)作为基础蛋白，脂肪来源于鱼油和大豆油。C0(对照组)、C1、C2、C3 和 C4 组半胱氨酸添加量分别为0、0.30%、0.60%、0.90%和 1.20%，以高筋面粉配平。所有固体成分通过 40 目筛，按照表 1 所示比例混合 30 min，然后将混合物通过双螺杆制粒机制成 3 种规格的球形颗粒(直径分别为 1、2 和3 mm)以适应鱼的生长状态。最后，将饲料置于45 干燥，直到水分质量分数降至约 10%，4 第 4 期刘佳兴等:低鱼粉饮食中添加半胱氨酸对卵形鲳鲹幼鱼脂质和蛋白质代谢的影响117储存备用。日粮氨基酸组成见表 2。1.2 实验设计为模拟卵形鲳鲹大规模养殖环境，实验于中国深圳龙岗区离岸网箱(长 1 m宽 1 m高 1.5 m)中进行。实验开始前挑选 1 050 尾体型相近且健康的卵形鲳鲹幼鱼(10.05 0.05)g 平均放入 15 个网箱(5 种饮食，每种饮食投喂 3 个网箱，每个网箱70 尾鱼)，先投喂 C0 组饮食暂养 1 周。养殖实验持续 8 周，每天饱食投喂 4 次(8:00、10:00、14:00 和 16:00)并记录各组饲料投喂量，水体条件表1 实验日粮配方和营养水平(以干物质百分比为基础)Table 1 Formulation and nutrition level of the experimental diets(Dry matter basis)%参数Parameter半胱氨酸添加量 Added amount of cysteineC0(0)C1(0.3%)C2(0.6%)C3(0.9%)C4(1.2%)鱼粉 Fish meal20.0020.0020.0020.0020.00鸡肉粉 Chicken meal10.0010.0010.0010.0010.00大豆浓缩蛋白 Soy protein concentrate10.0010.0010.0010.0010.00鱿鱼膏 Squid paste5.005.005.005.005.00豆粕 Soybean meal12.0012.0012.0012.0012.00发酵豆粕 Fermented soybean meal5.005.005.005.005.00玉米蛋白粉 Corn gluten meal6.006.006.006.006.00高筋面粉 High gluten flour18.3718.0717.7717.4717.17鱼油 Fish oil6.006.006.006.006.00豆油 Soybean oil3.003.003.003.003.00磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)21.501.501.501.501.50氯化胆碱 Choline chloride0.300.300.300.300.30维生素预混 Vitamin mix 1.001.001.001.001.00矿物质预混 Mineral mix 1.001.001.001.001.00L-赖氨酸盐酸盐 L-lysine monohydrochloride0.500.500.500.500.50DL-蛋氨酸 DL-Methionine0.200.200.200.200.20苏氨酸 Threonine0.100.100.100.100.10乙氧喹 Ethoxyquin0.030.030.030.030.03半胱氨酸 Cysteine0.000.300.600.901.20营养水平 Nutrition level粗蛋白 Crude Protein(%,dry matter)42.7942.7442.6942.6342.58粗脂肪 Crude Lipid(%,dry matter)13.4213.4013.3813.3713.35水分 Moisture(%,dry matter)10.1510.7611.2410.9811.32灰分 Ash(%,dry matter)8.538.658.338.718.39半胱氨酸 Cysteine0.520.821.131.451.84注：维生素预混料提供以下(每千克)：维生素 A 8106 IU，维生素 D3 2106 IU，维生素 E 40 000 mg，维生素 B 17 000 mg，维生素 B612 000 mg，维生素 B12 100 mg，维生素 K3 10 000 mg，D-泛酸 35 000 mg，叶酸 1 000 mg，烟酰胺 90 000 mg，生物素 200 mg，肌醇80 000 mg；矿物混合物提供以下(每千克)：铁 10 000 mg，铜 1 200 mg，锌 7 000 mg，锰 5 500 mg，钴 250 mg，碘 250 mg，硒 50mg，钾 60 000 mg，钠 24 000 mg，镁 60 000 mg；营养水平为实测值。Note:Vitamin mix provides the following(Per kilogram):vitamin A 8106 IU,vitamin D3 2106 IU,vitamin E 40 000 mg,vitamin B 17 000 mg,vitamin B6 12 000 mg,vitamin B12 100 mg,vitamin K3 10 000 mg,D-pantothenic acid 35 000 mg,folic acid 1 000 mg,nicotinamide 90 000 mg,Biotin 200 mg,inositol 80 000 mg.Mineral provides the following(Per kilogram content):Fe 10 000 mg,Cu 1 200 mg,Zn 7 000 mg,Mn5 500 mg,Co 250 mg,I2 250 mg,Se 50 mg,K 60 000 mg,Na 24 000 mg,Mg 60 000 mg;Nutrition level is measured.118南 方 水 产 科 学第 19 卷保持如下：温度 2832，pH 7.48.3，盐度 3436，溶解氧质量浓度6.0 mgL1。1.3 样品采集养殖实验结束前 24 h 停止投喂，之后对每个网箱里的鱼进行称质量和计数。每个网箱随机选择 9 尾鱼，用丁香酚(100200 mgL1)进行麻醉，将其中 3 尾鱼在液氮中速冻后转移到80 冰箱保存，用于分析常规营养成分；然后抽取 3 尾鱼的血液并将其离心(3 500g,4)以获得血清，用于测量血清生化参数；最后分别收集 3 尾鱼的肝脏和肌肉，用于基因表达分析和组织生化分析。1.4 全鱼常规营养成分分析全鱼常规营养成分分析按以下方式进行16：粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分含量分别通过凯氏定氮法(GB 5009.52016)、索氏提取法(GB5009.62016)、105 下干燥至恒质量法(GB5006.32016)和马弗炉中(55025)灼烧法确定(GB 5006.42016)。1.5 肌肉、肝脏和血清生化指标本实验分别检测了血清、肝脏和肌肉中脂代谢和蛋白质代谢相关生化指标，如总蛋白(Total pro-tein,TP)、血氨(Serum ammonia,SA)、尿素氮(Urea nitrogen,UN)、甘油三酯(Triglycerides,TG)、总胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、肌肉粗脂肪、过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPAR)和过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPAR)等含量以及乙酰辅酶 A 羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、肉毒碱棕榈酰转移酶 1(CPT1)等酶活性。各检测试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.6 实时荧光定量 PCR本实验检测了卵形鲳鲹肌肉中脂肪酸合成相关基因(FAS、PPAR 和 ACC)、脂肪酸分解相关基因(PPAR、CPT1 和 HSL)的 mRNA 水平，以及核糖体蛋白 S6 激酶(S6K)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、雷帕霉素靶蛋白(TOR)和 4E 结合蛋白 1(4E-BP1)等氨基酸合成相关基因的 mRNA 水平。EF-1 为内参基因17，所有引物见表 3。RNA 提取、cDNA 制备和 qPCR 基于以前的研究15，使用通用型 RNA 抽提 Mini 试剂盒(MGBio，中国)提取卵形鲳鲹肌肉总 RNA。使用 1%(质量分数)琼脂糖凝胶电泳评估 RNA 完整性，Nanodrop 2000(Thermo Fisher Scientific，美国)测定 RNA 浓度。使用带有 gDNA Erase 的 PrimeScript 逆转录试剂盒(Accurate Biology，中国)进行逆转录。使用 SYBRGreen Premix Pro Taq HS qPCR 试剂盒(AccurateBiology，中国)进行 qPCR，实验结果用 2CT方法计算目标基因 mRNA 的相对水平18。1.7 统计学分析xs基因表达和血清参数分别用 GraphPad Prism8 和 Origin Pro 2021 软件进行单因素分析(One-wayANOVA)，分析结果以“平均值标准差()”表示。当有显著性差异时(P0.05)，采用 Tukeys检验进行多重比较。2 结果 2.1 全鱼常规营养组成全鱼常规营养组成见表 4。C2、C3 和 C4 组粗蛋白质量分数显著高于 C0 和 C1 组(P0.05)。对照组水分质量分数显著低于各实验组(P0.05)。表2 每 100 g 实验日粮的氨基酸组成Table 2 Amino acid composition of per 100 gexperimental diets g氨基酸Amino acid半胱氨酸添加量Added amount of cysteineC0(0)C1(0.3%)C2(0.6%)C3(0.9%)C4(1.2%)天冬氨酸 Aspartic acid4.354.394.244.314.45苏氨酸 Threonine1.902.022.111.912.02丝氨酸 Serine2.042.052.042.122.05谷氨酸 Glutamic acid8.418.668.698.368.62甘氨酸 Glycine3.043.103.022.983.08丙氨酸 Alanine3.063.093.062.953.07脯氨酸 Proline3.213.133.043.163.13缬氨酸 Valine2.132.112.072.122.11蛋氨酸 Methionine1.181.151.121.311.12异亮氨酸 Isoleucine1.771.841.841.821.80亮氨酸 Leucine4.424.504.424.414.39酪氨酸 Tyrosine1.271.301.311.291.22苯丙氨酸 Phenylalanine2.242.322.252.372.25赖氨酸 Lysine3.543.433.503.543.50组氨酸 Histidine1.111.131.121.071.15精氨酸 Arginine3.153.103.143.153.11半胱氨酸 Cysteine0.520.821.131.451.84第 4 期刘佳兴等:低鱼粉饮食中添加半胱氨酸对卵形鲳鲹幼鱼脂质和蛋白质代谢的影响119 2.2 肌肉、肝脏和血清中蛋白质代谢指标肌肉、肝脏和血清中蛋白质代谢指标检测结果见图 1。C2 组肝脏、肌肉和血清中总蛋白质量分数最大且显著高于 C0 组(P0.05，图 1-a)。C0 组血氨浓度显著高于各实验组(P0.05，图 1-b)。肌肉、肝脏和血清中尿素氮浓度随着饲料半胱氨酸水平增加而下降，C0 组肌肉和肝脏中尿素氮质量摩尔浓度最高且显著高于各实验组(P0.05，图 1-c)。2.3 肌肉、肝脏和血清中脂代谢指标肌肉、肝脏和血清脂代谢指标检测结果见图 2。C2、C3 和 C4 组肌肉和肝脏中甘油三酯含量显著低于 C0 和 C1 组(P0.05)，但 C1 和 C2 组血清甘油三酯含量显著高于 C0 组(P0.05，图 2-a)。同时，半胱氨酸显著降低了肌肉、肝脏和血清中的总胆固醇含量(图 2-b)以及肌肉粗脂肪含量(P0.05，图 2-f)。随着半胱氨酸水平的增加，肌肉、肝脏和血清中的低密度脂蛋白胆固醇含量呈下降趋势，C0 组低密度脂蛋白胆固醇含量均最高(图 2-c)。相反，肌肉、肝脏和血清中的高密度脂蛋白胆固醇含量呈上升趋势，C0 组肌肉和肝脏中高密度脂蛋白胆固醇含量显著低于其他各组(P0.05)。C0 组肌肉和肝脏中的游离脂肪酸含量显著高于其他各组(P0.05)，除 C1 组外，其他组血清游离脂肪酸含量均显著低于 C0 组(P0.05，图 2-e)。2.4 肌肉、肝脏和血清脂代谢酶活肌肉、肝脏和血清脂代谢酶活见图 3。C0 组肝脏、肌肉和血清中的 PPAR 质量摩尔浓度显著高于 C2、C3 和 C4 组(P0.05，图 3-a)。随饲料半胱氨酸水平的增加，FAS 活性呈下降趋势，C0 组肌肉和肝脏中的 FAS 活性显著高于其他各组(P0.05)，但显著高于 C2 和 C4 组(P0.05，图 3-b)。同样，ACC 活性随饲料半胱氨酸水平的增加呈下降趋势，C0 组肝脏、肌肉和血清中的 ACC 活性显著高于 C2、C3 和 C4 组(P0.05，图 3-c)。PPAR 质量摩尔浓度均呈先升后降的趋势，C1、C2 和 C3 组肌肉、肝脏和血清表3 qPCR 引物序列Table 3 qPCR primer sequences引物Primer引物序列(53)Primer sequence(53)来源SourceFAS-FGATGGATACAAAGAGCAAGG19FAS-RGTGGAGCCGATAAGAAGAPPAR-FTCAGGGTTTCACTATGGCGT19PPAR-RCTGGAAGCGACAGTATTGGCACC-FGTTGTCAATCCCAGCCGATC19ACC-RATCCACAATGTAGGCCCCAAPPAR-FAATCTCAGCGTGTCGTCTT19PPAR-RGGAAATGCTTCGGATACTTGCPT1-FCTTTAGCCAAGCCCTTCATC19CPT1-RCACGGTTACCTGTTCCCTCTHSL-FTCATACCTCCACACCAACCC19HSL-RGTCTCGCAGTTTCTTGGCAAPI3K-FAACGGCAAGAGCAAGAAGGGC20PI3K-RCTATGGGCAGGCAGAGGAGGG4E-BP1-FACACCCCAGCAGGAACTTT194E-BP1-RGTGACCATCAACGACGCAGTOR-FGGGTCTTATGAGCCAGTGCCAGG19TOR-RCTTCAGGGTTGTCAGCGGATTGTS6K-FGCTGGCTGGCTTTACTCCATTTG20S6K-RCCTGCCTAGCAGTCAGTCTCTGAEF-1-FAAGCCAGGTATGGTTGTCAACTTT21EF-1-RCGTGGTGCATCTCCACAGACT表4 每 100 g 全鱼常规营养组成Table 4 Conventional nutritional composition of per 100 g whole fishg成分Component半胱氨酸添加量 Added amount of cysteineC0(0)C1(0.3%)C2(0.6%)C3(0.9%)C4(1.2%)粗蛋白 Crude protein15.270.32a16.400.41ab17.800.50bc18.130.81c16.830.58bc粗脂肪 Crude lipid6.770.357.130.216.600.306.630.156.430.35水分 Moisture69.100.26a71.230.15b71.330.98bc71.300.87bc72.930.42c灰分 Ash3.070.063.100.103.130.063.070.063.070.06注：同行数据不同字母上标表示差异显著(P0.05)。Note:Values with different superscript letters within the same line are significantly different(P0.05).120南 方 水 产 科 学第 19 卷中的 PPAR 质量摩尔浓度显著高于 C0 组(P0.05，图 3-d)。肌肉、肝脏和血清中的 HSL 活性均呈上升趋势，C0 组 HSL 活性显著低于 C2、C3 和 C4组(P0.05，图 3-e)。由图 3-f 可知，C0 组肌肉、肝脏和血清中的 CPT1 活性最低且显著低于各实验组(P0.05)。2.5 肌肉脂肪酸合成相关基因表达卵形鲳鲹肌肉脂肪酸合成相关基因(FAS、PPAR 和 ACC)的 mRNA 水平见图 4-a。随饲料半胱氨酸添加量的增加，FAS、PPAR 和 ACC 基因的 mRNA 水平均显著下降。各实验组 FAS、ACC基因的 mRNA 水平显著低于 C0 组(P0.05)，但显著高于其他实验组(P0.05)。2.6 肌肉脂肪分解相关基因表达卵形鲳鲹肌肉脂肪水解与脂肪酸分解酶基因bcdcabadcaabdcacabaadaabcbaacb020406080100020406080100C0C1C2C3C4C0C1C2C3C40100200300400010020030040005001 0002 500(b)尿素氮 Urea nitrogen c020406080a2 0001 500ddb020406080100120C0C1C2C3C4肌肉 Muscle肝脏 Liver血清 Serumw/(mgg1)w/(mgg1)/(mgmL1)(a)总蛋白质 Total proteinb/(molg1)b/(molg1)c/(molL1)c/(molL1)(c)血氨 Blood ammonia100图1 半胱氨酸对卵形鲳鲹肌肉、肝脏和血清中蛋白质代谢参数的影响注：同组数据不同字母上标表示差异显著(P0.05)。后图同此。Fig.1 Effects of cysteine on protein metabolism parameters in muscle,liver and serum of T.ovatusNote:Values with different superscripts for the same group are significantly different(P0.05).The same case in the following figures.ddacbdcbabbcdaadabbcdccabcbbababcddabbdcaabcdbcdcdbaccbaadcbabcbaaadbcaacdbaadbcabc302520151050b/(molg1)302520151050180150120906030080604020035030025020015010050050403020100504030201002502001501005005040302010050403020100250200150100500010203040302010025020015010050051015w/%806040200b/(molg1)b/(molg1)0(a)甘油三酯 TG(b)总胆固醇 T-CHO(c)低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C(d)高密度脂蛋白胆固醇 HDL-C(e)游离脂肪酸 FFA(f)粗脂肪 Crude lipidC0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C4b/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)肌肉 Muscle肝脏 Liver血清 Serumb/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)b/(molg1)图2 半胱氨酸对卵形鲳鲹肌肉、肝脏和血清脂代谢参数的影响Fig.2 Effects of cysteine on lipid metabolism parameters in muscle,liver and serum of T.ovatus第 4 期刘佳兴等:低鱼粉饮食中添加半胱氨酸对卵形鲳鲹幼鱼脂质和蛋白质代谢的影响121(PPAR、CPT1 和 HSL)的 mRNA 水平见图 4-b。C2、C3 与 C4 组 PPAR 基因的 mRNA 水平均显著高于对照组(P0.05)。C2 和 C3 组 CPT1 基因的mRNA 水平显著高于 C0 组(P0.05)。对照组的 HSL基因的 mRNA 水平显著低于其他实验组(P0.05)。2.7 肌肉蛋白质合成相关基因表达肌肉蛋白质合成相关基因(S6K、PI3K、TORbcaaacbbadbacadcbbacdbabdcbabdcbabadcbaacbcbbcabddcaabcdcacdcbaacbdaabcbabcbcabbcdaccbdabdcdC0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C4C0C1C2C3C460504030201005040302010030025020015010050060402006040200604020060402003002001000120100806040208060402001000400300200100040302010403020100054321050040030020010001501209060300160120804002001 2008004000a酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)w/(ngg 1)酶活性 Enzyme activity/(UL1)/(ngmL 1)(a)过氧化物酶体增殖物激活受体 PPAR(b)脂肪酸合成酶 FAS(c)乙酰辅酶 A 羧化酶 ACC(d)过氧化物酶体增殖物激活受体 PPAR(e)激素敏感性脂肪酶 HSL(f)肉毒碱棕榈酰转移酶 1 CPT 1 肌肉 Muscle肝脏 Liver血清 Serumw/(ngg 1)/(ngmL 1)w/(ngg 1)w/(ngg 1)酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)酶活性 Enzyme activity/(UL1)酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)酶活性 Enzyme activity/(UL1)酶活性 Enzyme activity/(UL1)酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)酶活性 Enzyme activity/(Ug 1)图3 半胱氨酸对卵形鲳鲹肌肉、肝脏和血清脂代谢酶活的影响Fig.3 Effect of cysteine on lipid metabolism enzyme activity in muscle,liver and serum of T.ovatusFASPPARACC00.51.01.5相对表达水平Relative expression leveldbcacabbaabcdcbcPPARCPT1HSL0123456相对表达水平Relative expression levelababcabacbabbbcbbcC0C1C2C3C4(a)(b)图4 半胱氨酸对卵形鲳鲹肌肉脂肪合成代谢(a)与分解代谢(b)相关基因相对表达水平的影响Fig.4 Effect of cysteine on relative expression levels of genes related to lipid sy