粉葛不同外植体的诱导与松散型愈伤组织增殖研究.pdf
《粉葛不同外植体的诱导与松散型愈伤组织增殖研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《粉葛不同外植体的诱导与松散型愈伤组织增殖研究.pdf(9页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 山 东 农 业 科 学():./.收稿日期:基金项目:湖北省重点研发计划项目()湖北省现代农业产业技术体系项目()湖北省农业科学院青年基金项目()恩施州科技计划项目()作者简介:袁名远()男湖南新化人硕士研究生研究方向为林特食品加工与开发:.通信作者:何美军()男湖北建始人博士副研究员主要从事药食同源植物天然产物开发研究:.罗凯()男湖北利川人博士副教授主要从事食品化学与营养研究工作:.粉葛不同外植体的诱导与松散型愈伤组织增殖研究袁名远罗凯刘玉吴丽雯孙慧茹赵苓云李宇何美军(.湖北民族大学生物科学与技术学院湖北 恩施.湖北省农业科学院中药材研究所/农业农村部中药材生物学与栽培重点实验室湖北 恩
2、施)摘要:为建立系统的粉葛松散型愈伤组织培养体系比较分析了不同浓度的外源激素 和 组合对粉葛叶片、叶柄和茎段三种外植体的诱导效果并对具有松散形态的愈伤组织进行增殖培养运用响应面法结合 对增殖条件进行系统优化采用分光光度法检测此条件下诱导的愈伤组织中总黄酮和总酚的含量 结果表明茎段和叶柄的最适诱导条件均为.诱导率最高分别达到.和.叶片的最适诱导条件为.诱导率最高为.筛选出茎段作为松散型愈伤组织诱导和增殖的材料增殖的初步条件为.响应面优化后的松散型愈伤组织最适增殖条件为.此条件下愈伤组织主要为黄绿色呈现较松散的状态增殖系数最高达到.总黄酮和总酚含量分别为.、.关键词:粉葛松散型愈伤组织外源激素增殖
3、次生代谢产物响应面法中图分类号:.文献标识号:文章编号:().().(./).().().粉葛 .().是豆科()葛属()多年生藤本蔓生植物又名甘葛藤是国家认定的药食同源植物之一主要分布于广西、江西、湖北以及安徽等地且多为人工栽培粉葛含有大量的淀粉以及丰富的葛根素、大豆苷、大豆苷元等异黄酮成分具有解酒、抗氧化、降血糖、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种功效被誉为“南葛北参”“亚洲人参”鉴于粉葛特殊的药用功效高效、规模化生产粉葛活性成分具有巨大的市场前景 目前粉葛市场正逐渐扩大对粉葛资源的需求也日渐迫切粉葛的传统繁殖方式主要是葛头繁殖、块根繁殖、扦插繁殖和压条繁殖这些繁殖方式虽然能提供一定量的粉葛资源但受
4、季节、气候、病虫害等自然条件影响种苗成活率不高、繁殖系数低且繁殖周期较长限制了粉葛资源的发展 植物组织培养技术是一种快速、高效的繁殖技术它的发展为解决粉葛上述问题提供了理论基础和技术支撑 愈伤组织诱导是植物组织培养的重要阶段是建立组织培养体系的前提培养的愈伤组织不仅能用于异黄酮等次生代谢产物的生产还可用于优良品种的快速繁殖、多倍体诱变育种以及遗传转化等研究目前关于粉葛愈伤组织培养的研究还不够系统对其次生代谢产物生产的研究很少本研究从粉葛的不同外植体入手利用不同处理组合的外源激素对其进行诱导筛选出诱导愈伤组织的最适外植体及松散型愈伤组织继代增殖的条件运用响应面法对增殖条件进行优化并检测愈伤组织中
5、主要次生代谢产物的含量以期为建立系统、高效的粉葛组织培养和次生代谢产物生产体系提供科学依据以缓解粉葛资源的短缺问题 材料与方法.试验材料与试剂、仪器试验材料为半年生粉葛全株采集于湖北省恩施市三岔镇(.平均海拔)由湖北省农业科学院中药材研究所鉴定试剂:次氯酸钠()、无水乙醇、吐温、无水碳酸钠()、福林酚、培养基、蔗糖、琼脂等均购于国药集团苄氨基腺嘌呤()、萘乙酸()、二氯苯氧乙酸()、葛根素、没食子酸购于阿拉丁试剂公司氯化汞()领取于湖北省农业科学院中药材研究所仪器:紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)超净工作台(上海东联哈尔仪器制造有限公司)电子天平(上海佑科仪器仪表有限公司)接种器具
6、杀菌器(上海稼丰园艺用品有限公司)等.试验方法.粉葛幼苗培育剪去粉葛植株的地上部分切下葛头栽入装有混合基质的栽培盆中用自来水浇透沥去多余水分后放入 组培室中培养(培养所需环境条件见表)浇水一次并除去杂草当形成株高 的粉葛苗后即可用于组织培养 山 东 农 业 科 学 第 卷 表 愈伤组织培养条件培养基条件激素按设计方案.蔗糖 琼脂 值.环境条件温度湿度光照 黑暗 光强 注:如无特殊说明以下培养条件均按此.无菌外植体制备从粉葛苗上采下粉葛叶片、叶柄(带小叶柄)以及茎段(带茎段节)并分类先用自来水洗去表面的泥土和杂物随后置于含有适量吐温 的无菌水中浸泡 取出在超净工作台上继续用无菌水清洗 次随后依次
7、用 乙醇浸泡 左右、.的升汞溶液处理 、的次氯酸钠溶液处理 (每次更换消毒剂时均使用无菌水清洗 次)使用无菌滤纸吸干表面水分然后将叶片剪成.的小块叶柄和茎段切成.长的小段作为 种无菌外植体.粉葛不同外植体的诱导效果比较 基于前期试验设置不同浓度(.、.、.)与(.、.、.)组合处理及不含激素的空白对照共 个处理(表)对 种外植体分别进行诱导每个组培瓶接种 个外植体每个处理接种 瓶重复接种 批 后统计诱导结果 表 不同浓度 与 组合下的外植体诱导方案()处理.茎段松散型愈伤组织的增殖条件筛选参考.中由茎段诱导出较松散愈伤组织的条件设置不同浓度(.、.、.)与(.、.、.)组合处理及不含激素的空白
8、对照共 个处理(表)对松散型愈伤组织的增殖条件进行筛选 每个组培瓶接种块大小为(.)的愈伤组织每个处理接种 瓶 后统计增殖结果 表 不同浓度 与 组合下的松散型愈伤组织增殖方案()处理.响应面法优化松散型愈伤组织的增殖条件 在.筛选的增殖条件基础上引入生长素结合响应面法对松散型愈伤组织的增殖条件进行改善 利用 .软件根据 设计原理以增殖率为响应值按表 方案设计三因素三水平试验 后统计相关指标 表 响应面设计试验因素与水平()水平因素()()().总黄酮与总酚含量测定()愈伤组织甲醇提取液制备:将愈伤组织取出去除表面培养基等杂质放入 烘箱中干燥至恒重粉碎过 目筛 称取 粉末加入 甲醇混匀 超声萃
9、取 萃取 次后合并滤液于 容量瓶定容得到样品母液密封后置于保存备用()总酚含量测定:取上述母液 定容于 容量瓶作为检测样参考郭刚军等的方法进行没食子酸标准曲线绘制和样品总酚含量检测()总黄酮含量测定:取上述母液 定容于 容量瓶作为检测样参考张静等的 第 期 袁名远等:粉葛不同外植体的诱导与松散型愈伤组织增殖研究方法进行葛根素标准曲线绘制和样品总黄酮含量检测.数据处理采用 软件进行显著性分析.软件进行响应面分析 进行标准曲线绘制试验数据以“平均值标准偏差”表示统计.、.水平的差异显著性诱导率()诱导出愈伤组织的外植体数接种外植体数 增殖系数增殖后愈伤组织鲜重增殖前愈伤组织鲜重 结果与分析.粉葛不
10、同外植体的诱导效果比较在不同浓度 与 组合处理下叶片、叶柄以及茎段 种外植体在诱导期内均有萌动现象但对激素的敏感能力差异显著(图)叶柄在靠近叶片的小叶柄部位最为敏感第 天即有膨大现象产生而近茎端稍晚于第 天开始膨大茎段在培养第 天开始从两端膨大且带茎段节处发生较早叶片外植体先发生卷边现象随之变厚第 天从叶片边缘处出愈少部分从叶脉处隆起出愈.叶片.带小叶柄的叶柄.带茎节的茎.诱导中的叶片.诱导中的叶柄.诱导中的茎段“”为比例尺表示 图 外植体材料和诱导中的外植体 如图 所示叶片主要产生黄绿色和绿色的愈伤组织质地较为紧实叶柄和茎主要产生黄绿色的愈伤组织其中茎段多个处理组的愈伤组织质地较为松散由表
11、表 可见在本试验条件下浓度较高时愈伤组织的长势较好低浓度时易导致外植体和愈伤组织褐化 浓度一定时叶片、叶柄和茎三种外植体的愈伤组织诱导率在.、.时较高最高分别达到.、.和.低浓度 处理下外植体诱导不完全出愈率低无植物激素的处理组均没有愈伤组织产生而且外植体多数褐化死亡综合.诱导 的叶片.诱导 的叶柄.诱导 的茎段“”为比例尺表示 图 诱导完成的愈伤组织 山 东 农 业 科 学 第 卷诱导率、褐化程度以及愈伤组织的量考察三种外植体的诱导情况 (.)、(.)和(.)处理分别为叶片、叶柄和茎段的最适诱导条件 其中茎段愈伤组织在多个处理组表现出松散状态因此将茎段用于松散型愈伤组织的增殖培养 表 不同浓
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 粉葛 不同 外植体 诱导 松散 型愈伤 组织 增殖 研究
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。