二脒那秦激活ACE2对非酒精性脂肪肝病大鼠肝线粒体影响研究.pdf

畜牧兽医学报 2 0 2 3,5 4(9):3 8 9 5-3 9 0 4A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i:1 0.1 1 8 4 3/j.i s s n.0 3 6 6-6 9 6 4.2 0 2 3.0 9.0 2 8开放科学(资源服务)标识码(O S I D):二脒那秦激活A C E 2 对非酒精性脂肪肝病大鼠肝线粒体影响研究张亚峰,朱 斌,马 畅,张源淑*(南京农业大学 农业农村部动物生理生化重点开放实验室,南京 2 1 0 0 9 5)摘 要:旨在通过建立高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病(n o n-a l c o h o l i c f a t t y l i v e r d i s e a s e,NA F L D)模型,研究二脒那秦(D I Z E)激活血管紧张素转换酶2(A C E 2)对线粒体结构和功能的影响。试验选取2 6只雄性S D大鼠,随机选取9只大鼠饲喂普通饲料作为对照组(C ON组),其余大鼠饲喂高脂饲料进行造模,4周后,随机各取1只进行处理,经病理组织学检查确认成功建立NA F L D模型。造模成功的大鼠随机分为模型组(MO D组)和二脒那秦组(D I Z E组)(每组8只),MO D组继续饲喂高脂饲料同时灌胃3 m Ld-1生理盐水,D I Z E组饲喂高脂饲料并灌胃1 5 m g(k gd)-1 D I Z E,C ON组继续饲喂普通饲料并灌胃等量生理盐水。试验至第1 0周,采集大鼠血清和肝组织样品进行试验:1)检测血清中T G、T C含量;2)E L I S A 法测定肝组织中A n g 和 A n g 1-7含量;3)W e s t e r n b l o t法检测A C E 2,线粒体融合蛋白(M f n 1、O P A 1),分裂蛋白(F i s 1、D r p 1)及解偶联蛋白1(U C P 1)的蛋白表达水平;4)R T-q P C R法检测线粒体生物发生和线粒体呼吸链复合物相关基因的mR NA表达水平。结果表明:1)高脂饲料饲喂4周后大鼠HE染色肝脏出现明显的脂肪沉积,成功建立NA F L D模型;2)与 C ON 组相比,MO D 组大鼠血清中的T G、T C含量显著升高(P0.0 5),D I Z E组则较MO D组显著降低(P0.0 5);3)与 C ON 组相比,MO D 组A C E 2蛋白表达水平极显著降低(P0.0 1),A n g/A n g 1-7比值显著升高(P0.0 5),D I Z E组则较MO D组A C E 2蛋白表达水平极显著升高,A n g/A n g 1-7比值极显著降低(P0.0 1);4)与 C ON 组相比,MO D 组线粒体融合、分裂及U C P 1蛋白表达水平极显著或显著降低(P0.0 1或P0.0 5),D I Z E组则较MO D组极显著升高(P0.0 1);5)与 C ON 组相比,MO D 组线粒体生物发生和线粒体呼吸链复合物和基因mR NA表达水平极显著下调(P0.0 1),D I Z E组则较MO D组极显著或显著上调(P0.0 1或P0.0 5)。综上表明,D I Z E能够激活A C E 2继而缓解由高脂饮食引起的对线粒体生物发生、融合、分裂以及呼吸链相关指标的抑制作用,从而达到治疗NA F L D 的效果。本研究为D I Z E治疗NA F L D提供新思路,D I Z E作为老药新用具有潜在的研究价值。关键词:二脒那秦(D I Z E);非酒精性脂肪肝病;血管紧张素转换酶2(A C E 2);线粒体;大鼠中图分类号:S 8 5 2.2 文献标志码:A 文章编号:0 3 6 6-6 9 6 4(2 0 2 3)0 9-3 8 9 5-1 0收稿日期:2 0 2 3-0 2-2 3基金项目:国家自然科学基金项目(3 1 9 7 2 6 4 0)作者简介:张亚峰(1 9 9 7-),女,河南平顶山人,硕士生,主要从事动物生物化学研究,E-m a i l:2 0 2 1 1 0 7 0 3 4s t u.n j a u.e d u.c n*通信作者:张源淑,主要从事动物生物化学研究,E-m a i l:z h a n g y u a n s h u n j a u.e d u.c nT h e R e s e a r c h o n t h e E f f e c t s o f A C E 2 A c t i v a t e d b y D i m i n a z e n e A c e t u r a t e o n M i t o c h o n d r i a i n t h e L i v e r o f R a t s w i t h N o n-a l c o h o l i c F a t t y L i v e r D i s e a s eZ HANG Y a f e n g,Z HU B i n,MA C h a n g,Z HANG Y u a n s h u*(K e y L a b o r a t o r y o f A n i m a l P h y s i o l o g y a n d B i o c h e m i s t r y o f M i n i s t r y o f A g r i c u l t u r e a n d R u r a l A f f a i r s,N a n j i n g A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y,N a n j i n g 2 1 0 0 9 5,C h i n a)A b s t r a c t:T h e a r t i c l e a i m s t o s t u d y t h e e f f e c t s o f d i m i n a z e n e a c e t u r a t e(D I Z E)a c t i v a t i o n o f A n-g i o t e n s i n-c o n v e r t i n g e n z y m e 2(A C E 2)o n m i t o c h o n d r i a l s t r u c t u r e a n d f u n c t i o n b y e s t a b l i s h i n g a h i g h-f a t d i e t-i n d u c e d n o n-a l c o h o l i c f a t t y l i v e r d i s e a s e(NA F L D)m o d e l.T w e n t y-s i x m a l e S D r a t s 畜 牧 兽 医 学 报5 4卷 w e r e s e l e c t e d,n i n e r a t s w e r e f e d w i t h b a s a l f e e d a s a c o n t r a l g r o u p,t h e r e m a i n i n g r a t s w e r e f e d w i t h h i g h-f a t f e e d f o r m o d e l i n g.A f t e r 4 w e e k s,t h e NA F L D m o d e l w a s s u c c e s s f u l l y e s t a b l i s h e d b y t h e c o n f i r m a t i o n o f p a t h o h i s t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n.T h e n,t h e r a t s w i t h s u c c e s s f u l m o d e l i n g w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o M o d e l g r o u p a n d D I Z E g r o u p(e i g h t r a t s p e r g r o u p),M o d e l g r o u p r a t s w e r e c o n t i n u e d t o b e f e d h i g h t-f a t f e e d a n d t r e a t e d w i t h 3 m L s a l i n e b y i n t r a g a s t r i c a d m i n i s t r a t i o n,D I Z E g r o u p r a t s w e r e t r e a t e d w i t h 1 5 m g(k gd)-1 D I Z E a s g a v a g e.T h e c o n t r a l g r o u p c o n t i n u e d t o b e f e d w i t h c o mm o n f e e d,a n d t h e s a m e a m o u n t o f n o r m a l s a l i n e w a s g a v a g e a d m i n i s t e r e d.I n t h e t e n t h w e e k,s e r u m a n d l i v e r s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d f r o m r a t s f o r t h e f o l l o w i n g t e s t s:1)T h e k i t w a s u s e d t o d e t e c t T G a n d T C c o n t e n t i n s e r u m;2)T h e c o n t e n t o f A n g I I a n d A n g 1-7 i n l i v e r t i s-s u e s w e r e d e t e r m i n e d b y E L I S A;3)W e s t e r n b l o t t i n g m e t h o d w a s u s e d t o t e s t t h e p r o t e i n e x-p r e s s i o n o f A C E 2,m i t o c h o n d r i a l f u s i o n p r o t e i n(M f n 1,O P A 1),f i s s i o n p r o t e i n(F i s 1,D r p 1)a n d u n c o u p l i n g p r o t e i n 1(U C P 1);4)R T-q P C R t o t e s t mR NA e x p r e s s i o n o f m i t o c h o n d r i a l b i o-g e n e s i s a n d m i t o c h o n d r i a l r e s p i r a t o r y c h a i n c o m p l e x-r e l a t e d g e n e s.R e s u l t s:1)T h e f a t d e p o s i-t i o n w a s f o u n d i n HE s t a i n i n g a f t e r 4 w e e k s o f h i g h-f a t f e e d i n g,o b v i o u s l y,w h i c h i n d i c a t e s t h a t t h e NA F L D m o d e l i n g o f r a t s w a s s u c c e s s f u l l y e s t a b l i s h e d;2)C o m p a r e d w i t h t h e C ON g r o u p,t h e s e r u m l e v e l s o f T G a n d T C i n t h e MO D g r o u p r a t s w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r(P0.0 5),w h i l e t h e D I Z E g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r(P0.0 5)c o m p a r e d w i t h t h e MO D g r o u p;3)C o m p a r e d w i t h C ON g r o u p,A C E 2 p r o t e i n e x p r e s s i o n l e v e l i n MO D g r o u p w a s e x t r e m e l y s i g n i f i-c a n t d e c r e a s e d(P0.0 1),a n d t h e r a t i o o f A n g/A n g 1-7 w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5),h o w e v e r,c o m p a r e d w i t h m o d e l g r o u p,t h e r e s u l t s w e r e o p p o s i t e i n D I Z E g r o u p(P0.0 1);4)T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f f u s i o n,f i s s i o n a n d U C P 1 p r o t e i n w e r e s i g n i f i c a n t l y o r e x-t r e m e l y s i g n i f i c a n t r e d u c e d i n m o d e l g r o u p c o m p a r e d t o t h e c o n t r o l g r o u p(P0.0 1 o r P0.0 5),D I Z E c o u l d u p r e g u l a t e t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f f u s i o n,f i s s i o n a n d U C P 1 p r o t e i n e x t r e m e-l y(P0.0 1);5)C o m p a r e d w i t h t h e C ON g r o u p,t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f mR NA i n m i t o c h o n-d r i a l b i o g e n e s i s a n d m i t o c h o n d r i a l r e s p i r a t o r y c h a i n c o m p l e x I a n d I I I g e n e s w e r e e x t r e m e l y s i g-n i f i c a n t d o w n r e g u l a t e d i n t h e MO D g r o u p(P0.0 1),n e v e r t h e l e s s,c o m p a r e d w i t h m o d e l g r o u p,D I Z E g r o u p s h o w s t h e o p p o s i t e r e s u l t s(P0.0 1 o r P0.0 5).T h e r e s u l t s d e m o n s t r a t e d t h a t D I Z E c o u l d a c t i v a t e A C E 2,t h e r e b y a l l e v i a t i n g t h e i n h i b i t o r y e f f e c t s o n m i t o c h o n d r i a l b i o-g e n e s i s,f u s i o n,f i s s i o n,a n d r e s p i r a t o r y c h a i n-r e l a t e d p a r a m e t e r s i n d u c e d b y a h i g h-f a t d i e t,u l t i-m a t e l y a c h i e v i n g t h e r a p e u t i c e f f e c t s f o r NA F L D.T h i s s t u d y e l u c i d a t e s a n e w i d e a o f D I Z E f o r t h e t r e a t m e n t o f n o n-a l c o h o l i c f a t t y l i v e r d i s e a s e,w h i c h m a n i f e s t s D I Z E h a s p o t e n t i a l r e s e a r c h v a l u e a s a n e w u s e o f a n o l d d r u g.K e y w o r d s:d i m i n a z e n e a c e t u r a t e(D I Z E);n o n-a l c o h o l i c f a t t y l i v e r d i s e a s e;a n g i o t e n s i n-c o n v e r-t i n g e n z y m e 2(A C E 2);m i t o c h o n d r i a;r a t*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:Z HANG Y u a n s h u,E-m a i l:z h a n g y u a n s h u n j a u.e d u.c n 非酒精性脂肪肝病(n o n-a l c o h o l i c f a t t y l i v e r d i s e a s e,NA F L D)是一种以肝脂肪显著蓄积为特征的临床病理综合征1。目前,NA F L D已成为全球高发病率和高死亡率的疾病之一,且仍然没有特效药,寻找 针对性强、副 作用小并且 疗效明显的 抗NA F L D药物意义重大。线粒体是细胞中能量产生和细胞有氧呼吸的主要场所。正常的肝细胞中有1 0 0 02 0 0 0个线粒体,除提供 能量外,还参 与肝细胞损 伤的病理过程2。线粒体功能障碍是H F D诱发NA F L D发生和发展的重要因素3。F o u r e t等4研究表明肝脂肪变性进展与线粒体结构和活性变化密切相关。ME E X等5研究发现,摄入饱和脂肪酸会降低线粒体呼吸传递链的效率,导致活性氧的产生和附近结6983 9期张亚峰等:二脒那秦激活A C E 2 对非酒精性脂肪肝病大鼠肝线粒体影响研究构的损伤,导致NA F L D。血管紧张素转换酶2(a n-g i o t e n s i n-c o n v e r t i n g e n z y m e 2,A C E 2)是肾素血管紧张素系统代偿通路的关键酶,可降解A n g产生A n g 1-7,并通过其M a s R发挥血管舒张、抗炎、抗纤维化、抗凋亡等生物学功能6。研究表明,A C E 2的产物A n g 1-7作用于M a s R通过影响肝细胞线粒体呼吸链功能进而改善NA F L D7。并有研究表明,在mT k 2 KO小 鼠 模 型 中,线 粒 体 功 能 障 碍 与A C E 2表 达 相 关,A C E 2在 线 粒 体 代 谢 中 发 挥 作用8。NA F L D发生时,A C E 2/A n g 1-7/M a s轴激活通过增强胰岛素信号传导,缓解内质网应激和降低R O S水平调节肝糖脂代谢9-1 1。M o r a e s 等1 2研 究 表 明 依 那 普 利 通 过 调 节A C E/A C E 2肝脏表达改善肝脂肪变性和代谢特征。因此,过表达A C E 2激活代偿通路可能是改善肝疾病的一种有效方法。二脒那秦(d i m i n a z e n e a c e t u-r a t e,D I Z E)是一种广泛使用且毒副作用小的抗寄生虫药,2 0 1 1年,K u l e m i n a和O s t r o v1 3发现D I Z E具有激活A C E 2的作用,目前已在多种疾病中开展大量研究。已经证实D I Z E能够激活A C E 2,继而减轻氧化应激,调节脂代谢,缓解NA F L D1 4,但其能否通过激活A C E 2影响线粒体结构和功能缓解肝脂肪蓄积,目前尚不清楚。并且,目前从D I Z E激活A C E 2影响线粒体结构功能方面研究NA F L D的报道较少,因此,从线 粒体结构功 能方面进行 了研究。本试验通过高脂饲喂S D大鼠建立NA F L D模型,从线粒体生物发生、融合分裂以及线粒体呼吸链复合物角度研究灌胃D I Z E后线粒体结构功能的变化,以进一步探讨D I Z E激活A C E 2对NA F L D大鼠线粒体结构和功能的影响,旨在为NA F L D的治疗提供新的理论依据。1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 试验动物 2 6只6周龄雄性S D大鼠,体质量(2 0 0 g 1 0 g),购自斯贝福生物技术有限公司,动物许可证号:S C X K(京)2 0 1 9-0 0 1 0。饲养于南京农业大学实验动物中心,环境温度2 2 2,湿度5 5%5%,1 2 h光照/黑暗循环。动物饲养及处理均遵循南京农业大学动物福利与伦理规范的要求。1.1.2 主要试剂与器材 二脒那秦(D I Z E)购自南京良纬生物科技有限公司;线粒体裂变1蛋白(F i s 1)抗体、线粒体融合蛋白 1(M f n 1)抗体均购自巴傲得生物公司;解偶联蛋白1(U C P 1)抗体购自万类生 物 公 司;-a c t i n 抗 体、视 神 经 萎 缩 蛋 白 1(O P A 1)抗体、动力蛋白相关蛋白 1(D r p 1)抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔 I g G 二抗均购自武汉爱博泰克生物公司;血管紧张素转换酶2(A C E 2)抗体购自A b c a m公司,所有抗体均为兔源。2S Y B R G r e e n P r o T a q H S P r e m i x购自艾科瑞生物工程有限公司;大鼠 A n g 1-7 和 A n g E L I S A 检测试剂盒购自南京奥青生物公司;T G、T C试剂盒购自南京建成生物公司;B C A试剂盒购自碧云天生物公司;E C L化学发光超敏显色试剂盒购自上海翌圣生物公司。P OWE R-P A C 3 0 0 电泳仪和P OWE R-P A C HC 转印仪(美国,B i o-R a d 公司);T a n o n-3 9 0 0全自动化学发光图像分析系统(上海,T a n o n科技有限公司);T e c a n S p a r k 多功能酶标仪(瑞士,T e c a n 公司);T A d v a n c e d 基 因 扩 增 仪(德 国,B i o m e t r a);L i g h t C y c l e r 9 6荧光定 量P C R仪(罗 氏,R o c h e公司);S e r v i c e b i o 高速组织研磨仪(武汉赛维尔生物科技有限公司)等。1.2 方法1.2.1 动物分组与处理 2 6只6周龄雄性S D大鼠,适应性 喂养1周,称重后随机 分为对照组(n=9,饲喂脂肪含量为1 2%的普通饲料)和高脂组(n=1 7,饲喂脂肪含量为4 5%的高脂饲料)。参照朱斌等1 5的造模方法,4周后,从两组大鼠中随机各取1只,迅速处死后取肝脏观察肝形态并做组织病理学切片确认NA F L D模型成功建立。然后将高脂组1 6只大鼠重新分为2组,具体分组和处理见表1。试验期间观察大鼠的精神状态、毛发光泽和排便情况,每天下午1 4:0 0按时按顺序灌胃。试验周期为7 0 d。表1 动物分组及处理(n=8)T a b l e 1 G r o u p i n g a n d t r e a t m e n t o f a n i m a l s(n=8)组别G r o u p处理T r e a t m e n t对照组 C o n t r o l g r o u p饲喂普通饲料+3 m L生理盐水灌胃模型组 M o d e l g r o u p饲喂高脂饲料+3 m L生理盐水灌胃二脒那秦组 D I Z E g r o u p饲喂高脂饲料+1 5 m g(k gd)-1 D I Z E(溶于3 m L生理盐水)灌胃7983畜 牧 兽 医 学 报5 4卷 1.2.2 样品采集 大鼠饲养至第1 0周末,禁食1 2 h后,称重并剖杀大鼠,腹主动脉采血,3 0 0 0 rm i n-1离心1 0 m i n,收集血清,于-2 0 保存。采集肝脏组织,称重后取相同部位组织块于4%多聚甲醛中固定,其余肝组织置于-8 0 保存。1.3 肝病理组织学观察大鼠饲喂高脂饮食4周后,随机选择对照组和高脂组大鼠各1只,麻醉处死采集肝脏组织,取相同部位肝组织于4%多聚甲醛中固定2 4 h,石蜡切片送南京武汉赛维尔生物公司进行制作。光学显微镜观察肝组织形态学变化。1.4 血清中T G、T C含量的测定测定血清中总胆固醇(T C)及三酰甘油(T G)的含量,具体步骤按照试剂盒说明书进行操作。1.5 肝中A n g 和 A n g 1-7含量的测定E L I S A 法测定肝组织中A n g和 A n g 1-7含量,具体操作根据的 E L I S A 试剂盒说明书进行。1.6 肝线粒体相关基因m R N A表达的检测1.6.1 引物设计 大鼠过氧化物酶体增殖物受体共激活因子-1(P G C-1)、核呼吸因子 1(N r f 1)、线粒体转录因子(T f a m)、泛醌氧化还原酶亚基B 8(N DU F B 8;c o m p l e)、琥珀酸脱氢 酶B(S DH B;c o m p l e x)、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白2(UQ C R C 2;c o m p l e x)及内参G A P DH的引物序列从N C B I网 站 查 阅,根 据 引 物 设 计 原 则,利 用P r i m e r P r e m i e r 5.0设计引物,引物送由南京擎科生物公司合成,各基因的引物序列见表2。表2 基因引物序列及参数T a b l e 2 S e q u e n c e a n d p a r a m e t e r s o f g e n e p r i m e r s基因G e n e基因登录号A c c e s s i o n n u m b e r引物序列(5 3)P r i m e r s e q u e n c e产物大小/b pP r o d u c t s i z eG A PDHNM_0 1 7 0 0 8.4F-AG G T T G T C T C C T G T G A C T T C AAR-C T G T T G C T G TA G C C A T A T T C A T T G1 2 4U Q C R C2 NM_0 0 1 0 0 6 9 7 0.1F-G C T G C G G C T G G AG A T G T TA TR-G G T G G C A T G TAA GA G C C T G T1 9 4ND U F B8 NM_0 0 1 1 0 6 3 6 0.3F-T G G G G T GAA C C G A TA C A C T GR-AG G C T G G TA G GAA G G GAA C A1 6 5S DHB NM_0 0 1 1 0 0 5 3 9.1F-G C A G G C T TA T C G C T G GA T GAR-C T G GA T T C A GA C C C T T G G G G1 4 0P G C-1 NM_0 3 1 3 4 7.1F-T G GA G T G A C A T AG AG T G T G C T GR-G T GA G GA C C G C TA G C AAG T T2 3 9N r f1 NM_0 0 1 1 0 0 7 0 8.1F-T G G C T G AA G C C A C C T TA C AAR-A T GAA C T C C A T C T G G G C C A T T1 1 3T f a m NM_0 3 1 3 2 6.2F-G G A T G A G T C AG C T C AG G G G AR-A C G G A T G A GA T C A C T T C G C C1 7 51.6.2 肝组织R NA的提取和c D NA的合成 称取8 0 m g左 右 大 鼠 肝 组 织,T r i z o l法 提 取 总R NA,用酶标仪测定R NA的浓度与纯度,D E P C水调整R NA浓度 为 5 0 0 n gL-1,反 转 录 体 系 为2 0 L(E v o M-ML V R T P r e m i x 4 L,总R NA 2 L,R N a s e-F r e e w a t e r 1 4 L),反 转 录 程 序 为3 7 1 5 m i n,8 5 5 s,4 1 0 m i n。反转录得到的c D NA于-2 0 保存。1.6.3 R e a l-t i m e P C R 采 用 荧 光 定 量P C R S Y B R G r e e n染料法对相关基因的mR NA表达进行相对定量分析,反应体系为1 0 L(R N a s e-F r e e w a t e r 3.6 L,1 0 m o lL-1上下游引物各0.2 L,2 X S Y B R G r e e n P r o T a q H S P r e m i x 5 L,c D NA模板1 L),两步法P C R反应程序:9 5 预变性3 0 s;9 5 变性5 s,6 0 退火3 0 s,4 0个循环。以G A P DH为内参基因,计算目的基因相对表达量,结果用2-C t表示。1.7 W e s t e r n b l o t检测相关蛋白表达 W e s t e r n b l o t检测参照W a n g等1 6的方法稍作改进:称取约3 5 m g肝组织剪碎加入5 0 0 L裂解液(R I P A:P M S F=1 0 0 1)匀浆,4,1 2 0 0 0 rm i n-1,离心1 0 m i n取上清,获得总蛋白。B C A法测定蛋白浓度,并统一稀释为5 gL-1;蛋白上样量7 L经 S D S-P AG E电泳后湿转法(1 0 0 V,9 0 m i n)转印于P V D F膜上,取出P V D F膜置于5%脱脂奶粉中封闭2 h,随后加入-a c t i n(1 1 0 0 0 0稀释),A C E 2 8983 9期张亚峰等:二脒那秦激活A C E 2 对非酒精性脂肪肝病大鼠肝线粒体影响研究(1 3 0 0 0稀 释),U C P 1(1 1 5 0 0稀 释),M f n 1、O P A 1、F i s 1、D r p 1(皆为1 1 0 0 0稀释),在4 孵育过夜,洗膜后加入山羊抗兔 I g G 二抗(1 1 0 0 0 0稀释)室温孵育2 h。用全自动发光成像系统显影,拍照保存,I m a g e J软件分析条带灰度值,以-a c t i n为内参计算目的蛋白的相对表达量。1.8 数据统计与分析使用S P S S 2 6.0软件分析数据,采用单因素方差分析(O n e-w a y ANOVA)。结果以“平均值标准误(x-sx-)”的形式表示。P0.0 5,表示差异显著,P0.0 1,表示差异极显著。G r a p h P a d P r i s m 8.0进行作图。2 结 果2.1 N A F L D模型的建立结果见图1,与对照组相比,大鼠饲喂高脂饲料4周后肝组织病理学切片出现明显脂肪沉积和脂肪变性(红色箭头),与朱斌等1 5的研究结果一致,证实NA F L D模型建立成功,可以开展后续试验。图1 饲喂高脂饲料4周后大鼠肝组织病理学变化(H E)F i g.1 H i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s i n r a t l i v e r a f t e r 4 w e e k s o f f e e d i n g h i g h-f a t f e e d(H e m a t o x y l i n-e o s i n s t a i n i n g)2.2 D I Z E对 N A F L D大鼠T G、T C含量的影响如表3所示,与 C ON 组相比,MO D 组大鼠血清中的T G、T C含量均显著上升(P0.0 5)。与 MO D 组相比,D I Z E组大鼠血清中的T G、T C含量均显著下降(P0.0 5)。说明D I Z E可以显著抑制高脂饮食引起的血脂含量增加,缓解肝脂代谢紊乱。2.3 D I Z E对N A F L D大鼠A C E 2蛋白表达和A n g、A n g 1-7含量的影响 结果见图2,与C ON组相比,MO D组A C E 2蛋白表达极显著降低(P0.0 1),与MO D组相比,D I Z E组A C E 2蛋白表达极显著升高(P0.0 1);与C ON组相比,MO D组A n g 含量极显著升高(P0.0 1),A n g 1-7含量显著升高(P0.0 5),A n g/A n g 1-7比值显著升高(P0.0 5),与MO D组相比,D I Z E组A n g含量极显著降低(P0.0 1),表3 D I Z E对N A F L D大鼠血清T G、T C含量的影响(x-sx-,n=8)T a b l e 3 E f f e c t s o f D I Z E o n s e r u m T G a n d T C c o n t e n t s i n N A F L D r a t s(x-sx-,n=8)mm o lL-1组别G r o u p三酰甘油T G总胆固醇T C对照组 C ON0.6 10.0 61.7 00.1 1模型组 MO D1.4 00.1 1*2.9 60.1 4*二脒那秦组 D I Z E0.6 40.0 7#1.7 80.1 0#与对照组相比,*,表示差异显著(P0.0 5),*表示差异极显著(P0.0 1);与 模 型 组 相 比,#表 示 差 异 显 著(P0.0 5),#表示差异极显著(P0.0 1)C o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p,*,m e a n s s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P0.0 5),*m e a n s e x t r e m e l