植物细胞染色体标本的制作与观察.doc
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普通生物学实验课须知 1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。 2.每次进入实验室的时间为以课表为准,提前10分钟进入实验室。 3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验,不来者,视为旷课。如因特殊情况请假,需在实验开始前至少三天向指导教师说明,在选课平台系统中取消原预约时间,重新预约,一次不做实验或一次不交报告,即按不及格论处。 4.预习实验内容和有关知识,写好预习报告(手写),前四部分内容(一、实验目的,二、实验原理,三、实验器材与试剂,四、实验步骤与操作方法),无预习报告者扣10分。 5. 实验过程中应认真操作,仔细观察实验现象,做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照,DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果,请自备拍照工具和U盘)。 6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。 7. 实验完毕,要将自己使用的仪器刷洗干净,药品按序恢复原位,台面擦净,把自己做实验的一套东西找齐,经指导老师检查合格并签字后方可离开。 8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面,检查水、电、门窗是否关好。 9. 实验讲义:实验预约系统中可以下载,也可到生命科学与技术学院网站下载。 10. 实验报告模板见附件,需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。 植物细胞染色体标本的制作与观察 上课地点:化学楼120 上课时间:选课时 任课教师:陈丽杰 办公地点:生化楼215 电话:84706308 课程要求: 预习实验内容,掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤; 手写完成预习报告(实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤),课堂检查预习报告情况。 实验注意事项: 1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐; 2、实验废物按实验室管理老师要求收集; 3、实验结束后,经老师检查后方可离开。 实验纪律: 1、按时上课 2、穿实验服(白大衣) 3、不许吃东西,课堂严禁大声喧哗 4、手机静音 实验成绩: 预习报告: 20分 实验操作: 40分 报告内容:结果和讨论 40分 植物细胞染色体标本的制作与观察 1. 实验背景与原理 染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。因此,染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型(karyotype)。核型分析在物种亲缘鉴定,染色体变异分析,杂种分析,细胞分裂过程分析,孤雌生殖等研究中均有重要的作用。 染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法(空气干燥法)等。压片法操作简单,是常用的植物染色体标本制备的方法。不过,该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。 染色体制备的重要环节如下: (1)取材:应取分生旺盛的组织或细胞。在植物中通常取根尖,在分裂高峰时取材,可得到大量分裂相细胞。而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞,或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞,也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。 (2)预处理:使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成,不但可得到大量分裂相细胞,而且可使染色体缩短变粗,有利于观察。 (3)固定:渗透力强的固定液将细胞迅速杀死,蛋白质沉淀,并可尽量保持细胞原有状态。 (4)解离或低渗:植物细胞要除去细胞间的果胶层,并使细胞壁软化,从而使细胞得以膨胀,为染色体的分散提供了空间。常用解离方法有酸解法和酶解法。动物细胞无细胞壁,通常不需解离,而是用低渗液使细胞膨胀。 (5)染色体分散:通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。 2. 实验目的 (1)掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。 (2)了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点, 熟练掌握显微镜的使用。 (3)理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。 3. 实验材料与试剂 (1)材料:市售大蒜。 (2)设备与用品:普通光学显微镜,水浴锅,盖玻片,载玻片,异物针,镊子,平皿,滤纸等。 (3)药品与试剂:秋水仙胺,甲醇,盐酸等。 l 改良石炭酸品红染液: 是近年来观察植物染色体时使用的比较理想的染色剂,染色背景清晰,反差好,使用方便。配制方法如下: 原液A:取3 g碱性品红溶于100 mL 70%的酒精中,此液可以长期保存。 原液B:取A液10 mL加入90 mL 体积分数为0.05的苯酚(即石炭酸)水溶液中(2周内使用)。 原液C:取B液55 mL加入6 mL的冰醋酸和6 mL 37%的甲醛(可长期保存)。 染色液:取C液10 mL,加入90 mL 体积分数为0.45的醋酸和1.8 g山梨醇。放置2周后使用,染色效果显著,可普遍用于植物组织的压片法和涂片法,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用。如果没有山梨醇,也能染色,但效果稍差。 l 卡诺固定液:甲醇-冰醋酸(体积比3:1),现用现配。 4. 实验方法与步骤 l 实验内容:① 压片法制备大蒜根尖细胞的染色体标本; ② 观察男人和女人染色体、洋葱细胞有丝分裂的永久标本。 l 实验学时:3学时。 (1)取材:保持大蒜根部湿润,使根发约1~1.5 cm即可,不能过长。取大蒜0.5~1 cm的根尖。 (2)预处理:0.5~2 gL-1(用纯水配制)秋水仙胺处理3~4 h。 (3)固定:卡诺固定液4 ℃下固定30 min后,用蒸馏水洗净。 (4)解离:60 ℃水浴下1 mol/L HCl(浓盐酸稀释大约10倍)解离10 min。 (5)洗涤:用蒸馏水清洗根尖组织。若洗不净,会影响染色。 (6)用改良的石炭酸品红染色5 min,可直接在载玻片上进行,染色前可用异 物针去掉分生区以后部分,保留根尖0.2~0.3 cm即可。染色时用针把组织拨散。 (7)压片,敲片:盖上盖玻片,上面垫上一张滤纸,先用手指轻轻均匀地按压 盖玻片,使组织初步压散,并且可使盖玻片压牢,防止敲片时盖玻片移动。再用 异物针的针柄一端垂直轻轻落下(为防敲碎玻片,可再在盖玻片上垫一张滤 纸),进一步敲散组织,使染色体充分散开。敲至组织在玻片上呈现雾状。 (8)观察结果:细胞核着色,而细胞质不着色。大蒜有8对16条染色 体(2n=16)。好的染色体标本染色体应该分散较好,不重叠,不缺失,染色体形 态清晰。 大蒜根尖细胞的染色体制片(×400,箭头示染色体) 5. 实验注意事项 (1)若材料不易生根,可把材料在4 ℃低温处理促使其生根,不过注意低温有时也会诱导染色体数目加倍。过长的根尖分裂相会大大减少,所以不要取长度超过1.5 cm的根尖。 (2)秋水仙胺,又名脱甲酰秋水仙碱,毒性比秋水仙碱(秋水仙素)小,作用却比秋水仙碱强约10倍。 (3)压片、敲片时力量要均匀合适,避免弄碎玻片;载玻片和盖玻片之间也不要移动。 (4)可随时镜检判断敲片进行的程度,但要注意整个过程要保持标本的湿润。 6. 思考题 若染色体标本结果不理想,请分析一下可能的原因有哪些? 附件2:大连理工大学实验报告封皮范本 大连理工大学 本科实验报告 课程名称: 普通生物学实验 学院(系): 专 业: 班 级: 学 号: 学生姓名: 年 月 日 附件3:大连理工大学实验报告范本 大连理工大学实验报告 学院(系): 专业: 班级: 姓 名: 学号: 组: ___ 实验时间: 实验室: 实验台: 指导教师签字: 实验班级号: 成绩: 实验名称:植物细胞染色体标本的制作与观察 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料与试剂 四、实验步骤 五、实验结果 六、实验讨论 注:预习报告完成前四项即可。 7- 配套讲稿:
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- 植物 细胞 染色体 标本 制作 观察
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