高效液相色谱法测定煎炸油中的苯并（a）芘含量.pdf

采用液相色谱法测定煎炸油中苯并(a)芘（BaP）的含量，优化了样品前处理方法。样品用正己烷提取，经 SPE 小柱净化，荧光检测器检测。结果表明，苯并(a)芘含量在 0.5 20.0 ngmL-1线性关系良好，相关系数 R2为 0.999 8，检出限为 0.15 gkg-1，定量限为 0.5 gkg-1，3 个不同加标浓度下的平均回收率为 89.1%97.8%，相对标准偏差为 0.8%2.1%，方法灵敏度高，稳定性好。采集 21 份小吃店里油炸过油条、土豆、肉制品的煎炸油样品进行检测，苯并(a)芘的检出率为 100%，含量为 2.82 9.23 gkg-1。关键词：高效液相色谱；苯并(a)芘；固相萃取Determination of Benzo(a)pyrene Content in Frying Oil by HPLCNI Han(Comprehensive Quality and Technical Supervision and Testing Center of Honghe Prefecture,Yunnan Province,Honghe 661100,China)Abstract:The content of benzo(a)pyrene(BaP)in frying oil was determined by HPLC,and the sample pretreatment method was optimized.The sample was extracted with n-hexane,purified by an SPE column,and detected by fluorescence detector.The results showed that the linear relationship of BaP was good within the mass concentration range of 0.5 20.0 gkg-1,with a correlation coefficient of R2=0.999 8 and a detection limit of 0.15 gkg-1 with a quantitative limit of 0.5 gkg-1.The average recoveries under three different spiking gradients at 89.1%97.8%,respectively,RSD ranging from 0.8%to 2.1%.The method has high sensitivity and good stability.21 fried oil samples of deep-fried dough sticks,potatoes and meat products from snack bars were collected for detection.The detection rate of BaP was 100%,and the content range was 2.82 9.23 gkg-1.Keywords:high performance liquid chromatography;benzo(a)pyrene;solid phase extraction苯并(a)芘（Benzo(a)pyrene，BaP）是毒性最强的多环芳烃类物质1-2，食品在油炸、煎烤、熏制等烹调加工过程中，其脂肪、蛋白质、胆固醇、碳水化合物等营养成分会在高温条件下发生热裂解反应，再经过环化和聚合反应生成包括 BaP 在内的多环芳烃类物质。当食品发生碳化现象时，BaP 的生成量将显著增加 10 20 倍3-5。GB 276220226规定油脂及其制品中 BaP 限值为 10 gkg-1，欧盟限值为 2 gkg-17。近年来有多次报道，小吃摊的商贩为追求利益连续多次使用高温煎炸用植物油8。苯并(a)芘对人体危害较大，研究人员对食品中苯并(a)芘的前处理及检测方法进行了研究9-12。本文在参考相关文献及国家标准 GB 5009.27201613中苯并(a)芘测定方法的基础上，对样品处理和检测条件进行了优化，同时本研究对当地小吃店里油炸过油条、土豆、肉制品的煎炸油样品进行抽样检测，以了解其质量安全水平，为相关政府部门对煎炸油食用安全的监管提供支撑数据。1材料与方法1.1材料与设备取当地小吃店里油炸过油条、土豆、肉制品的煎炸油样品，共 21 份。正己烷、二氯甲烷、乙腈均为色谱纯；标准品作者简介：倪涵（1986），女，云南个旧人，硕士，工程师。研究方向：产品质量检验。50 食品安全导刊 2023年8月（下）分析检测乙腈中苯并(a)芘（坛墨质检）；日本岛津高效液相色谱仪 LC-20A，配荧光检测器，Visiprep SPE 真空固相萃取装置（德国默克）；中性氧化铝 SPE 柱、分子印迹 SPE 柱（上海安谱实验科技股份有限公司）。1.2试验方法1.2.1样品提取及净化准确称取 0.500 g 油样，为防止正己烷挥发，在称取好样品的离心管加入 3 mL 正己烷后尽快拧紧离心管盖，涡旋混合 0.5 min，在 40 水浴超声提取10 min，待净化。用 5 mL 二氯甲烷、5 mL 正己烷活化 SPE 小柱后，将样品全部加到小柱中，并用正己烷 2 mL 润洗样品瓶，润洗液加到柱上；用 10 mL 正己烷淋洗，5 mL二氯甲烷洗脱，收集液用氮气吹干，控制温度 40，用 1 mL 乙腈定容。超声 1 min，漩涡混匀 10 s，过 0.22 m 亲水 PTFE 针式滤器，待上机检测。1.2.2色谱条件色谱柱：Hypersil ODS（250 mm4.6 mm，5 m）；流动相：乙腈水=95 5；流速：1.0 mLmin-1；荧光检测器：激发波长 384 nm，发射波长 406 nm；进样量：10 L；柱温：35。1.2.3标准溶液配制将 100 gmL-1的苯并(a)芘标准溶液用乙腈逐级稀释成浓度为0.5 ngmL-1、1.0 ngmL-1、5.0 ngmL-1、10.0 ngmL-1和 20.0 ngmL-1的标准工作液，在 1.2.2的条件下进行测定，每个浓度测定 3 次，取平均值。1.2.4精密度、准确度、回收率称取样品，分别加入标准溶液，样品中 BaP 的添加量为 0.5 gkg-1、5.0 gkg-1、15.0 gkg-1，每个浓度平行测定 7 次，计算平均值、方法回收率和变异系数。2结果与分析2.1方法线性范围在 1.2.2 色谱条件下测定不同浓度的标准工作液，以浓度为横坐标（X），以仪器响应值为纵坐标（Y）绘制标准曲线。结果表明，苯并(a)芘在 0.5 20.0 ngmL-1线性关系较好，线性方程为 Y=26 002X+722.25，相关系数 R2=0.999 8。2.2固相萃取柱的选择GB 5009.272016 中采用中性氧化铝 SPE 小柱和分子印迹 SPE 小柱，比较分析二者的区别，结果如表 1 所示。同等条件下，使用分子印迹 SPE 小柱具有更好的正确度和稳定性。2.3固相萃取净化条件优化GB 5009.272016 方法中，淋洗剂用正己烷用量为 6 mL，洗脱剂用二氯甲烷用量为 6 mL。为确保上样时苯并(a)芘被分子印迹柱全部吸附，洗脱时苯并(a)芘被全部洗脱，实验考察了正己烷用量分别是5 mL、10 mL、15 mL 和二氯甲烷 2.5 mL、5.0 mL、10.0 mL 对洗脱效果的影响。选择某样品，加标量为10 gkg-1，按 1.2.1 的检测方法进行测定，检测结果显示随着洗脱总体积的增加，峰面积逐渐增加，当洗脱总体积增加至 15 mL 和 25 mL 时，峰面积虽呈上升趋势，但上升变化量较小。从实验试剂的安全性和成本方面考虑，实验最终选取的洗脱溶剂组合为正己烷 10 mL、二氯甲烷 5 mL。表 1两种固相萃取柱的比较（n=7）固相萃取柱回收率/%RSD/%中性氧化铝 SPE 小柱83.74.0分子印迹 SPE 小柱99.11.32.4流动相的选择实验结合待测物质的性质以及流动相选择原则，分别采用乙腈水为 95 5、88 12 进行分析，结果发现流动相乙腈水为 95 5 时，色谱峰的峰型较好且分离效果佳。2.5方法检出限和回收率本试验以浓度为 0.5 ngmL-1计算信噪比，然后以 3 倍信噪比确定最低检出限，10 倍信噪比确定定量限。测定方法的检出限为 0.15 gkg-1，定量限为 0.5 gkg-1，低于 GB 5009.272016 的检出限和定量限，能满足实际检测需要。选取样品苯并(a)芘含量为 2.82 gkg-1的样品进行加标实验，加标量为 1.2.4 中浓度，按本文建立的方法进行测定，结果见表 2，方法的正确度和精密度满足化学分析要求。2.6油样中苯并芘的测定采用本实验优化的方法，对 21 个小吃店里油炸过油条、土豆、肉制品的煎炸油样品进行测定，图 1 为某煎炸油样品中的苯并(a)芘色谱图，检测结果见表 3。21 个油样均检出苯并(a)芘，浓度为2.82 9.23 gkg-1，平均浓度为 6.75 gkg-1，均低Aug.2023 CHINA FOOD SAFETY 51分析检测表 2样品加标回收率与精密度表（n=7）样品本底值/（gkg-1）加标量/（gkg-1）测定平均值/（gkg-1）平均回收率/%RSD/%2.820.53.26689.10.85.07.54294.42.115.017.49597.81.8苯并芘9.1467.879检测器AEX378 nm Em:410 nm0.00.02.55.07.5mV1.02.03.04.05.06.07.08.09.010.0图 1某煎炸油样品苯并(a)芘色谱图表 321 个煎炸油样品检测结果样品名称样品数量/个苯并(a)芘含量范围/（gkg-1）苯并（a）芘含量平均值/（gkg-1）油炸油条用油95.338.416.95油炸土豆用油62.827.615.81油炸肉制品用油66.369.237.41于 GB 27622022 中苯并(a)芘限量要求。3结论本文对苯并(a)芘的高效液相色谱分析方法进行了样品前处理和流动相比例的优化，经验证方法的回收率在 89.1%97.8%，相对标准偏差在0.8%2.1%，可满足油中苯并(a)芘检测的质控要求。应用建立的方法对 21 份小吃店里油炸过油条、土豆、肉制品的煎炸油样品进行检测，苯并(a)芘的检出率为 100%，含量为 2.82 9.23 gkg-1，均未超过国家限量标准10 gkg-1，但需加强监测，确保食品安全。参考文献1 王欣,周智慧,赵晓联.苯并(a)芘危害性及其检测技术 J.粮食与油脂,2011(3):48-49.2 罗皓,唐焕文,杜进林,等.苯并(a)芘的毒性及其致癌机制研究现状 J.实用预防医学,2011,18(4):772-773.3ZHANG Q,SALEH A S M,CHEN J,et al.Chemical alterations taken place during deep-fat frying based on certain reaction products:a reviewJ.Chemistry and Physics of Lipids,2012,165(6):662-681.4 曾 楚 莹,曹 小 云,吕 海 燕.ASE-GC-MS/MS 法测定海产品中苯并(a)芘含量方法的建立 J.食品工业,2019,40(6):266-269.5 樊大江,彭景.烹调方法与致癌、致突变作用 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