地下水中菌落总数测量不确定度的评定.pdf
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1、广 东 化 工 2023 年 第 16 期 182 第 50 卷 总第 498 期 地下水中菌落总数测量不确定度的评定地下水中菌落总数测量不确定度的评定 蔡秋彤(中科广化检测技术服务(深圳)有限公司,广东 深圳 518000)摘 要目的:对地下水中菌落总数的测量不确定度进行分析评定。方法:根据HJ 1000-2018 水质 细菌总数的测定 平皿计数法对地下水中菌落总数进行平板计数法的检测,按照JJF 1059.1-2012 测量不确定度评定与表示中A类不确定度和B类不确定度进行菌落总数的评定。结果:某环境园地下水的扩展不确定度为0.0312,在95%置信区间内,菌落总数报告值的范围为2.310
2、22.6102 CFU/mL。结论:重复性引入的不确定度对于样品结果的影响大于样品移取和样品稀释过程引入的不确定度,但进行菌落总数不确定度评定时,应该全方面考虑各过程引入的不确定度。关键词地下水;菌落总数;不确定度;平皿计数法;重复性 中图分类号TQ 文献标识码A 文章编号1007-1865(2023)16-0182-03 Assessment of Uncertainty in the Total Number of Colonies in Groundwater Cai Qiutong(CAS Testing Technical Services(Shenzhen)Co.,Ltd.,She
3、nzhen 518000,China)Abstract:Objective:To analyze and evaluate the measurement uncertainty of the total number of colonies in groundwater.Methods:The total number of colonies in groundwater was detected by plate counting method according to Determination of total number of bacteria in water quality,p
4、late count method(HJ 1000-2018),and the total number of colonies was evaluated according to the Type A and Type B uncertainties were evaluated by Evaluation and Expression of Uncertainties in Measurement(JJF 1059.1-2012).Results:The extended uncertainty of groundwater in an environmental park was 0.
5、0312,and the reported value of total colonies ranged from 2.3102 to 2.6102 CFU/mL within the 95%confidence interval.Conclusion:The uncertainty of reproducible introduction has a greater influence on sample results than that of sample pipetting and sample dilution,but the uncertainty of total colony
6、count should be evaluated in all aspects.Keywords:groudwater;the total number of colonies;uncertainty;plate count method;repeatability 由于水资源的缺乏,地下水资源逐渐成为人们生活生产的重要水源来源。在改革开放的初期,我国多地为了经济的发展而以破坏环境为代价,出现了当今生态环境被破坏的各种问题。近年来,对于地下水污染的监测工作越来越收到重视,而监测的方式方法多种多样。地下水的污染不仅会给人民健康带来隐患,而且会影响生态环境,因此,要制定合理的地下水监测方案,科学
7、有效的开发并治理好地下水资源,保护人民群众的健康生活,进一步保护生态环境5。地下水的污染来源非常广泛,主要有工业废水、城市污水、自然沉降物等等8,而其中的细菌会直接对人体健康带来危害,对周围的环境也会带来不小的影响,这说明了对地下水的监测很有必要。要想实现水资源的可持续利用,地下水监测工作势在必行。在地下水的检测中,菌落总数检测是常规检测的项目之一,但菌落总数检测过程中,会有很多因素对检测结果带来影响,如样品的取样过程,稀释液的移取过程,培养基的配制过程,培养箱设定的温度,培养箱设定的时间,检测人员的操作技能等等。微生物检测不同于通常的化学领域检测,它的结果离散性会相对更大,因此,测量不确定度
8、在确保微生物检测质量中是很重要的,能最大程度的避免实验误差,提高微生物检测结果的质量。监测地下水中微生物也有助于环境的生物修复工程,对治理地下水污染大有益处。本文根据 HJ 1000-2018 水质 细菌总数的测定 平皿计数法 的行业标准采用平皿计数法的方法对某环境园内的地下水进行菌落总数的检测,并采用JJF 1059.1-2012 测量不确定度评定与表示 中测量不确定度对菌落总数的测量不确定度进行评定。其中,测量不确定度主要分为测量不确定度 A 类评定和测量不确定度 B 类评定,而本研究中将对 A 类和 B 类测量不确定度分别进行评定,最终合成一个不确定度。1 测量仪器与方法测量仪器与方法
9、1.1 仪器 高压灭菌锅(江阴滨江 LS-35LD);生物安全柜(上海力辰邦 西BHC-1300IIA2);超 净 工 作 台(上 海 力 辰 邦 西 SW-CJ-2FD);生化培养箱(上海博迅 SPX-150B-Z)36 1;菌落计数器(江苏新康 XK97-A);百分之一电子天平;酸度计;微电脑电陶炉。1.2 材料 1.2.1 试验样品 某环境园地下水 1 份(1000 mL)。1.2.2 试验耗材 1 mL 的灭菌试管和 10 mL 的灭菌试管;一次性无菌培养皿;刻度吸管;无菌试管。1.2.3 试验用试剂及培养基:无菌生理盐水;商业脱水营养琼脂培养基(北京陆桥)。1.3 试验方法:水质 细
10、菌总数的测定 平皿计数法HJ 1000-2018。2 测量步骤测量步骤 2.1 培养基及试剂的制备 将商用脱水营养琼脂培养基按厂家说明进行配制。用干净的药匙在百分之一电子天平上称取 33 g 的营养琼脂培养基于1000 mL 水中,用玻璃棒搅拌并在微电脑电陶炉上对其进行加热,使其溶解,分装至锥形瓶中,用酸度计测量此时培养基的pH 值,121 高压灭菌 15 分钟后,再次测量培养基的 pH 值。若灭菌后的培养基 pH 值不在 7.17.5 的范围内时,用过滤除菌后的盐酸或氢氧化钠调节培养基的 pH 值。将灭菌后的营养琼脂培养基放入恒温电热水浴锅中保温,保温温度为 45 左右,避免营养琼脂培养基灭
11、菌冷却后凝固。配制0.85%的生理盐水,用于样品的稀释。用干净的药匙在百分之一电子天平上称取4.25 g的氯化钠固体颗粒于500 mL水中,用玻璃棒搅拌至溶解后,分装于锥形瓶中。121 高压灭菌 15 分钟后,待用。2.2 无菌耗材准备 将空试管用橡皮塞塞好,准备若干支 1 mL 和 10 mL 的刻度吸管,空试管和刻度吸管分别用报纸包紧后,放于高压灭菌锅内,121 高压灭菌 15 分钟后,待灭菌锅压力降至 0,温度收稿日期 2023-02-14 作者简介 蔡秋彤(1996-),女,广东深圳人,助理工程师,硕士,主要研究方向为微生物检测。2023 年 第 16 期 广 东 化 工 第 50 卷
12、 总第 498 期 183 降至 70 以下后,取出待用。2.3 样品稀释 将样品振摇均匀,使样品内可能存在的菌落分散开来,让样品能的菌落尽量分散均匀,估计样品的受污染程度,确定样品的稀释倍数。用无菌刻度吸管吸取 1 mL 振摇均匀的样品于9 mL 装有无菌水的灭菌试管中,混匀为 110 的稀释样品。吸取 110 的稀释样品 1 mL 注入盛有 9 mL 装有无菌水的灭菌试管中,混匀成 1100 的稀释样品。按上述方法依次对样品进行 10 倍系列的稀释。2.4 样品接种 选取适宜稀释梯度的稀释样品,用无菌刻度吸管吸取 1 mL 充分混匀的样品,注入无菌培养皿中,倾注 15 mL 至 20 mL
13、已融化并冷却到 45 左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇培养皿,使水样与培养基充分混匀,旋摇培养皿时,避免培养基及样品摇到培养皿盖上。同一稀释倍数的样品,倾注两块无菌培养皿。待冷却凝固后翻转平皿,使底面向上,置于 36 1 培养箱内培养至 48 h 后,取出平皿进行菌落计数。同时用无菌生理盐水做空白对照。2.5 样品培养 等待平皿内的营养琼脂冷却凝固后,为避免培养皿内样品受到污染,将平皿倒置放于 36 1 的生化培养箱中培养48 h2 h。2.6 菌落计数 选取菌落数在 30300 CFU/皿之间的平板进行菌落计数,并记录对应的稀释倍数。低于 30 CFU/皿的平板,记录平板上的具体菌落数,大于
14、 300 CFU/皿的平板可记录为多不可计。若同一稀释度中,有一个平板有较大的片状菌落生长时,则不宜计数,而应采用无较大片状的平板作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平板的一半,而另一半平板中的菌落分布均匀时,可记录半个平板的菌落数后乘以 2,表示一个平板的菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,将每条单链当做一个菌落进行计数。空白对照的平板上应无菌落生长,否则此次试验结果无效。2.7 菌落总数报告 菌落总数小于 100 CFU/皿时,按“四舍五入”的原则进行修约,以整数进行报告。若菌落总数大于或等于 100 CFU/皿时,第三位按用“四舍五入”的原则进行修约,保留两位有效数字,后面
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