粪便miRNA675-5p联合qFIT检测对结直肠癌筛查的诊断价值.pdf
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1、第5 2卷第4期第5 4 0页2 0 2 3年8月 华中科技大学学报(医学版)A c t aM e dU n i vS c iT e c h n o lH u a z h o n g V o l.5 2 N o.4 P.5 4 0A u g.2 0 2 3*2 0 2 1年度职业危害识别与控制湖北省重点实验室开放基金项目(N o.OH I C 2 0 2 1 G 0 3)陈 洁,女,1 9 8 7年生,主治医师,E-m a i l:2 8 4 6 5 2 2 3 2q q.c o m通讯作者,C o r r e s p o n d i n ga u t h o r,E-m a i l:w u
2、h e 9 2 2 4s i n a.c o m粪便m i R NA 6 7 5-5 p联合q F I T检测对结直肠癌筛查的诊断价值*陈 洁1,王 阳1,金 曙2,李 欢1,龙 辉1,吴清明1,31武汉科技大学附属天佑医院消化内科,武汉 4 3 0 0 6 42湖北省十堰市太和医院消化内科,十堰 4 4 2 0 9 93武汉科技大学医学院感染免疫肿瘤微环境研究所,职业危害识别与控制湖北省重点实验室,武汉 4 3 0 0 7 0摘要:目的 探讨粪便m i R NA 6 7 5-5 p联合q F I T在结直肠癌筛查中的诊断价值。方法 纳入2 0 1 6年1月至2 0 2 1年1 2月于武汉科技
3、大学附属天佑医院和十堰市太和医院就诊的1 7 3例患者,收集其临床资料及粪便标本,包括4 8例结直肠癌组、4 6例腺瘤组、4 2例息肉组、3 7例正常对照组。采用q R T-P C R法检测粪便m i R NA 6 7 5-5 p,定量粪便免疫化学检测(q F I T)检测粪便潜血。采用R O C曲线评估q F I T及m i R NA 6 7 5-5 p联合q F I T检测对结直肠癌及腺瘤的诊断价值。结果 结直肠癌组的q F I T值2 5 9.9 4(3 6.2 5,7 5 8.5 5)明显高于腺瘤组0(0,1 3.4 2)、息肉组0(0,0)、正常对照组0(0,0),差异有统计学意义(
4、均P0.0 1);腺瘤组高于息肉组和正常对照组,差异有统计学意义(P0.0 5,P0.0 1)。结直肠癌组q F I T敏感度为8 5.4%,特异度为1 0 0%;腺瘤组q F I T敏感度为2 8.3%,特异度为9 7.3%。联合检测(m i R-NA 6 7 5-5 p联合q F I T)结直肠癌组敏感度1 0 0%,特异度8 9.2%;腺瘤组敏感度7 1.7%,特异度8 6.5%。结直肠癌组、腺瘤组联合检测优于q F I T单独检测,差异有统计学意义(均P0.0 1)。结论 m i R NA 6 7 5-5 p联合q F I T检测能够提高早期结直肠癌筛查诊断效能。关键词:结直肠癌;m
5、i R NA 6 7 5-5 p;定量粪便免疫化学检测中图分类号:R 7 3 5.3 D O I:1 0.3 8 7 0/j.i s s n.1 6 7 2-0 7 4 1.2 0 2 3.0 4.0 1 7D i a g n o s t i cV a l u eo fF e c a lm i R N A 6 7 5-5 pC o m b i n e dw i t hq F I Ti nC o l o r e c t a lC a n c e rS c r e e n i n gC h e nJ i e1,W a n gY a n g1,J i nS h u2e t a l1D e p a r
6、 t m e n t o fG a s t r o e n t e r o l o g y,T i a n y o uH o s p i t a lA f f i l i a t e dt oW u h a nU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y,W u h a n4 3 0 0 6 4,C h i n a2D e p a r t m e n t o fG a s t r o e n t e r o l o g y,T a i h eH o s p i t a l,S h i y a n 4 4 2 0 9 9,
7、C h i n aA b s t r a c t O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et h ed i a g n o s t i cv a l u eo f f e c a lm i R NA 6 7 5-5 pc o m b i n e dw i t hq F I Ti nc o l o r e c t a lc a n c e rs c r e e n i n g.M e t h o d s C l i n i c a l d a t aa n ds t o o l s p e c i m e n sw e r ec o l l e c t
8、 e d f r o m1 7 3p a t i e n t sa d m i t t e dt oT i a n y o uH o s p i t a lA f f i l i a t e dt oW u h a nU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g ya n dT a i h eH o s p i t a l o fS h i y a nC i t y f r o mJ a n u a r y2 0 1 6t oD e c e m b e r 2 0 2 1,i n c l u-d i n g4 8p a t
9、i e n t s i nc o l o r e c t a l c a n c e rg r o u p,4 6p a t i e n t s i na d e n o m ag r o u p,4 2p a t i e n t s i np o l y pg r o u pa n d3 7p a t i e n t s i nn o r m a lc o n t r o l g r o u p.F e c a lm i R NA 6 7 5-5 pw a sd e t e c t e db yq R T-P C Ra n d f e c a l o c c u l t b l o o dw
10、 a sd e t e c t e db yq u a n t i t a t i v e f e c a l i mm u n o-c h e m i c a l a s s a y(q F I T).R O Cc u r v ew a su s e dt oe v a l u a t e t h ed i a g n o s t i cv a l u eo f q F I Ta n dm i R NA 6 7 5-5 pc o m b i n e dw i t hq F I Ti nc o l o r e c t a l c a n c e ra n da d e n o m a.R e
11、s u l t s T h eq F I Tv a l u eo fc o l o r e c t a l c a n c e rg r o u p2 5 9.9 4(3 6.2 5,7 5 8.5 5)w a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a nt h a to f a d e n o m ag r o u p0(0,1 3.4 2),p o l y pg r o u p0(0,0)a n dn o r m a l c o n t r o lg r o u p0(0,0),w h i c hw a ss t a t i s t i-c a
12、 l l ys i g n i f i c a n t(a l lP0.0 1).T h eq F I Tv a l u eo fa d e n o m ag r o u pw a sh i g h e rt h a nt h a to fp o l y pg r o u pa n dn o r m a lc o n t r o lg r o u p,t h ed i f f e r e n c e sw e r es t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t(P0.0 5,P0.0 1).T h es e n s i t i v i t ya
13、n ds p e c i f i c i t yo fq F I Ti nc o l o r e c t a lc a n c e rg r o u pw e r e 8 5.4%a n d1 0 0%,a n d t h e s e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t yo f q F I Ti na d e n o m ag r o u pw e r e 2 8.3%a n d9 7.3%.T h es e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t yo fm i R NA 6 7 5-5 pc o
14、m b i n e dw i t hq F I Tw e r e1 0 0%a n d8 9.2%i nc o l o r e c t a l c a n c e rg r o u p,7 1.7%a n d8 6.5%i na d e n o m ag r o u p.T h ed e t e c t i o nr a t eo fc o m b i n e dt e s t i nc o l o r e c t a l c a n c e rg r o u pa n da d e n o m ag r o u pw a sh i g h e rt h a nt h a to fq F I
15、Ta l o n e,a n dt h ed i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t(a l lP0.0 5),具有可比性。本研究中所有研究对象均自愿参加并签署知情同意书,该研究方案经本院伦理委员会审批通过(伦理号:2 0 1 5 1 2、L L-2 0 2 2-1 1-2 8-0 1)。1.2 研究方法在术前或内镜检查前留取约25g粪便放入粪便收集器中,放置-8 0冰箱留存,用于m i R NA的提取检测,并用q F I T采便器留取粪便标本进行q F I T检测。本实验所有结肠镜检查由具有高级
16、职称的内镜医师开展。若镜下发现异常病变,均取组织活检以明确病理诊断,并记录相应病变的大小、颜色、形态、数目、与周围组织关系等。根据结肠镜和活组织病理检查结果,分为结直肠癌组、腺瘤组、息肉组和正常对照组。1.3 m i R N A 6 7 5-5 p的检测方法1.3.1 主要仪器和试剂 科鹿(武汉)生物科技有限公司生产的核酸提取试剂盒(E P 0 1 4)、核酸纯化试 剂 盒(E P 0 1 3)、第 一 链c D NA合 成 试 剂 盒(E Q 0 0 3),E n T u r b oTMS Y B RG r e e nP C RS u p e r M i x,荧光定量P C R仪(Q u a
17、 n t S t u d i o6F l e x)购自美国生命技术公司。荧光定量P C R所用引物为武汉恒意赛生物科技有限公司合成,引物序列:m i R NA 6 7 5-5 p上游引物:5 -C T T G G T G C G GAGAG G G C-3,下游 引 物:5 -C T C AA C T G G T G T C G T G GAG T C-3;内参基因U 6上游 引 物:5 -C T C G C T T C G G C AG-C A C AT-3,下 游 引 物:5 -AA C G C T T C A C GAA-T T T G C G T-3。1.3.2 q R T-P C R
18、检测 T r i z o l法提取总R NA,逆转录成c D NA,产物用于q R T-P C R扩增。实时荧光 定 量P C R是 在L i f e t e c h n o l o g i e s公 司 的S t e p O n eTMR e a l-T i m eP C R仪上完成,每个样品均作3个复孔,使用E n T u r b oTMS Y B RG r e e nP C RS u-p e r M i x试剂盒进行(E L KB i o t e c h n o l o g y,E Q 0 0 1)。反应体系为:2 M a s t e rM i x5.0L,引物工作液(2.5m o l/
19、L)1.0L,T e m p l a t e1.0L,d d H2O2.0L,R o x1.0L。反应程序为:预变性9 5,3m i n,9 5,1 0s5 8,3 0s7 2,3 0s,循环(4 0次)。反应结束后生成荧光定量值动态曲线,分析显示结果及循环阈值(C t)。对照为U 6基因。采用F=2-C t法分析比较目的基因在结直肠癌、腺瘤、息肉及正常对照组粪便中的表达。C t=(C tm i R-NA 6 7 5-5 p-C t U 6)实验组-(C tm i R NA 6 7 5-5 p-C t U 6)对照组。1.4 q F I T检测方法1.4.1 主要仪器和试剂 高敏定量粪便血红蛋
20、白检测系统专用机(F C-1 0 0 B)、采便管、大便隐血试剂。1.4.2 q F I T检测 严格按照要求及说明书进行q F I T检测,结果1 0g/g为阴性,1 0g/g以具体数值表示;两份检测结果取最大值为最终结果。145陈 洁等.粪便m i R NA 6 7 5-5 p联合q F I T检测对结直肠癌筛查的诊断价值1.5 统计学方法应用S P S S2 6.0统计学软件,符合正态分布的计量资料以xs表示,组间均数比较采用独立样本t检验,不符合正态分布的用中位数M(P2 5,P7 5)表示,采用M a n n-Wh i t n e yU秩和检验。绘制R O C曲线,得出曲线下面积,应
21、用约登指数,算出截断值和敏感度、特异度。计数资料组间比较采用卡方检验,当理论频数T5时,采用非连续校正检验;当1T5用连续校正检验;当T1时,用F i s h e rs确切概率法检验,以P0.0 5表示差异有统计学意义。2 结果2.1 各组q F I T检测结 直 肠 癌 组 的q F I T值 2 5 9.9 4(3 6.2 5,7 5 8.5 5)明显高于腺瘤组0(0,1 3.4 2)、息肉组0(0,0)、正常对照组0(0,0)(均P0.0 1),腺瘤组高于息肉组和正常对照组,差异有统计学意义(P0.0 5,P0.0 5正常对照组0(0,0)-与腺瘤组相比P0.0 1,与息肉组相比#P0.
22、0 5,与正常对照组相比*P0.0 12.2 q F I T检测对结直肠癌、腺瘤的诊断价值将结直肠癌组、腺瘤组分别与正常对照组比较,利用R O C诊断模型,绘制结直肠癌组q F I T的R O C曲线,得出AU C:0.9 2 5,9 5%C I(0.8 6 4,0.9 8 7),应用约登指数算出,当q F I T的截断值为2 1.4 3 5u g/g时,其预测肠癌的敏感度为8 5.4%(4 1/4 8),特异度为1 0 0%(3 7/3 7),约登指数为0.8 5 4(图1)。腺瘤组q F I T的R O C曲线,得出AU C:0.6 3 0,9 5%C I(0.5 1 1,0.7 4 9)
23、。应用约登指数算出,当q F I T的截断值 为5.3 9g/g时,其 预 测 腺 瘤 的 敏 感 度 为2 8.3%(1 3/4 6),特异度为9 7.3%(3 6/3 7),约登指数为0.2 5 6(图2)。2.3 m i R N A 6 7 5-5 p联合q F I T检测对结直肠癌、腺瘤的诊断价值 将结直肠癌组、腺瘤组分别与正常对照组比较,利用R O C诊断模型,绘 制结直肠 癌组联合 检 测(m i R NA 6 7 5-5 p联合q F I T)的R O C曲线的AU C:0.9 9 3,9 5%C I(0.9 4 5,1.0 0 0)(图3),联合检测对结直肠癌诊断的敏感度1 0
24、 0%(4 8/4 8),特异度8 9.2%(3 3/3 7)。腺 瘤 组 联 合 检 测(m i R NA 6 7 5-5 p联 合q F I T)的R O C曲 线,得 出AU C:0.8 9 7,9 5%C I(0.8 1 0,0.9 5 3)(图4)。联合检测对腺瘤诊断的敏感度7 1.7%(3 3/4 6),特异度8 6.5%(3 2/3 7)。结直肠癌组联合检测R O C曲线的AU C(0.9 9 3)值高于q F I T单独检测AU C值(0.9 2 5)(P0.0 1)。腺瘤组联合检测AU C(0.8 9 7)值明显高于q F I T单独检测AU C值(0.6 3 0)(P0.0
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