盐酸莫西沙星氯化钠注射液无菌检查方法优化.pdf

明这两个交互作用较弱对分离度影响较小有机相比例和 值、有机相比例和缓冲盐比例的交互作用的响应面均显示有机相单侧坡度较陡说明的有机相比例对分离度影响较大交互作用较弱图 各因素交互作用的响应面和等高线图 参数优化:通过软件分析响应面法优化的分离度最佳条件以分离度 为目标作条件优化求出最佳色谱条件为 值 缓冲盐浓度为 有机相比例为 此时分离度为 鉴于 值、缓冲盐浓度影响不显著将缓冲盐浓度取下限(对系统更为安全)值取上限(色谱柱的 更为耐受)即缓冲盐浓度 值为 此时求得有机相比例为 分离度为 分离度可以接受 以此条件试验结果分离度为 图 色谱条件优化后的色谱图 讨论 开发方法以第、个组分的分离度作为评价指标同时考虑了主峰理论板数及对称性即第一个主峰理论板数符合原系统适用性要求峰对称性符合相关指导原则规定 新色谱条件在系统适用性符合要求(峰不变形柱效不下降柱压不增高)的前提下色谱柱使用寿命可到 针以上 相关方法学验证情况:专属性符合要求线性为 线性回归方程为 相关系数 为 平均回收率为 (为 )重复性的 为 均符合相关指导原则要求 响应面的统计结果显示有机相比例对分离度影响极为显著而因素之间的交互作用并不显著参考文献宝利化(南京)制药有限公司 甲磺酸二氢麦角碱缓释片说明书 国家食品药品监督管理局 甲磺酸二氢麦角碱缓释片的质量标准 何银舟 卡波姆的特性及其在药剂学中应用的研究进展 临床合理用药():李宴杨延莉等 卡波姆及其在药剂学上的应用 解放军药学学报():作者简介:蓝福胜男()学历:硕士 职称:主管药师 主要从事药品、医疗器械和化妆品的微生物检测与研究通讯作者:林玉双盐酸莫西沙星氯化钠注射液无菌检查方法优化蓝福胜郑 挺王晓英程 琳林玉双(福建省食品药品质量检验研究院福建福州 福建省产品质量检验研究院福建福州)摘要:目的 优化盐酸莫西沙星氯化钠注射液的无菌检查方法方法 按照中华人民共和国药典 年版无菌检查方法适用性试验相关要求采用 法测定混合纤维素()膜、尼龙()膜和聚偏二氟乙烯()膜过滤后膜上样品的残留量确定样品吸附性小的滤膜采用 法测定 种不同冲洗液(无菌蛋白胨水溶液、无菌氯化钠蛋白胨缓冲液、无菌氯化钠溶液及含卵磷脂和聚山梨酯 组分的 无菌氯化钠溶液)分别冲洗 、后膜上样品的残留量确定适宜的冲洗液结果 药典规定的 种试验菌均可在 内正常生长结论 采用薄膜过滤法选择滤膜材质为 或 的集菌培养器在冲洗液中添加 卵磷脂和 聚山梨酯 能减少海峡药学 年 第 卷 第 期冲洗液用量且降低因冲洗对污染菌造成的机械损伤并缩短检验耗时和节约检验成本关键词:莫西沙星无菌检查薄膜过滤方法适用性试验中图分类号:文献标识码:文章编号:()():()()():莫西沙星是德国 公司研制的第四代喹诺酮类抗菌药物 与其它喹诺酮类抗生素具有相同的作用机制即抑制细菌 复制、转录、修复和重组所需的拓扑异构酶和拓扑异构酶 相比前三代喹诺酮类药物莫西沙星具有更强的抗厌氧活性和抗革兰阳性菌活性且耐药性更低 临床上莫西沙星主要用于治疗慢性支气管炎急性发作、急性细菌性鼻窦炎、社区获得性肺炎复杂性腹腔内感染及皮肤和皮肤组织感染等具有低毒、抗菌谱广、抗菌活性强、不易产生耐药性、无明显光毒性等众多优点 目前在国内上市的剂型有莫西沙星片、胶囊和注射液 原研品种为德国 公司盐酸莫西沙星氯化钠注射液(:莫西沙星 氯化钠 )于 年 月在中国境内获批上市 仿制药有大输液(:莫西沙星 氯化钠 )和小针剂(:莫西沙星 )种规格无菌检查是确保无菌制剂用药安全的一项重要检查项目对于防止问题产品流向使用环节具有重要意义 目前公开报道的盐酸莫西沙星氯化钠注射液(:莫西沙星 氯化钠 )无菌检查方法按照 版中国药典要求建立所用培养体系与 版中国药典要求不一致另外冲洗液用量普遍在 以上有的甚至达到/膜存在检验耗时长、成本高且随着冲洗量增加滤膜上微生物受损伤的风险加大容易造成漏检给患者用药安全带来隐患本研究对混合纤维素()、尼龙()和聚偏二氟乙烯()种不同材质的滤膜过滤后滤膜上莫西沙星的吸附量以及 种不同类型冲洗液对滤膜上莫西沙星的冲洗效果进行考察最终选择适宜的滤膜和冲洗液按照中华人民共和国药典 年版要求对一国内企业生产的盐酸莫西沙星氯化钠注射液的无菌检查方法(冲洗液为含 硫酸镁的 蛋白胨水溶液、冲洗量为 并在培养基中添加 浓度为 的 溶液)进行优化以期减少冲洗液用量 材料 试药 盐酸莫西沙星氯化钠注射液(:莫西沙星 氯化钠 )盐酸莫西沙星对照品(批号:)培养基硫乙醇酸盐流体培养基(批号:)、胰酪大豆胨液体培养基(批号:)、无菌蛋白胨水溶液(批号:)、无菌氯化钠蛋白胨缓冲液(批号:)均为北京三药科技开发有限公司生产使用前经无菌性和灵敏度检查结果均符合规定大豆卵磷脂(批号:)为广东环凯科技有限公司生产聚山梨酯、氯化钠、硫酸镁均为国产分析纯 菌 种 大 肠 埃 希 菌()()生孢梭菌()()枯草芽孢杆菌()()金黄色葡萄球菌()()白色念珠菌()()黑曲霉()()以上菌株均购自中国食品药品检定研究院医学微生物菌种保藏中心 滤膜 混合纤维素膜()、尼龙膜()及相应集菌培养器均为浙江泰林生物科技有限公司生产聚偏二氟乙烯 膜()及集菌培养器为 生产 仪器()高压真空脉动灭菌锅()生物安全柜()细菌培养箱()真菌培养箱()智能集菌仪(浙江泰林生物科技有限公司)方法 滤膜上样品吸附量测定选择、和 种常见材质的滤膜采用高效液相色谱()法测定滤膜过滤样品后的残留量比较不同材质滤膜对莫西沙星的吸附性差异 测试色谱条件:色谱柱:资生堂 (流动相:磷酸盐缓冲液(取四丁基硫酸氢铵 与磷酸二氢钾 加水 使溶解并用氢氧化钾试液调节 值至 )乙腈()稀释剂:水磷酸()流速:检测波长:柱温:进样量:溶液制备:莫西沙星对照品溶液:精密称取莫西沙星对照品约 转移至 容量瓶中加稀释剂超声溶解并稀释至刻度 精密量取对照品溶液适量至适宜的容量瓶中制成浓度依次为 、的线性溶液供试液:分别取盐酸莫西沙星氯化钠注射液 、过滤滤膜用磷酸溶液将滤膜上残留的莫西沙星样品超声洗脱 不断振摇使滤膜充分浸润然后将溶液转移至 容量瓶中摇匀定容后取上层溶液作为供试液 莫西沙星滤膜吸附量测定:在“”色谱条件下取空白溶液注入色谱仪确定空白溶剂无干扰 分别取对照品溶液和供试品溶液各 分别注入液相色谱仪按照外标法以峰面积计算莫西沙星的残留量 种不同冲洗液冲洗效果比较 以“”确定的吸附性最小的滤膜过滤样品每膜过滤样品量为 用 无菌蛋白胨水溶液()、无菌氯化钠蛋白胨缓冲液()、无菌氯化钠溶液()或用卵磷脂和聚山梨酯 优化后的溶液()冲洗滤膜每一种冲洗液分别冲洗 次/膜或 次/膜(次 )后采用 法(同 )测定滤膜上样品的残留量 无菌检查方法适用性试验按照中华人民共和国药典 年版无菌检查方法适用性试验要求开展试验 试验用盐酸莫西沙星氯化钠注射液规格为 /瓶取 瓶全量过滤样品后每种培养基接种的样品量为 各分 个滤筒滤过每个滤筒过滤样品量约 故每个滤筒以 样品作为最大方法适用性试验样品量 选择最适宜冲洗液进行冲洗 次 最后一次加入 含活菌数不大于 的试验菌后滤过分别注入 的胰酪大豆胨液体培养基或硫乙醇酸盐流体培养基至各滤筒并在培养基中加入 的 溶液()结果 滤膜上样品吸附量测定 种滤膜对莫西沙星吸附检测结果(见表)结果显示:种滤膜对莫西沙星的吸附程度存在一定差异其中以 材质的滤膜吸附量最小次之 最大表 种不同滤膜对莫西沙星吸附试验测试结果样品过滤量()滤膜材质厂家滤膜残留(/膜)泰林 泰林 泰林 泰林 泰林 泰林 种不同冲洗液冲洗效果比较不同冲洗液对滤膜上莫西沙星冲洗试验结果(见表)结果显示:滤膜上吸附的莫西沙星经 无菌蛋白胨水溶液、无菌氯化钠蛋白胨缓冲液或 无菌氯化钠溶液冲洗 次或 次(次)后滤膜上残留的莫西沙星减少 以上 经添加 卵磷脂和 聚山梨酯 的 氯化钠溶液冲洗 后滤膜上莫西沙星残留量显著降低由冲洗前 /膜下降至 /膜减少率高达 且相比其它 种冲洗液具有更优的冲洗效果表 种不同冲洗液冲洗滤膜后莫西沙星残留量测试结果样品过滤量()滤膜材质冲洗液冲洗次数滤膜残留(/膜)莫西沙星减少率()试验菌生长结果 选择含 卵磷脂 聚山梨酯 的 无菌氯化钠溶液按 、个条件冲洗不同冲洗量对试验菌生长的影响如表 所示 结果表明本品对枯草芽孢杆菌最敏感且冲洗量达到 /膜时各试验菌在规定时间内均生长良好 若以枯草芽孢杆菌为试验菌并以 材质滤膜集菌培养器过滤样品且冲洗液和冲洗量不变在培养至第 后枯草芽孢杆菌生长良好 表明上述方法同样适用于 材质滤膜若以 材质滤膜集菌培养器过滤样品当冲洗量为 /膜时枯草芽孢杆菌无法生长若每膜以 无菌氯化钠溶液为冲洗液冲洗 不管是 、或 枯草芽孢杆菌在规定时间内均无法生长 这与 材质滤膜对莫西沙星具有较强吸附性及不同冲洗液冲洗滤膜后莫西沙星残留量测试结果具有一定的相关性海峡药学 年 第 卷 第 期表 不同冲洗量对试验菌生长的影响试验菌滤膜材质冲洗量()试验菌培养生长时间()金黄色葡萄球菌大肠埃希菌生孢梭菌枯草芽孢杆菌 内无菌生长黑曲霉白色念珠菌表 不同滤膜或冲洗液对试验菌生长的影响试验菌滤膜材质冲洗液冲洗量()试验菌培养生长时间()内无菌生长 内无菌生长枯草芽孢杆菌 内无菌生长 内无菌生长 讨论本研究采用、及 种不同材质的滤膜过滤不同体积的盐酸莫西沙星氯化钠注射液并以 法测定滤膜上样品的残留量 虽然样品过滤体积不同但是 组试验结果均为 与马仕洪等关于不同材质滤膜对泊沙康唑吸附试验测试结果一致 虽然 材质滤膜上莫西沙星的吸附量高于 但优化后方法仍适用 材质滤膜集菌培养器 卵磷脂和聚山梨酯 作为中国药典推荐使用的常见干扰物的中和剂有助于洗脱滤膜上的莫西沙星在减少冲洗液用量中起到了重要作用 试验发现本品对枯草芽孢杆菌最敏感以枯草芽孢杆菌为阳性对照菌更为科学 而原方法以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌有可能是受中国药典四部通则 中“无抑菌作用及抗革兰阳性为主的供试品以金黄色葡萄球菌为对照菌”的影响由此说明部分生产企业对药典相关规定的理解并不是很透彻仍需持续对药典的正确实施进行宣贯 加大冲洗量虽可逐步消除抑菌物质但对滤膜的通透性和样品中污染的微生物存在一定伤害将增加污染菌漏检的风险 为此中国药典也明确规定每张滤膜的总冲洗量一般不超过 最高不得超过 以避免滤膜上的微生物损伤 因本品为大输液且具有很强抑菌性笔者认为在过滤过程中样品本身对滤膜上可能截留的微生物具有一定的损伤 若取 瓶样品分两个滤筒滤过那么每张滤膜将过滤样品量约 加上使用的冲洗液后对滤膜上微生物的损伤将进一步加大 因此本研究除对冲洗液进行优化外还对样品进行了分膜过滤目的是为了确保全量过滤样品时能够减少样品过滤对滤膜上微生物的损伤保证检验结果的准确性 结论盐酸莫西沙星氯化钠注射液(:莫西沙星 氯化钠 )采用薄膜过滤法进行无菌检查通过选择 或 材质滤膜的集菌培养器过滤样品并在 氯化钠溶液中添加 卵磷脂和 聚山梨酯 对冲洗液进行优化结果表明优化后冲洗液可以提高滤膜上样品的洗脱效果冲洗液用量由原 /膜减少至 /膜可缩短检验耗时及降低检验成本参考文献卢定强王维胞凌岫泉等 新一代喹诺酮类盐酸莫西沙星的合成及应用研究进展 现代化工():梁亚飞 喹诺酮类抗菌药物的临床应用研究进展 中国现代医生():聂鲁刘连奇周辛波 喹诺酮类抗菌药物发展历程与临床应用 临床药物治疗杂志 ():国家药典委员会编 中国药典(年版四部)北京:中国医药科技出版社通则 杨晓莉李辉赵丽 盐酸莫西沙星氯化钠注射液无菌检查验证方法研究 生物技术世界 ():钱斐李奇云王威 盐酸莫西沙星氯化钠注射液无菌检查法的验证 实用临床医药杂质():马仕洪肖璜袁宇等 泊沙康唑注射液无菌检查方法的建立 药物分析杂志():欢迎投稿海峡药学投稿系统网址:.联系电话: