《工具酶的发现和基因工程的诞生》教案1.doc

《工具酶的发现和基因工程的诞生》教案
【教学目标】
知识与能力方面：
1．简述基础理论研究和技术进步催生了基因工程。
2．简述基因工程的原理和技术。
过程与方法方面：
1.运用所学的DNA重组技术的知识，模拟制作重组DNA模型。
2．运用基因工程的原理，提出解决某一实际问题的方案。
情感态度、价值观方面：关注基因工程的发展，体会S、T、S三者之间的关系。
【教学重点】
DNA重组技术所需要3种基本工具的作用。
【教学难点】
基因工程载体需要具备的条件。
【教学过程】
(导入新课)1973年转基因微生物──转基因大肠杆菌问世；1980年第一个转基因动物──转基因小鼠诞生；1983年第一例转基因植物──转基因烟草出现，实现了一种生物的某些基因在另一种生物中的表达。
基因工程的理论基础和技术保障分别是什么？
理论基础：DNA双螺旋结构的发现，使科学家发现所有生物的DNA都是由四种脱氧核苷酸聚合而成的，为来自异种的DNA拼接提供了结构基础；中心法则揭示了生物的遗传信息传递的过程，而且所有的生物共用一套密码子，这使基因在异种生物细胞内表达成为了可能。
既然科学家意识到了上述可能之后，就开始探索转基因的技术手段，此时，几种基因工程的工具的发现，为使这项技术最终成功了。
基因工程的技术保障：限制性核酸内切酶，DNA连接酶，运载体。
(提出问题)限制性核酸内切酶是从什么生物体内发现的？它的作用有什么特点？限制酶切开的DNA末端有什么特点？
(学生活动)阅读课文，总结限制性内切酶的作用特点和作用结果。
(总结归纳)
科学家的基本意向也和同学们一样。单细胞生物比多细胞生物更容易受到外源DNA的侵入。在长期的进化过程中，使其必须有处理外源DNA的酶。科学家们经过不懈的努力，终于从原核生物中分离纯化出这种酶，叫做限制酶。迄今已从近300种微生物中分离出4000种限制酶。这种酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
不同的限制酶识别的特定核苷酸序列也不同，这样就为我们切割DNA提供了多种特定的“手术刀”。但它们切割DNA后形成的末端有两种可能：一种形成黏性末端，一种形成平末端。
限制酶在它识别序列的中心位置两侧将DNA两条单链分割开，就形成黏性末端，而从识别序列的中心位置切开就产生平末端。
(提出问题)DNA连接酶怎样将两个DNA片段连接？它连接的是什么化学键？它的作用与DNA聚合酶有什么不同？
(学生活动)阅读课文，回答上述问题。
(总结归纳)
DNA连接酶能够将具有末端碱基互补的(即具有黏性末端)两个片段连接起来，拼接的位置是由限制酶断开的磷酸二酯键。
DNA连接酶是将双链的DNA片段连接起来，就是说DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来。相同之处都是通过形成磷酸二酯键来连接的。
(提出问题)如何将重组DNA导入受体细胞中并稳定存在和表达？
单纯的DNA片段是很难导入受体细胞的，有时即使进入受体细胞也不能稳定存在和表达，所以我们将切割下来的目的基因导入受体细胞就需要有一个“分子运输车”帮助。不是任何的“分子运输车”都可以用来作目的基因进入受体细胞的载体的。其中的理由要从实际情况出发考虑才能清楚。下面老师提出四个问题供大家思考。
1.假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？
2.作为载体没有切割位点将怎样？
3.目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？
4.如果载体对受体细胞有害将怎样？不能分离会怎样？
(学生活动)根据上述问题，阅读课文，寻找答案。
(总结归纳)
上述问题答案：
1.导入受体细胞的目的基因不能复制，将在细胞增殖中丢失。
2.载体没有切割位点，外源的目的基因不可能插入。
3.如果载体上有遗传标记基因，这样，在载体进入受体细胞后，就可通过标记基因的表达来检测。
4.载体对受体有害，将影响受体细胞新陈代谢，进而使转入的目的基因也无立足之地。载体不能分离，就不能获得更多带有目的基因的载体。
所以充当基因进入受体细胞载体的必要条件：
1. 能自我复制；
2. 有切割位点；
3. 有遗传标记基因；
4. 对受体细胞无害、易分离。
目前通常利用的载体是“质粒”。质粒是能“友好求得真知，自己解答这个问题。
寄宿在细菌细胞内的小型的环状DNA。下面让我们通过插图一起来认识质粒，尤其要在质粒载体结构模式图上找出刚才归纳几个条件的具体体现。
生：找到“复制原点”──说明质粒能复制并能带着插入的目的基因一起复制。
找到“目的基因的插入位点”──说明质粒有切割位点。
找到“氨苄青霉素抗性基因”──说明有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。
找到此质粒来自大肠杆菌──说明没有危害，大肠杆菌是非致病菌，大肠杆菌分裂快，也便于从大量复制个体中分离出来。